本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)抗原p62的結(jié)構(gòu)功能預(yù)測與分子功能的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《鄭州大學(xué)》 2013年

腫瘤相關(guān)抗原p62的結(jié)構(gòu)功能預(yù)測與分子功能的應(yīng)用研究

葉華  

【摘要】：背景 腫瘤相關(guān)抗原(Tumor-associated antigen, TAA)是指細(xì)胞癌變的過程中,出現(xiàn)的一些新的抗原和過度表達(dá)的抗原的總稱。而在癌癥血清中也被許多研究證實有抗腫瘤相關(guān)抗原抗體的存在。這些抗腫瘤相關(guān)抗原抗體被許多研究者作為生物標(biāo)志物評價其在腫瘤診斷中的價值。腫瘤相關(guān)抗原p62是本實驗室通過對肝癌病人血清進(jìn)行cDNA文庫篩選的方法克隆得到的與肝癌相關(guān)的類胰島素樣生長因子2的mRNA結(jié)合蛋白質(zhì)(insulin-like growth factor2mRNA binding protein2,IGF2BP2),因為該蛋白質(zhì)分子量為62kDa,所以又被命名為p62。現(xiàn)在,許多學(xué)者又將聯(lián)合與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的多種抗腫瘤相關(guān)抗原抗體進(jìn)行綜合研究,以評價其在腫瘤發(fā)生過程中的意義。 目的 1.對腫瘤相關(guān)抗原p62的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)和功能以及與其相互作用的蛋白質(zhì)進(jìn)行預(yù)測,為后續(xù)實現(xiàn)p62蛋白分子晶體的構(gòu)建制備和研究其三級結(jié)構(gòu)提供初始數(shù)據(jù)支持,為以后針對p62分子功能及信號通路的研究提供方向和數(shù)據(jù)指導(dǎo)； 2.利用RNA干擾技術(shù)沉默p62在人肝癌細(xì)胞系的表達(dá),觀察它對肝癌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng),為探索腫瘤相關(guān)抗原p62的分子功能和肝癌的臨床免疫診斷提供實驗依據(jù)； 3.評價p62聯(lián)合其他9種腫瘤相關(guān)抗原微陣列在乳腺癌診斷中的價值。 方法 1.采用p62的蛋白質(zhì)序列和基因序列,使用PSIPRED2.0、SSpro、Jpred、 PDB、PROF-predictprotein預(yù)測網(wǎng)站對蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)(螺旋,直鏈,無規(guī)則卷曲進(jìn)行預(yù)測。 2.采用p62的蛋白質(zhì)序列和基因序列,利用DNASTAR預(yù)測軟件和String預(yù)測網(wǎng)站用于對p62的蛋白質(zhì)特性和互作蛋白質(zhì)進(jìn)行預(yù)測。 3.設(shè)計構(gòu)建p62基因的含有shRNAs(short hairpin RNA)干擾載體,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),轉(zhuǎn)染入人類肝癌細(xì)胞株SNU-449中,利用Western-blot技術(shù)檢測p62基因的沉默表達(dá)情況；選取有效基因沉默表達(dá)的細(xì)胞系,使用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀觀察轉(zhuǎn)染效率,檢測轉(zhuǎn)染后SNU-449細(xì)胞的生長曲線。 4.利用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測乳腺癌患者血清和正常血清中十種抗TAAs ((Imp1,p62,Koc, p53, c-myc, survivin, p16, cyclin B1, cyclinD1, CDK2)抗體,并使用流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)方法評價結(jié)果的真實性。 