發(fā)布時(shí)間：2018-03-12 23:05

  本文選題：化療　切入點(diǎn)：5-FU　出處：《武漢大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分葛根素對(duì)人肝癌細(xì)胞系SMMC7721增殖和凋亡作用的影響及機(jī)制研究背景與目的：多個(gè)試驗(yàn)研究結(jié)果顯示葛根素具有抗腫瘤效果,但目前無研究證實(shí)其對(duì)肝癌細(xì)胞的作用,該部分實(shí)驗(yàn)的目的是證明葛根素具有抗肝癌細(xì)胞的活性,與5-FU聯(lián)合有協(xié)同效應(yīng),并探討其可能的機(jī)制。方法：該實(shí)驗(yàn)選擇的是肝癌細(xì)胞系SMMC7721,首先進(jìn)行細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)。然后采用CCK-8活體細(xì)胞染色吸收法分別檢測(cè)不同劑量葛根素和5-FU單獨(dú)或聯(lián)合治療對(duì)SMMC7721細(xì)胞的生長抑制作用。并通過中效原理來評(píng)價(jià)聯(lián)合效果。采用細(xì)胞凋亡-Hoechst 33258染色試劑盒和annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒分別檢測(cè)凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征和凋亡百分率。采用Western blot檢測(cè)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)量。結(jié)果：6400μM濃度的葛根素治療SMMC7721肝癌細(xì)胞平均(標(biāo)準(zhǔn)差)生長抑制率達(dá)到95.56(0.81)%,而640 μM濃度的葛根素治療SMMC7721肝癌細(xì)胞平均(標(biāo)準(zhǔn)差)生長抑制率也達(dá)到了75.91(3.54)%。葛根素與5-Fu聯(lián)合治療,當(dāng)有效率在0.2555和0.7420之間時(shí),聯(lián)合指數(shù)值(CI)小于1。葛根素或5-FU藥物治療組中可以看到亮的染色質(zhì)凝聚和核破裂；與正常對(duì)照組相比,葛根素或5-FU單藥治療組中細(xì)胞凋亡率顯著增加。而與葛根素或5-Fu單獨(dú)治療相比,聯(lián)合治療組凋亡細(xì)胞的百分率增加更顯著。分子水平檢測(cè)結(jié)果顯示,Bax蛋白表達(dá)量在聯(lián)合用藥組最高,而Bcl-2正好與之相反。結(jié)論：葛根素具有抗肝癌細(xì)胞的活性,聯(lián)合5-FU用藥能有效抑制肝癌細(xì)胞SMMC7721的生長,促進(jìn)其凋亡。低劑量的葛根素可明顯增強(qiáng)5-FU對(duì)肝癌細(xì)胞抑制作用的敏感性。其可能的機(jī)制與Bax蛋白表達(dá)量增高,Bcl-2蛋白表達(dá)量減少有關(guān)。第二部分葛根素聯(lián)合5-FU對(duì)肝癌細(xì)胞作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究目的：第二部分實(shí)驗(yàn)從體內(nèi)水平驗(yàn)證了葛根素和5-FU分別具有抗肝癌細(xì)胞系SMMC7721的作用,其聯(lián)合治療SMMC7721肝癌細(xì)胞的療效更優(yōu)于葛根素或5-FU單獨(dú)治療。方法：本部分研究通過模擬體內(nèi)實(shí)驗(yàn)完成。建立裸鼠SMMC7721肝癌細(xì)胞腫瘤種植模型。將葛根素或5-FU分別單獨(dú)和聯(lián)合注射到此肝癌種植模型裸鼠,檢測(cè)此裸鼠腫瘤的體積及重量,計(jì)算其腫瘤生長抑制率。HE染色觀察形態(tài)學(xué)變化,通過TUNEL原理用原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡。同時(shí)還觀察藥物的毒副作用。結(jié)果：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與葛根素或5-FU單獨(dú)治療相比,聯(lián)合治療組凋亡細(xì)胞的百分率顯著增加。葛根素單獨(dú)治療組腫瘤體積抑制率是70.58%,5-FU單獨(dú)治療組腫瘤體積抑制率為76.26%,而聯(lián)合治療組腫瘤體積抑制率為93.11%；葛根素單獨(dú)治療組腫瘤重量抑制率是46.20%,5-FU單獨(dú)治療組腫瘤重量抑制率為49.86%,而聯(lián)合治療組腫瘤重量抑制率為75.21%。AST、ALT等血清學(xué)指標(biāo)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,無明顯毒副作用產(chǎn)生。結(jié)論：與單獨(dú)治療組相比,葛根素聯(lián)合5-FU對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞有顯著的生長抑制作用,并促進(jìn)其凋亡,同時(shí)沒有增加其毒副作用。這說明葛根素聯(lián)合5-FU治療SMMC7721肝癌細(xì)胞有協(xié)同作用,可增強(qiáng)5-FU對(duì)肝癌細(xì)胞作用的敏感性,為臨床應(yīng)用葛根素治療肝癌提供了一定的理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:The first part of Puerarin effects on human hepatocellular carcinoma cell line SMMC7721 proliferation and apoptosis and its mechanism research background and objective: a number of test results showed that puerarin has anti-tumor effect, but no studies have confirmed on HCC cells, part of the experiment is to prove that puerarin has anti hepatoma activity. And 5-FU has a synergistic effect, and to explore its possible mechanism. Methods: the experiment is the choice of hepatocellular carcinoma cell line SMMC7721 cells were first subjected to recovery and training. Then the CCK-8 cell staining method was used to detect the in vivo absorption of different doses of puerarin and 5-FU treatment alone or in combination on the growth inhibition of SMMC7721 cells and through. The effect of principle to evaluate the combined effect of cell apoptosis by -Hoechst. Apoptotic cells were detected in 33258 staining kit and annexin V/PI apoptosis detection kit The morphological characteristics and the percentage of apoptosis by Western blot detection of Bax, the expression of Bcl-2 