本文選題：膽管癌　切入點：ErbB4　出處：《湖南師范大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分ErbB4在人類膽管癌QBC939細胞系中的表達目的:研究ErbB4受體在人膽管癌QBC939細胞系細胞中的表達情況。方法:體外培養(yǎng)人膽管癌QBC939細胞系細胞,免疫熒光法檢測ErbB4在膽管癌細胞中的表達情況。結(jié)果:膽管癌QBC939細胞系中表達ErbB4蛋白。結(jié)論:人膽管癌QBC939細胞中表達人類第4表皮生長因子受體(ErBb4)。證明本課題組選用QBC939細胞系來進行后續(xù)體外實驗的可行性。第二部分阻斷ErbB4受體對膽管癌QBC939細胞系細胞的增殖、遷移及侵襲的影響目的:考察經(jīng)AG1478特異性抑制劑阻斷ErbB4受體對人膽管癌QBC939細胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響。方法:分別加入終濃度為0μmol/L,1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L的AG1478阻斷膽管癌細胞ErbB4受體,使用CCK-8法測量各組膽管癌細胞增殖情況,并利用SPSS軟件計算AG1478對人膽管癌QBC939細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50值)。分別使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L AG1478阻斷膽管癌細胞ErbB4受體,使用劃痕實驗檢測各組膽管癌細胞遷移能力的變化。分別使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L濃度AG1478阻斷膽管癌細胞ErbB4受體,使用Transwell小室法實驗檢測各組膽管癌細胞侵襲能力的變化。結(jié)果:AG1478以濃度依賴方式抑制QBC939細胞增殖,計算其IC50值為:49.14μmol/L。AG1478抑制ErbB4受體后,膽管癌QBC939細胞的遷移、侵襲能力減弱。結(jié)論:ErbB4抑制劑能在體外抑制人類膽管癌QBC939細胞增殖、遷移與侵襲。第三部分抑制ErbB4受體能下調(diào)iNOS表達目的:研究ErbB4受體實現(xiàn)其腫瘤生物學(xué)功能可能的涉及的分子機制。方法:使用50μmol/L濃度阻斷ErbB4受體,使用免疫蛋白印跡法測量阻斷前后細胞裂解液中iNOS含量,比較阻斷膽管癌細胞ErbB4受體能否抑制iNOS表達。分別使用濃度0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L的AG1478阻斷膽管癌細胞ErbB4受體,使用總一氧化氮檢測試劑盒檢測細胞培養(yǎng)液中NO含量變化。分別使用濃度0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L的AG1478阻斷膽管癌細胞ErbB4受體,使用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中VEGF含量變化。結(jié)果:AG1478抑制ErbB4受體后,膽管癌QBC939細胞裂解液中iNOS含量減少。AG1478抑制ErbB4受體后,膽管癌QBC939細胞培養(yǎng)上清液中NO、VEGF含量減少,間接反映iNOS表達減少。結(jié)論:ErbB4抑制劑能在體外抑制人類膽管癌QBC939細胞i NOS表達,并引起其下游NO以及相關(guān)因子VEGF分泌減少。
[Abstract]:Part I expression of ErbB4 in QBC939 Cell Line of Human Cholangiocarcinoma objective: to study the expression of ErbB4 receptor in QBC939 cell line of human cholangiocarcinoma. Methods: human cholangiocarcinoma QBC939 cell line was cultured in vitro. The expression of ErbB4 in cholangiocarcinoma cells was detected by immunofluorescence. Results: ErbB4 protein was expressed in QBC939 cell line of cholangiocarcinoma. Conclusion: the expression of human epidermal growth factor receptor ErBb4 in QBC939 cells of cholangiocarcinoma is confirmed by our research group. The feasibility of following in vitro experiment with QBC939 cell line. The second part blocked the proliferation of ErbB4 receptor on QBC939 cell line of cholangiocarcinoma. Objective: to investigate the effect of blocking ErbB4 receptor by specific inhibitor of AG1478 on proliferation, migration and invasion of human cholangiocarcinoma QBC939 cells. Methods: AG1478 of 50 渭 mol / L ~ 75 渭 mol / L ~ 100 渭 mol/L was added to 5 渭 mol / L ~ (5) 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) AG1478. The proliferation of cholangiocarcinoma cells in each group was measured by CCK-8 method, and the IC50 of AG1478 on QBC939 cells was calculated by SPSS software. The ErbB4 receptor was blocked by 0 渭 mol / L ~ 25 渭 mol / L ~ 50 渭 mol / L ~ (75 渭 mol / L) mol/L AG1478, respectively. The migration ability of cholangiocarcinoma cells in each group was detected by scratch test, and the ErbB4 receptor was blocked by 50 渭 mol / L ~ (75) 渭 mol / L ~ (75 渭 mol / L) AG1478 at 0 渭 mol / L ~ 25 渭 mol / L ~ (25) 渭 mol / L ~ (-1). Transwell chamber assay was used to detect the invasion ability of cholangiocarcinoma cells in each group. Results the proliferation of QBC939 cells was inhibited in a concentration-dependent manner, and the IC50 value of IC50 was calculated to be 1: 49.14 渭 mol/L.AG1478 to inhibit the migration of QBC939 cells in cholangiocarcinoma. Conclusion the inhibitor of ErbB4 can inhibit the proliferation of human cholangiocarcinoma QBC939 cells in vitro. Migration and invasion. Part 3: inhibition of ErbB4 receptor down-regulation of iNOS expression objective: to study the possible molecular mechanisms involved in the realization of tumor biological function by ErbB4 receptor. Methods: ErbB4 receptor was blocked with 50 渭 mol/L. The content of iNOS in cell lysate was measured by Western blot before and after blocking, and the inhibition of iNOS expression by ErbB4 receptor in cholangiocarcinoma cells was compared. AG1478 of 50 渭 mol / L ~ 50 渭 mol / L ~ 50 渭 mol / L ~ (75) 渭 mol/L was used to block ErbB4 receptor of cholangiocarcinoma cells, respectively. Total nitric oxide assay kit was used to detect the changes of no content in cell culture medium. AG1478 of 0 渭 mol / L ~ 25 渭 mol / L ~ (50 渭 mol / L) or 75 渭 mol / L ~ (75 渭 mol / L) was used to block ErbB4 receptor of cholangiocarcinoma cells, and ELISA method was used to detect the change of VEGF content in cell culture medium. The decrease of iNOS content in QBC939 cell lysate of cholangiocarcinoma. AG1478 inhibited the expression of ErbB4 receptor in QBC939 cell culture supernatant of cholangiocarcinoma, which indirectly reflected the decrease of iNOS expression. Conclusion: ErbB4 inhibitor can inhibit iNOS expression of human cholangiocarcinoma QBC939 cells in vitro. It also resulted in a decrease in the secretion of no and related factors VEGF in its downstream.
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.8

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本文編號：1592370