結(jié)果 1.研究結(jié)果顯示,p62蛋白的抗原表位指數(shù)較高,螺旋區(qū)域所占二級結(jié)構(gòu)中三種構(gòu)象的百分比可能為21%,直鏈區(qū)域可能為28%,無規(guī)則區(qū)域可能為51%。 2.互作蛋白質(zhì)的預(yù)測提示p62可能與9種蛋白質(zhì)有相互作用。這9種蛋白質(zhì)為IGF2(insulin-like growth factor2), CDKAL1:(CDK5regulatory subunit associated protein1-like1), SLC30A8(solute carrier family30, member8), HHEX (hematopoietically expressed homeobox), TCF7L2(transcription factor7-like2), FTO (fat mass and obesity associated), TCF7(transcription factor7), WFS1(Wolfram syndrome1), KCNJ11(potassium inwardly-rectifying channel, subfamily J, member11)。除了參與胰島素樣生長因子的轉(zhuǎn)錄之外,有可能也參與到細(xì)胞內(nèi)鋅轉(zhuǎn)運,鈣離子濃度調(diào)節(jié),淋巴細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄激活等細(xì)胞活動。 3.針對p62基因的4個靶位點序列(211-231,1102-1122,1126-1146,1369-1389)構(gòu)建的RNA干擾載體轉(zhuǎn)染入人類肝癌系SNU-449細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)靶位點位于1369-1389的干擾載體對應(yīng)的p62蛋白表達(dá)量下降最為明顯,提示p62的RNA干擾載體能沉默p62蛋白在肝癌細(xì)胞SNU-449中的表達(dá)；p62基因的RNA干擾載體轉(zhuǎn)入SNU-449細(xì)胞后,細(xì)胞增殖出現(xiàn)了明顯的抑制,提示p62蛋白能促進(jìn)人類肝癌細(xì)胞SNU-449的細(xì)胞生長。 4.將p62蛋白作為微陣列芯片中的一種腫瘤相關(guān)抗原,與微陣列中其它多種腫瘤相關(guān)抗原聯(lián)合對乳腺癌患者進(jìn)行了檢測。單個TAAs在乳腺癌中的抗體出現(xiàn)頻率介于7.3%和22.0%之間。但是在對乳腺癌患者血清的檢測中,隨著TAAs的數(shù)目被依次逐個增加到8個時,抗體的陽性反應(yīng)逐步提高,靈敏度達(dá)到61.0%,特異度達(dá)到89.0%,陽性和陰性似然比分別為5.545和0.438,表明8個TAAs平行檢測乳腺癌的臨床診斷價值很高。PPV和NPV分別為73.5%和82.0%,表明聯(lián)合8個TAAs抗體的檢測顯著提高了診斷的準(zhǔn)確度。一致率和kappa值分別為79.7%和0.52,這表明這個試驗的觀察值與實際值之間存在中等范圍的同步性。 結(jié)論 1.p62蛋白是可以以抗原形式存在的、表面比較光滑的柔性可溶性蛋白質(zhì)。 2.對與p62蛋白相互作用的蛋白預(yù)測結(jié)果提示,p62蛋白可能對腫瘤細(xì)胞內(nèi)一些離子的穩(wěn)定和濃度有一定的影響,從而影響腫瘤細(xì)胞的生長、分化。另一方面,p62蛋白也可能參與了人類2型糖尿病的致病機(jī)理。 3.p62基因的有效沉默表達(dá)靶位點位于基因序列1369-1389處。shRNA干擾p62可以明顯降低人類肝癌細(xì)胞系SNU-449中的p62基因的表達(dá)并抑制人類肝癌細(xì)胞SNU-449細(xì)胞增殖；同時表明p62可以促進(jìn)人類肝癌細(xì)胞SNU-449的增殖。 4.包含p62在內(nèi)的8種(c-myc, survivin, cyclinBl, cyclinDl,p62,p53, p16, CDK2)腫瘤相關(guān)抗原微陣列檢測乳腺癌,對乳腺癌診斷具有較高的價值,為臨床中乳腺癌的診斷提供一種全新的方法。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R73-3
【目錄】：