protein. Results: 6400 M concentration of Puerarin in the treatment of hepatocellular carcinoma cell SMMC7721 mean (standard deviation) growth inhibition rate reached 95.56 (0.81)%, and 640 M concentration of Puerarin in the treatment of SMMC7721 liver cancer cells mean (standard deviation) the growth inhibition rate reached 75.91 (3.54)% of Puerarin Combined with 5-Fu treatment, when the efficiency between 0.2555 and 0.7420, the joint index (CI) less than 1. puerarin or 5-FU drug treatment group can be seen in chromatin condensation and nuclear bright burst; compared with the normal control group, the apoptosis of Puerarin cytokines or 5-FU monotherapy group was significantly increased. Compared with Puerarin or compared to 5-Fu treatment alone, the percentage of apoptotic cells in the combined treatment group increased significantly. The detection results of molecular level showed that Bax protein expression was the highest in the combination group, and Bcl -2 is the opposite. Conclusion: Puerarin has anti hepatoma activity, in combination with 5-FU can effectively inhibit the growth of SMMC7721 cells and promote its apoptosis. Low dose of Puerarin can significantly enhance the sensitivity of inhibitory effect of 5-FU on liver cancer cells. The possible mechanism and the expression of Bax protein increased and Bcl-2 protein expression the second part to reduce the amount of Puerarin Combined with 5-FU on hepatocellular carcinoma cells in vivo Objective: the second part experiment of puerarin and 5-FU respectively with SMMC7721 against hepatocellular carcinoma cell lines from the body level, the combined treatment of human hepatocellular carcinoma cell line SMMC7721 is better than that of Puerarin or 5-FU alone treatment. Methods: this part the research completed by simulation experiments in vivo. Nude mice SMMC7721 cell tumor model. The puerarin or 5-FU separately and combined injection to liver cancer planting mode Type of nude mice. The volume and weight of the detection of tumors in nude mice, the growth inhibition rate of.HE staining was used to observe the morphological changes of the tumor is calculated through the principle of TUNEL, the cell apoptosis was detected by in situ cell death detection kit. We also observed the side effects of drugs. Results: in vivo experimental results show that with Puerarin or 5-FU alone treatment compared to the percentage the combined treatment group of apoptotic cells increased significantly. Puerarin alone treatment group, the inhibition rate of tumor volume was 70.58% 5-FU, separate the tumor volume inhibition rate was 76.26%, and the combined treatment group tumor volume inhibition rate was 93.11%; puerarin alone treatment group, tumor weight inhibition rate is 46.20%, 5-FU alone treatment group, tumor weight inhibition rate 49.86%, and the combined treatment group tumor weight inhibition rate was 75.21%.AST, no statistically significant differences between the serological markers of ALT, no significant side effects. Conclusion: alone The treatment group compared with Puerarin Combined with 5-FU significantly inhibited the growth of SMMC7721 cells and promote its apoptosis, but did not increase its toxicity. This shows that Puerarin Combined with 5-FU in the treatment of hepatocellular carcinoma SMMC7721 cells have a synergistic effect, can enhance the sensitivity of 5-FU for liver cancer, provides a theoretical basis for the clinical the application of Puerarin in the treatment of liver cancer.

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1603703