本文選題：miRNA-432　切入點(diǎn)：肺腺癌　出處：《青島大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：肺腺癌是非小細(xì)胞肺癌中最常見(jiàn)的病理類型,且近幾十年在很多國(guó)家(包括中國(guó))的發(fā)病率呈現(xiàn)顯著增長(zhǎng)趨勢(shì)。肺癌的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的、循序漸進(jìn)的過(guò)程,其中包含了許多基因突變等過(guò)程,目前已有許多研究致力于揭示其中的機(jī)制。近年來(lái),miRNA在肺腺癌中的作用引發(fā)了研究者們極大的興趣,并且調(diào)整miRNA的表達(dá)對(duì)肺腺癌的增殖、轉(zhuǎn)移及化療藥物抵抗均有重要的作用。尤為重要的是,其在組織、血清及唾液中不正常的表達(dá)量也可作為肺腺癌患者診斷及預(yù)后的指標(biāo)。肺腺癌中許多miRNA表達(dá)不正常,但其機(jī)制不明,我們期望可以發(fā)現(xiàn)更多的miRNA在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。之前的研究中我們報(bào)道過(guò)miRNA在許多腫瘤中低表達(dá),如肝癌、卵巢癌和宮頸癌等。功能性研究表明,他在不同種類的細(xì)胞中扮演著癌基因或抑癌基因的功能。例如,miR-432下調(diào)ADAR1表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)惡性淋巴瘤細(xì)胞的增殖。相反的,miR-432通過(guò)調(diào)節(jié)LRP6,TRIM29和Pygo2,進(jìn)而通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制肝癌細(xì)胞的增殖。相似的,它可以通過(guò)調(diào)節(jié)成神經(jīng)細(xì)胞瘤的癌基因NESTIN/NES,RCOR1/COREST和MECP2,使細(xì)胞停滯在G0-G1期,從而降低細(xì)胞增殖。薈萃分析顯示miR-432表達(dá)水平對(duì)于無(wú)復(fù)發(fā)生存期是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素。然而,miR-432在肺腺癌中的表達(dá)和功能,以及其下游基因目前仍不清楚。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)miR-432的表達(dá)可以明顯的抑制肺腺癌組織生長(zhǎng),且其表達(dá)水平與腫瘤臨床分期密切相關(guān)。并且,Kaplan-Meier生存分析也顯示,miR-432低表達(dá)與肺腺癌患者的腫瘤特異性死亡相關(guān)。我們做了體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),在功能和機(jī)制上闡明miR-432過(guò)表達(dá)可抑制肺腺癌細(xì)胞增殖和肺腺癌形成。進(jìn)一步,我們發(fā)現(xiàn)miR-432過(guò)表達(dá)可增加肺腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性,E2F3和AXL是miR-432作用于肺腺癌的靶點(diǎn)�？傊�,我們的研究發(fā)現(xiàn)miR-432的異常表達(dá)對(duì)腫瘤的發(fā)展和耐藥是一個(gè)重要的影響因素,提示miR-432是一個(gè)潛在的肺癌治療靶點(diǎn)。研究目的1.明確miRNA-432在肺腺癌組織中的表達(dá)情況,及其表達(dá)情況與肺腺癌腫瘤分期的關(guān)系,miRNA-432表達(dá)與Ki-67表達(dá)的關(guān)系,尋找新的肺腺癌腫瘤標(biāo)志物。2.探索miRNA-432表達(dá)與肺腺癌細(xì)胞細(xì)胞周期的聯(lián)系,以明確miRNA-432調(diào)節(jié)肺腺癌細(xì)胞增殖的機(jī)制。3.闡明mirna-432表達(dá)與e2f3及axl表達(dá)的關(guān)系,以明確mirna-432通過(guò)何通路起到調(diào)節(jié)肺腺癌發(fā)生及發(fā)展的作用。4.探索肺腺癌對(duì)順鉑耐藥的機(jī)制,尋求通過(guò)調(diào)節(jié)mirna-432逆轉(zhuǎn)肺腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥的可能性,以最終提高肺腺癌患者對(duì)治療的療效,延長(zhǎng)肺腺癌患者的生存期。研究方法1.腫瘤樣本:所有的腫瘤樣本均來(lái)自于臨沂市人民醫(yī)院自2009年10月至2015年5月診斷的患者,經(jīng)手術(shù)切除得到腫瘤樣本。所有參與研究的患者均簽署知情同意書�；颊叩慕M織病理學(xué)診斷均根據(jù)修訂的國(guó)際腫瘤分期進(jìn)行。取得的肺腺癌患者腫瘤樣本均未經(jīng)化療及放療治療。共隨訪278例患者,時(shí)間從1月到78月(中位隨訪時(shí)間48月)。