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6 曾希;蘇琦;易嵐;唐海林;廖愛軍;解娜;劉亮;;血清蛋白質(zhì)組分析方法篩選人胃癌相關(guān)抗原[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

7 劉華;楊煒;;三維腫瘤生物模型的創(chuàng)建:體外腫瘤生物學(xué)的研究及其應(yīng)用[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

8 鞠熀先;;腫瘤細(xì)胞毒效應(yīng)和免疫表達(dá)檢測與細(xì)胞傳感[A];中國化學(xué)會第十三屆有機(jī)分析與生物分析學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

9 周偉強(qiáng);宋今丹;;γ—干擾素誘導(dǎo)人大腸癌細(xì)胞系CCL229的作用[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第八屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2003年

10 蔡輝;黃智華;石磊;李艷梅;;新型MUC1糖肽腫瘤疫苗的研究進(jìn)展[A];2011年全國藥物化學(xué)學(xué)術(shù)會議——藥物的源頭創(chuàng)新論文摘要集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 湖南省腫瘤醫(yī)院 李穗生;[N];大眾衛(wèi)生報;2003年

2 由甲;[N];大眾衛(wèi)生報;2002年

3 寧習(xí)源 記者 于莘明;[N];科技日報;2003年

4 本報記者 馬艷紅;[N];中國醫(yī)藥報;2003年

5 馮衛(wèi)東;[N];科技日報;2010年

6 本報特約撰稿人 陸志城;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

7 楊霞 寧習(xí)源;[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

8 特約記者李曉穗;[N];健康報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何智慧;毛細(xì)管電泳酶免疫分析電化學(xué)檢測及應(yīng)用[D];山東大學(xué);2002年

2 馮鉅濤;蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選肝癌血清標(biāo)記物[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 王兆源;IL-18在人卵巢癌細(xì)胞系及正常卵巢上皮中的表達(dá)及功能分析[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2002年

4 楊繼要;肺腺癌腫瘤相關(guān)抗原的篩選鑒定及克隆表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2006年

5 楊芳;血清蛋白質(zhì)組技術(shù)篩選人肺鱗癌相關(guān)抗原[D];中南大學(xué);2007年

6 高紅軍;食管癌自身抗體和血清小分子蛋白的鑒定[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

7 王鵬飛;泌尿生殖系腫瘤無限細(xì)胞系的建立及腎癌高轉(zhuǎn)移株的篩選和刺激同源CTL的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

8 李嵐;肝癌相關(guān)抗原及自身抗體的血清蛋白質(zhì)組及蛋白芯片分析[D];浙江大學(xué);2008年

9 王益民;葉酸代謝酶基因多態(tài)性、MAGE A_1、CAGA基因去甲基化與食管癌生物學(xué)行為的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

10 關(guān)松磊;肺癌和食管癌外周血免疫調(diào)節(jié)因子及腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體研究[D];吉林大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田亞東;~(18)F-FDG符合線路hPET/CT顯像結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原在肺部孤立性結(jié)節(jié)良惡性診斷應(yīng)用的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

2 賓業(yè)鴻;肝癌相關(guān)抗原SMP-30抗體血清學(xué)篩選及其意義研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

3 劉會娟;腫瘤相關(guān)抗原的抗體檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的價值[D];鄭州大學(xué);2009年

4 趙敏敏;KINECTIN與神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的相關(guān)性[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2009年

5 王淑娟;抗人肺癌單克隆抗體N-35及肺癌相關(guān)抗原N35蛋白的純化[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年

6 程晶娟;非小細(xì)胞肺癌中腫瘤相關(guān)抗原RCAS1的表達(dá)和意義[D];華中科技大學(xué);2006年

7 曲佳;再生障礙性貧血骨髓CD64～+細(xì)胞比例及其對造血的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

8 劉靖;利用免疫蛋白組學(xué)技術(shù)篩選和鑒定胃癌腫瘤相關(guān)抗原及血清腫瘤標(biāo)記物[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

9 黃海燕;抗結(jié)腸腫瘤相關(guān)抗原單克隆抗體的制備及鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 孫花;肝癌相關(guān)抗原KINECTIN的表達(dá)、純化及其血清學(xué)分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)抗原p62的結(jié)構(gòu)功能預(yù)測與分子功能的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：162557