本文選題：上皮性卵巢癌　切入點：MACC1　出處：《鄭州大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：卵巢癌是婦科領(lǐng)域比較常見的惡性腫瘤,也是死亡率較高的婦科腫瘤之一。有資料表明,中國卵巢癌的發(fā)病率為十萬分之五,且呈上升趨勢。隨著新的高效低毒化療藥物的臨床應(yīng)用,卵巢癌預(yù)后有所改善,但其5年生存率仍徘徊在50%左右。且其復(fù)發(fā)率較高,約為80%,在治療起始后的3年內(nèi)極容易復(fù)發(fā),預(yù)后較差。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)是一種和腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因,能促進結(jié)腸癌細胞發(fā)生增殖侵襲,并促使肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)誘導(dǎo)下結(jié)腸癌細胞的擴散轉(zhuǎn)移的發(fā)生,是HGF/C-met(c-metprotoncogene)信號通路中met基因的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。多項研究證實,在胃癌、肝癌和胰腺癌等多種惡性腫瘤組織中均可檢測到高表達的HGF和C-met,其過表達與惡性腫瘤的復(fù)發(fā)和預(yù)后不良存在相關(guān)性。目前卵巢癌的主要治療方式為手術(shù)治療和化療聯(lián)合進行。近年來,隨著臨床和科研的不斷深入,卵巢癌治療方案有所調(diào)整,但臨床治療效果及患者預(yù)后并未明顯提升。鉑類化合物被證明是治療卵巢癌最有效的化療藥物,但其化療耐藥的存在使得其5年生存率僅為50%左右。目前的有關(guān)研究比較多地集中在闡述卵巢癌患者的致病機理,但是迄今為止上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的分子生物學(xué)相關(guān)機制并未得到明確闡述�；熌退幍漠a(chǎn)生是制約卵巢癌患者預(yù)后改善的重要因素,因此研究化療耐藥機制、尋找有效的分子治療靶點及低毒高效耐藥逆轉(zhuǎn)劑,具有比較廣闊的臨床應(yīng)用前景。目的對我院收治的卵巢癌患者的基本臨床及病理資料進行分析,結(jié)合患者的生存時間,探索影響卵巢癌患者預(yù)后的因素。基于課題組前期對MACC1與卵巢癌的相關(guān)關(guān)系的初步分析,更深層次地研究MACC1、HGF、C-met和HE4蛋白在卵巢癌中的表達,探討其在卵巢癌發(fā)展中的作用和相關(guān)性,并為判斷預(yù)后提供觀察線索。通過研究MACC1干擾對上皮性卵巢癌細胞以及癌耐藥細胞對順鉑敏感性的變化,進一步探索MACC1在卵巢癌化療耐藥中的作用,同時通過MACC1基因在細胞內(nèi)的耐藥性研究為臨床上逆轉(zhuǎn)卵巢癌化療耐藥、提高化療敏感性提供新的理論,并通過體內(nèi)實驗進一步探討MACC1在卵巢癌移植瘤增殖中的作用。方法1.采用統(tǒng)計學(xué)的Pearson卡方檢驗、Kaplan-Meier生存曲線、log-rank檢驗和Cox回歸等方法來分析上皮性卵巢癌患者的臨床病理特征與術(shù)后預(yù)后特點,明確預(yù)后危險因素及影響預(yù)后的獨立因素;2.采用組織芯片技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色等方法獲取MACC1、C-met、HGF和HE4在癌組織和癌旁組織中的表達率;3.采用統(tǒng)計學(xué)的Pearson卡方檢驗、Kaplan-Meier生存曲線、log-rank檢驗和Cox回歸等方法分析不同表達率下的上皮性卵巢癌患者的臨床病理特征及預(yù)后情況;4.利用細胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)順鉑耐藥和敏感細胞株,采用實時熒光定量PCR以及Western blot的方法,檢測不同分組中MACC1在m RNA和蛋白水平表達情況,并采用MTT法來評價不同組對順鉑化療敏感性的變化情況;5.采用流式細胞學(xué)檢測不同組別順鉑加藥前后細胞凋亡情況,采用實時熒光定量PCR以及Western blot的方法來檢測ERK1/2及p-ERK1/2、cleaved caspase-3和caspase-3蛋白的變化情況,同時分析加入U0126后對上述蛋白表達的影響;6.收集細胞培養(yǎng)中經(jīng)過不同處理的細胞,采用RT-PCR的方法以及Western blot來檢測不同處理組中裸鼠的MACC1 m RNA和蛋白表達,并記錄不同處理組裸鼠移植瘤的重量及腫瘤的生長速度。結(jié)果1.淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分化、殘余腫瘤直徑和化療情況是影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的獨立因素,對上皮性卵巢癌患者預(yù)后的危險大小依次為:淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病理分化化療情況臨床分期殘余腫瘤直徑;2.MACC1、C-met、HGF和HE4在卵巢癌組織中的表達率明顯高于其在癌旁組織中的表達,其在腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織病理分化、殘余腫瘤直徑和化療情況中存在差異;3.MACC1、C-met、HGF和HE4高表達患者的中位生存期低于低表達者,其表達水平兩兩之間存在相關(guān)性,存在協(xié)同作用;4.MACC1基因沉默組的MACC1 m RNA和蛋白水平低于空白組和空質(zhì)粒組,MACC1沉默組的順鉑半數(shù)抑制濃度(IC50)低于空白組和空質(zhì)粒組,轉(zhuǎn)染p-super-EGFP-MACC1 sh RNA組MACC1基因表達下調(diào),其m RNA和蛋白水平較未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組明顯下降;5.同濃度順鉑對MACC1沉默的SKOV3/DDP的抑制率顯著高于其對轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染組的抑制率,MACC1沉默組細胞增殖速度低于空質(zhì)粒組與未轉(zhuǎn)染組,MACC1基因沉默的細胞與未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組相比,caspase-3、p-ERK1/2蛋白含量明顯的降低,而cleaved caspase-3則明顯升高;6.pc DNA-MACC1組中的裸鼠腫瘤組織中MACC1的m RNA表達、蛋白表達、裸鼠移植瘤的重量及腫瘤的生長速度均高于未處理組和空載體轉(zhuǎn)染組,未處理組和空載體轉(zhuǎn)染組之間無差異。結(jié)論1.MACC1基因表達異常與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系,MACC1、C-met、HGF和HE4之間的協(xié)同作用與上皮性卵巢癌細胞的惡性轉(zhuǎn)化相關(guān);2.MACC1基因在SKOV3/DDP細胞中的表達呈現(xiàn)明顯升高趨勢,沉默MACC1能有效逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP細胞對順鉑的耐藥性;3.MACC1有可能參與到卵巢癌對順鉑的敏感性調(diào)節(jié),其可能通過ERK通路調(diào)節(jié)增殖、凋亡及順鉑敏感性;4.MACC1在上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中會產(chǎn)生多樣的生物學(xué)行為改變,可能成為治療上皮性卵巢癌的新型分子靶點。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31

【參考文獻】

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1 張瑞濤;史惠蓉;黃好亮;陳志敏;劉惠娜;苑中甫;;MACC1、HGF和C-met蛋白在卵巢上皮性癌中的表達及其意義[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2011年09期

2 ;Over-expression of Metastasis-associated in Colon Cancer-1 (MACC1) Associates with Better Prognosis of Gastric Cancer Patients[J];Chinese Journal of Cancer Research;2011年02期

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本文編號：1613671