實(shí)驗(yàn)流程已通過(guò)山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)。2.細(xì)胞系及細(xì)胞培養(yǎng):人肺癌細(xì)胞系(a549和h1299)由atcc購(gòu)得。a549和h1299細(xì)胞系在含10%fbs的rpim-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境為5%co2、37℃。3.mts方法:在體外利用mts方法測(cè)定肺腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。將5000個(gè)細(xì)胞加入到96孔板中,將mirna、sirna和對(duì)照調(diào)整濃度為50nm,轉(zhuǎn)染細(xì)胞。檢測(cè)時(shí),將20μl的mts加入到每個(gè)孔中。96孔板在37℃孵育1小時(shí),室溫?fù)u晃10分鐘。在495nm測(cè)定吸收率,實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。4.brdu細(xì)胞增殖法:細(xì)胞重復(fù)5次加入到96孔板,調(diào)整細(xì)胞密度至2×104每孔。待細(xì)胞貼壁后,用mir-432和對(duì)照轉(zhuǎn)染細(xì)胞。根據(jù)操作流程(merckmillipore)通過(guò)測(cè)定brdu吸收率以明確細(xì)胞增殖。brdu吸收率利用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定(吸光度:450nm)。5.提取rna及實(shí)時(shí)定量pcr:石蠟包埋的組織切成10mm厚切片,脫蠟、水化后,蘇木精染色。利用解剖顯微鏡(leicaaslmd,wittsbaden,germany)觀察及顯微解剖腫瘤組織。使用mirneasyffpe試劑盒(qiagen,hilden,germany)提取mirna,此試劑盒可將福爾馬林固定的和石蠟包埋的組織切片中的所有rna,包括mirna全部提取純化出來(lái)。利用genecopoeia,inc.合成人mir-432的引物序列和小核rnau6,根據(jù)操作說(shuō)明利用sybrprimescriptmirnart-pcr試劑盒和sybr?greeni(toyobo,osaka,japan)測(cè)定它們的表達(dá)量。所有小核rnau6的表達(dá)量用以作為mirnas表達(dá)量的內(nèi)參。培養(yǎng)的細(xì)胞中全部rna的提取及e2f3和axl的定量方法如前所述。利用pcr產(chǎn)物的熔解曲線驗(yàn)證目標(biāo)產(chǎn)物的擴(kuò)增情況。6.sirna及質(zhì)粒的構(gòu)建:根據(jù)操作流程利用lipofectamine2000構(gòu)建sirna,空載體,mirna-432轉(zhuǎn)染仿制品及抑制物。模擬組的定義為僅加入轉(zhuǎn)染試劑的補(bǔ)充組。野生型和突變型e2f33’-utr和axl3?-utr由mir-432的目標(biāo)識(shí)別位點(diǎn)產(chǎn)生(種子序列)。利用saci和xhoi酶切位點(diǎn)將野生型和突變型的e2f3和axl的3?端基因非編碼區(qū)克隆到pmirglo雙熒光素酶報(bào)告載體。將人e2f3和axl基因亞克隆到pcdna3.1真核表達(dá)載體構(gòu)建。7.mirna靶基因預(yù)測(cè),熒光素酶活性檢測(cè)和western印跡法:使用targetscan和miranda分析mirna的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)及其目標(biāo)靶位點(diǎn)。hek293t細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染攜帶野生型或突變的靶序列的mirna靶pmirglo雙熒光素酶表達(dá)載體與mirna仿制物/抑制劑和仿制物/抑制劑對(duì)照組。細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后制備提取物,renilla熒光素酶比例用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)(promegacorp,madison,wi,usa)�？�-e2f3(ab50917,abcam),抗-axl(ab37861,abcam)和抗-gapdh(cellsignaling,danvers,ma,usa)兔多克隆抗體用以進(jìn)行westernblotting。8.免疫組化:免疫組化染色根據(jù)操作說(shuō)明使用標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)記的鏈霉親和素(lsab)試劑盒(dakocytomation,carpinteria,ca,usa)完成。玻片以兔多克隆抗體抗-e2f3(1:100稀釋,abcam,cambridge,ma,usa),抗-axl(1:100稀釋,cambridge,ma,usa)或小鼠單克隆抗體抗-ki67(1:100稀釋,dako,carpinteria,ca,usa)共孵育。