發(fā)布時間：2018-03-09 01:08

  本文選題：Talin-1　切入點：β3整合素分子　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景及目的胰腺癌發(fā)病隱匿、進(jìn)展快、預(yù)后極差。最新資料表明,胰腺癌的發(fā)病率逐年攀升,發(fā)病率和病死率在中國人群中均處于前十位,其中位生存時間不足6個月,同時大部分病人在診斷時已發(fā)生轉(zhuǎn)移失去手術(shù)機(jī)會。因此,尋找與胰腺癌轉(zhuǎn)移、預(yù)后相關(guān)的蛋白標(biāo)記迫在眉睫。整合素通路作為參與細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的重要通路,在本課題組前期結(jié)合CIPHER、現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫及文獻(xiàn)檢索三種方法進(jìn)行的初步信息學(xué)預(yù)測中,結(jié)果顯示Talin-1、β1及β3整合素分子作為整合素通路中重要的功能蛋白可能均與胰腺癌患者預(yù)后密切相關(guān)。Talin-1是一種存在于細(xì)胞質(zhì)中的蛋白,由頭部(talin head)及體部(talin rod)兩部分構(gòu)成,是調(diào)控細(xì)胞膜上整合素蛋白功能的重要分子。Talin-1蛋白可與整合素β亞基胞內(nèi)段的特定序列結(jié)合,從而激活整合素蛋白,增強(qiáng)其與細(xì)胞外基質(zhì)成分的結(jié)合能力,同時Talin-1蛋白的體部一方面可以募集肌動蛋白(actin)、黏著斑蛋白(vinculin)等一系列蛋白以調(diào)控細(xì)胞骨架的形成,影響細(xì)胞的運動能力,并通過調(diào)控黏著斑激酶(FAK)、SRC等細(xì)胞因子,從而對細(xì)胞的多條信號通路產(chǎn)生影響�，F(xiàn)階段已有實驗證明,Talin-1蛋白的表達(dá)水平與前列腺癌、乳腺癌、肝癌、口腔鱗癌、卵巢癌等多種癌癥密切相關(guān),研究表明其主要是通過調(diào)控如β1整合素分子、β3整合素分子等整合素蛋白發(fā)揮作用,同時Talin-1還表現(xiàn)出了組織特異性的特點。而在胰腺癌方面,Talin-1與患者臨床指標(biāo)、預(yù)后以及相關(guān)機(jī)制方面的研究尚處空白。本研究擬通過組織芯片技術(shù)及體外細(xì)胞實驗對胰腺癌中Talin-1表達(dá)與各項臨床指標(biāo)間的關(guān)系以及其對胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行初步研究。研究內(nèi)容1.研究胰腺癌組織中Talin-1蛋白的表達(dá)情況及與胰腺癌病人臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。2.研究不同胰腺癌細(xì)胞株細(xì)胞中Talin-1的表達(dá)及對胰腺癌細(xì)胞株細(xì)胞增殖、凋亡、粘附、侵襲及遷移的影響。3.研究Talin-1影響胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的相關(guān)機(jī)制。方法：1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry, IHC)檢測及對比分析手術(shù)切除經(jīng)病理診斷為胰腺癌及癌旁組織的標(biāo)本中Talin-1、β1整合素分子、β3整合素分子的表達(dá)情況,分析三者與胰腺癌臨床病理特點及胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。2. RT-PCR及Western blot技術(shù)檢測各胰腺癌細(xì)胞株細(xì)胞中Talin-1的基礎(chǔ)表達(dá)情況。應(yīng)用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)敲低高表達(dá)細(xì)胞株中的Talin-1表達(dá),并設(shè)置相應(yīng)的對照組。CCK8法以及EdU法檢測Talin-1對胰腺癌細(xì)胞增殖的影響；利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡；利用Fibronectin包被培養(yǎng)皿檢測Talin-1對細(xì)胞與外基質(zhì)粘附能力的影響；利用transwell法檢測Talin-1對胰腺癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)系；3.利用共轉(zhuǎn)染技術(shù)同時敲低Talin-1與β3整合素分子表達(dá),并設(shè)置僅敲低β3整合素分子表達(dá)的對照組,進(jìn)而對細(xì)胞的增殖、凋亡、粘附、遷移以及侵襲能力進(jìn)行檢測及對比分析。結(jié)果：1.與癌旁正常導(dǎo)管細(xì)胞相比,Talin-1在人胰腺癌組織的細(xì)胞漿中呈低表達(dá),并與胰腺癌的腫瘤位置顯著相關(guān),在β1整合素分子高表達(dá)亞組中,Talin-1表達(dá)與N分期顯著相關(guān)；在β1整合素分子以及β 3整合素分子高表達(dá)亞組中,Talin-1表達(dá)與患者總生存時間顯著相關(guān),同時在β 3整合素分子高表達(dá)亞組中,Talin-1表達(dá)是影響胰腺癌患者總生存時間的獨立因素。2. Talin-1的高表達(dá)能夠顯著提升胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的增殖以及與外基質(zhì)間的粘附能力,同時抑制其侵襲及遷移能力。3.在β 3整合素分子表達(dá)受到抑制的情況下,Talin-1的高表達(dá)同樣能夠顯著提升胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的增殖以及與外基質(zhì)間的粘附能力,然而相較于未抑制β3整合素分子時Talin-1高表達(dá)對胰腺癌細(xì)胞遷移及侵襲能力的抑制作用,在β 3整合素分子受抑制的情況下,Talin-1的表達(dá)水平對于細(xì)胞的遷移能力并沒有顯著性影響,甚至其高表達(dá)反而能夠促進(jìn)細(xì)胞的侵襲。結(jié)論：Talin-1在β1整合素分子以及β3整合素分子高表達(dá)的情況下與胰腺癌患者的臨床預(yù)后顯著相關(guān)；Talin-1可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖以及與外基質(zhì)間的粘附,同時其在β 3整合素分子的協(xié)同作用下能夠抑制細(xì)胞的侵襲與遷移；Talin-1蛋白并非單一通過與β3整合素分子的協(xié)同作用影響胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.9

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