本文選題：上皮性卵巢癌　切入點(diǎn)：MACC1　出處：《鄭州大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：卵巢癌是婦科領(lǐng)域比較常見的惡性腫瘤,也是死亡率較高的婦科腫瘤之一。有資料表明,中國卵巢癌的發(fā)病率為十萬分之五,且呈上升趨勢(shì)。隨著新的高效低毒化療藥物的臨床應(yīng)用,卵巢癌預(yù)后有所改善,但其5年生存率仍徘徊在50%左右。且其復(fù)發(fā)率較高,約為80%,在治療起始后的3年內(nèi)極容易復(fù)發(fā),預(yù)后較差。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)是一種和腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因,能促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生增殖侵襲,并促使肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)誘導(dǎo)下結(jié)腸癌細(xì)胞的擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的發(fā)生,是HGF/C-met(c-metprotoncogene)信號(hào)通路中met基因的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。多項(xiàng)研究證實(shí),在胃癌、肝癌和胰腺癌等多種惡性腫瘤組織中均可檢測(cè)到高表達(dá)的HGF和C-met,其過表達(dá)與惡性腫瘤的復(fù)發(fā)和預(yù)后不良存在相關(guān)性。目前卵巢癌的主要治療方式為手術(shù)治療和化療聯(lián)合進(jìn)行。近年來,隨著臨床和科研的不斷深入,卵巢癌治療方案有所調(diào)整,但臨床治療效果及患者預(yù)后并未明顯提升。鉑類化合物被證明是治療卵巢癌最有效的化療藥物,但其化療耐藥的存在使得其5年生存率僅為50%左右。目前的有關(guān)研究比較多地集中在闡述卵巢癌患者的致病機(jī)理,但是迄今為止上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的分子生物學(xué)相關(guān)機(jī)制并未得到明確闡述。化療耐藥的產(chǎn)生是制約卵巢癌患者預(yù)后改善的重要因素,因此研究化療耐藥機(jī)制、尋找有效的分子治療靶點(diǎn)及低毒高效耐藥逆轉(zhuǎn)劑,具有比較廣闊的臨床應(yīng)用前景。目的對(duì)我院收治的卵巢癌患者的基本臨床及病理資料進(jìn)行分析,結(jié)合患者的生存時(shí)間,探索影響卵巢癌患者預(yù)后的因素。基于課題組前期對(duì)MACC1與卵巢癌的相關(guān)關(guān)系的初步分析,更深層次地研究MACC1、HGF、C-met和HE4蛋白在卵巢癌中的表達(dá),探討其在卵巢癌發(fā)展中的作用和相關(guān)性,并為判斷預(yù)后提供觀察線索。通過研究MACC1干擾對(duì)上皮性卵巢癌細(xì)胞以及癌耐藥細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的變化,進(jìn)一步探索MACC1在卵巢癌化療耐藥中的作用,同時(shí)通過MACC1基因在細(xì)胞內(nèi)的耐藥性研究為臨床上逆轉(zhuǎn)卵巢癌化療耐藥、提高化療敏感性提供新的理論,并通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討MACC1在卵巢癌移植瘤增殖中的作用。方法1.采用統(tǒng)計(jì)學(xué)的Pearson卡方檢驗(yàn)、Kaplan-Meier生存曲線、log-rank檢驗(yàn)和Cox回歸等方法來分析上皮性卵巢癌患者的臨床病理特征與術(shù)后預(yù)后特點(diǎn),明確預(yù)后危險(xiǎn)因素及影響預(yù)后的獨(dú)立因素;2.采用組織芯片技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色等方法獲取MACC1、C-met、HGF和HE4在癌組織和癌旁組織中的表達(dá)率;3.采用統(tǒng)計(jì)學(xué)的Pearson卡方檢驗(yàn)、Kaplan-Meier生存曲線、log-rank檢驗(yàn)和Cox回歸等方法分析不同表達(dá)率下的上皮性卵巢癌患者的臨床病理特征及預(yù)后情況;4.利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)順鉑耐藥和敏感細(xì)胞株,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及Western blot的方法,檢測(cè)不同分組中MACC1在m RNA和蛋白水平表達(dá)情況,并采用MTT法來評(píng)價(jià)不同組對(duì)順鉑化療敏感性的變化情況;5.