肺腺癌樣品中的蛋白質(zhì)染色強(qiáng)度記錄方式如前。如石蠟包埋組織中10%或以上的醫(yī)保觀察到免疫反應(yīng)陽(yáng)性,則免疫組化定義為“高”,如免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞百分比低于10%,則免疫組化定義為“低”。9.流式細(xì)胞分析:按照之前的描述轉(zhuǎn)染細(xì)胞,用5g/ml的阿非迪霉素(sigma-21aldrich,munich,germany)再處理24小時(shí)。經(jīng)固定后,將a549和h1299細(xì)胞以1ml碘化丙啶染色(0.1mg/ml溶液中含0.1%tritonx-100),在黑暗中孵育30分鐘。樣品通過(guò)流式細(xì)胞儀分析(facscalibur,bd,franklinlakes,nj,usa)。10.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):6周齡雄性balb/c裸鼠嚴(yán)格按照國(guó)家衛(wèi)生研究院的的照看和使用實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的指導(dǎo)建議進(jìn)行。該操作流程由山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院科學(xué)調(diào)查委員會(huì)批準(zhǔn)。由負(fù)載mir-432-egfp的腺病毒或其陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞a549,收獲細(xì)胞并懸浮于matrigel/rpmi(1:1)中。在裸鼠皮下注射5×105個(gè)細(xì)胞。每周以卡尺測(cè)量移植瘤生長(zhǎng)。6周后處死小鼠,將腫瘤切除、稱重。11.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)至少包含三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn),取平均值±平均標(biāo)準(zhǔn)誤差。采用student’st檢驗(yàn)比較兩組間差異,采用單因素方差分析比較兩組以上組間差異。mir-432表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系以spearman法分析。kaplan-meier法分析后續(xù)的數(shù)據(jù)。p0.05則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)采用graphpad5.0進(jìn)行分析(graphpad,ca)。研究結(jié)果1.mir-432在肺腺癌中低表達(dá):我們對(duì)比分析了25個(gè)mirna在肺癌及癌旁組織的表達(dá)。11種mirna,包括mir-329,mir-202,mir-432,mir-302,mir-1470,mir-290,mir-514,mir-184,mir-625,mir-382和mir-689在肺腺癌組織中的表達(dá)明顯低于正常組織�；谥暗难芯�,我們選定mir-432為繼續(xù)研究的對(duì)象。首先,我們分析了278例肺腺癌組織和30例正常肺組織的mir-432表達(dá),研究證實(shí)mir-432在腫瘤組織中的表達(dá)明顯低于正常組織。接著,我們研究發(fā)腫瘤分期越晚mir-432表達(dá)越低。這些研究表明mir-432在肺腺癌病理進(jìn)展中的潛在作用。為了闡明mir-432在肺癌中的作用,我們首次分析了肺腺癌患者mir-432表達(dá)與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn),mir-432的低表達(dá)與臨床分期的升高有著明顯的相關(guān)性(p=0.030)。我們還利用生存分析研究了mir-432表達(dá)的高低與腫瘤患者生存的相關(guān)性,高表達(dá)mir-432的患者有著更低的死亡率,而mir-432低表達(dá)的患者死亡率更高(p=0.036)。ki-67是一個(gè)經(jīng)典的增殖標(biāo)志物,既往的研究發(fā)現(xiàn)ki-67是肺腺癌患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的影響因素。本研究中,免疫組化分析了腫瘤組織中ki-67的蛋白表達(dá)量,研究發(fā)現(xiàn),肺腺癌組織中,ki-67表達(dá)與mir-432表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(p=0.016)。2.體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)mir-432調(diào)節(jié)肺腺癌的增殖:我們選擇了a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞來(lái)研究mir-432對(duì)肺腺癌的生物學(xué)效應(yīng)。