采用流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)不同組別順鉑加藥前后細(xì)胞凋亡情況,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及Western blot的方法來檢測(cè)ERK1/2及p-ERK1/2、cleaved caspase-3和caspase-3蛋白的變化情況,同時(shí)分析加入U(xiǎn)0126后對(duì)上述蛋白表達(dá)的影響;6.收集細(xì)胞培養(yǎng)中經(jīng)過不同處理的細(xì)胞,采用RT-PCR的方法以及Western blot來檢測(cè)不同處理組中裸鼠的MACC1 m RNA和蛋白表達(dá),并記錄不同處理組裸鼠移植瘤的重量及腫瘤的生長速度。結(jié)果1.淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分化、殘余腫瘤直徑和化療情況是影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素,對(duì)上皮性卵巢癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)大小依次為:淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病理分化化療情況臨床分期殘余腫瘤直徑;2.MACC1、C-met、HGF和HE4在卵巢癌組織中的表達(dá)率明顯高于其在癌旁組織中的表達(dá),其在腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織病理分化、殘余腫瘤直徑和化療情況中存在差異;3.MACC1、C-met、HGF和HE4高表達(dá)患者的中位生存期低于低表達(dá)者,其表達(dá)水平兩兩之間存在相關(guān)性,存在協(xié)同作用;4.MACC1基因沉默組的MACC1 m RNA和蛋白水平低于空白組和空質(zhì)粒組,MACC1沉默組的順鉑半數(shù)抑制濃度(IC50)低于空白組和空質(zhì)粒組,轉(zhuǎn)染p-super-EGFP-MACC1 sh RNA組MACC1基因表達(dá)下調(diào),其m RNA和蛋白水平較未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組明顯下降;5.同濃度順鉑對(duì)MACC1沉默的SKOV3/DDP的抑制率顯著高于其對(duì)轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染組的抑制率,MACC1沉默組細(xì)胞增殖速度低于空質(zhì)粒組與未轉(zhuǎn)染組,MACC1基因沉默的細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組相比,caspase-3、p-ERK1/2蛋白含量明顯的降低,而cleaved caspase-3則明顯升高;6.pc DNA-MACC1組中的裸鼠腫瘤組織中MACC1的m RNA表達(dá)、蛋白表達(dá)、裸鼠移植瘤的重量及腫瘤的生長速度均高于未處理組和空載體轉(zhuǎn)染組,未處理組和空載體轉(zhuǎn)染組之間無差異。結(jié)論1.MACC1基因表達(dá)異常與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系,MACC1、C-met、HGF和HE4之間的協(xié)同作用與上皮性卵巢癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化相關(guān);2.MACC1基因在SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)呈現(xiàn)明顯升高趨勢(shì),沉默MACC1能有效逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性;3.MACC1有可能參與到卵巢癌對(duì)順鉑的敏感性調(diào)節(jié),其可能通過ERK通路調(diào)節(jié)增殖、凋亡及順鉑敏感性;4.MACC1在上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中會(huì)產(chǎn)生多樣的生物學(xué)行為改變,可能成為治療上皮性卵巢癌的新型分子靶點(diǎn)。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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1 張瑞濤;史惠蓉;黃好亮;陳志敏;劉惠娜;苑中甫;;MACC1、HGF和C-met蛋白在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及其意義[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年09期

2 ;Over-expression of Metastasis-associated in Colon Cancer-1 (MACC1) Associates with Better Prognosis of Gastric Cancer Patients[J];Chinese Journal of Cancer Research;2011年02期

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本文編號(hào)：1613671