向肺腺癌細(xì)胞中導(dǎo)入mir-432明顯使得肺腺癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)mir-432。正如我們預(yù)期的,mts檢驗(yàn)證實(shí)異常表達(dá)的mir-432顯著降低了a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞的增殖率。而過(guò)表達(dá)mir對(duì)照的細(xì)胞的增值率與未導(dǎo)入的細(xì)胞并無(wú)差異。進(jìn)一步,我們?cè)隗w外通過(guò)應(yīng)用mir-432抑制劑研究mir-432缺失的功能性分析。研究結(jié)果表明mir-432抑制組較對(duì)照組有著更強(qiáng)的細(xì)胞活性,a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞均得到此結(jié)果。進(jìn)而,我們進(jìn)行了針對(duì)dna的brdu吸收率分析,結(jié)果表明,mir-432過(guò)表達(dá)的細(xì)胞明顯吸收率更低,而對(duì)照組細(xì)胞吸收率明顯更高。相對(duì)的,mir-432抑制組顯示出相反的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。為了證實(shí)這種現(xiàn)象的發(fā)生是否是由于細(xì)胞周期紊亂造成的,我們繼續(xù)針對(duì)細(xì)胞周期做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn),在阿非迪霉素治療中,超過(guò)60%的細(xì)胞為g1期,不同的組別中細(xì)胞周期的組成無(wú)明顯差異。然而,當(dāng)撤銷阿非迪霉素的作用后,過(guò)表達(dá)的mir-432使得a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞顯著的停滯在s期,這表明mir-432對(duì)抗肺腺癌增殖的作用是部分依靠調(diào)節(jié)細(xì)胞周期實(shí)現(xiàn)的。為了研究mir-432在體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用,我們應(yīng)用了一種逆轉(zhuǎn)錄病毒過(guò)表達(dá)的方式以驗(yàn)證mir-432可以在腫瘤異種移植模型中起到抑制腫瘤基因的作用。我們的研究結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)錄了mir-432的腫瘤細(xì)胞形成的腫瘤組織較對(duì)照組及空白組體積更小質(zhì)量更輕。綜上所述,這些結(jié)果說(shuō)明mir-432在肺腺癌腫瘤中的作用為腫瘤抑制物。3.mir-432可以直接抑制e2f2和axl:為了探索mir-432對(duì)肺腺癌腫瘤組織的抑制作用的機(jī)制,我們應(yīng)用了一種公開(kāi)的算法(targetscanandmiranda)來(lái)預(yù)測(cè)人體中mir-432的潛在靶點(diǎn)。進(jìn)而,我們還基于geneontology(go)選擇除了它們當(dāng)中與肺腺癌相關(guān)的那些靶點(diǎn)。接下來(lái),因?yàn)橐延袌?bào)道證實(shí)e2f2和axl為癌基因,可以促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞增殖和耐藥,并且結(jié)合之前的結(jié)果說(shuō)明mir-432對(duì)肺腺癌有潛在的腫瘤抑制作用,我們選擇了e2f2和axl進(jìn)行接下來(lái)的研究。正如預(yù)期的,westernblotting證實(shí)a549和h1299細(xì)胞中e2f2和axl的表達(dá)因轉(zhuǎn)染了mir-432而大幅下降,而加入了mir-432抑制劑的細(xì)胞e2f2和axl表達(dá)明顯上升。為了探討肺腺癌中mir-432對(duì)e2f2和axl的調(diào)節(jié)作用,我們首先利用rt-qpcr得到它們的基礎(chǔ)水平。mir-432在a549細(xì)胞中的表達(dá)較h1299細(xì)胞中低,e2f2也相對(duì)的在a549細(xì)胞中的表達(dá)較h1299細(xì)胞中低,axl在h1299細(xì)胞中表達(dá)較a549細(xì)胞中高。我們進(jìn)一步利用熒光素酶法驗(yàn)證e2f2和axl是否為mir-432的直接靶點(diǎn)。我們的結(jié)果表明,mir-432的異常表達(dá)使得hek193t細(xì)胞中e2f2和axl的3’utrs熒光素酶活性降低。然而,一個(gè)在序列中有4個(gè)核苷酸改變的突變mir-432對(duì)熒光素酶的活性無(wú)抑制作用�；谥拔覀兊膶�(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)mir-432在a549細(xì)胞中的表達(dá)低于h1299細(xì)胞,我們?cè)赼549細(xì)胞中過(guò)表達(dá)了mir-432。我們發(fā)現(xiàn)mir-432的過(guò)常表達(dá)使得a549細(xì)胞中e2f2和axl的3’utrs熒光素酶活性降低。而在h1299細(xì)胞中抑制mir-432使得e2f2和axl的3’utrs熒光素酶活性升高。值得注意的是,這些現(xiàn)象在通路中存在突變時(shí)則消失。這些結(jié)果表明,在肺腺癌細(xì)胞中,mir-432抑制e2f2和axl的靶點(diǎn)為其3’utrs。4.上調(diào)mir-432在體外提高a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性:之前的研究表明mirna的異常調(diào)控與腫瘤(包括肺癌)的化療耐藥相關(guān)。鑒于有研究發(fā)現(xiàn)mir-432在卵巢癌中與藥物耐藥相關(guān),我們猜想在肺腺癌中mir-432亦有相同的作用。為了證實(shí)我們的想法,我們?cè)诓煌臅r(shí)間點(diǎn)以順鉑(5μg/ml)作用于對(duì)照組及mir-432抑制組的a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞。正如預(yù)期的,順鉑在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)空白組和對(duì)照組的細(xì)胞的生長(zhǎng)率起到了抑制作用。然而,mir-432抑制組的a549和h1299細(xì)胞在順鉑作用下的細(xì)胞活性降低效應(yīng)明顯被削弱,這意味著mir-432可能與肺腺癌的順鉑敏感性相關(guān)。接下來(lái),我們過(guò)表達(dá)了mir-432以明確其在肺癌細(xì)胞系a549和h1299對(duì)順鉑敏感性中的作用。正如我們預(yù)期的,過(guò)表達(dá)mir-432的肺癌細(xì)胞系較對(duì)照組的細(xì)胞活性更低。與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)錄mir-432的a549和h1299細(xì)胞在不同的藥物濃度下均對(duì)順鉑有更高的敏感性。并且流式細(xì)胞儀分析也顯示,相較于對(duì)照組,過(guò)表達(dá)mir-432可以明顯增加順鉑作用下引起的a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了mir-432可以調(diào)節(jié)a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。為了證明mir-432與e2f3/axl的關(guān)系,我們測(cè)定了a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞中mir-432與e2f3/axl的表達(dá)。正如預(yù)期的,與0h時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組不同,數(shù)據(jù)顯示順鉑可以上調(diào)mir-432的表達(dá)。有意思的是,這種mir-432表達(dá)隨順鉑調(diào)高的現(xiàn)象以劑量和時(shí)間依賴的方式顯示出來(lái)。并且,e2f3和axl的mrna水平明顯下降。進(jìn)一步的劑量依賴分析研究顯示,a549和h1299細(xì)胞中e2f3和axl的表達(dá)水平隨轉(zhuǎn)錄mir-432的水平而降低。5.e2f3和axl表達(dá)的降低在功能上與mir-432對(duì)肺腺癌的生物學(xué)效應(yīng)密切相關(guān):值得關(guān)注的是,當(dāng)在轉(zhuǎn)錄mir-432的a549和h1299細(xì)胞中過(guò)表達(dá)e2f3和axl,轉(zhuǎn)錄mir-432造成的對(duì)細(xì)胞活性的降低被弱化了,或者說(shuō)被部分弱化了。再加上,沉默e2f3和axl可以明顯使mir-432抑制組的細(xì)胞活性下降。同樣的,在順鉑的作用下,過(guò)表達(dá)e2f3和axl亦可使轉(zhuǎn)錄mir-432造成的細(xì)胞活性降低效應(yīng)消失。相對(duì)的,沉默e2f3和axl可以明顯使mir-432抑制組造成的細(xì)胞活性上升現(xiàn)象消失。這些結(jié)果均顯示出e2f3和axl在mir-432對(duì)肺腺癌作用中的重要作用。6.mir-432與其靶點(diǎn)在肺腺癌中的臨床相關(guān)性:我們進(jìn)一步證實(shí)了在人肺腺癌組織中,mir-432與其靶點(diǎn)的表達(dá)水平有何相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)證實(shí),mir-432表達(dá)水平與e2f3和axl的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān),這證明了mir-432和e2f3/axl與肺腺癌病理學(xué)進(jìn)展的相關(guān)性。研究結(jié)論1.mirna-432在肺腺癌組織中低表達(dá),肺腺癌腫瘤分期越晚期mirna-432表達(dá)越低,mirna-432表達(dá)越高肺腺癌患者生存期越長(zhǎng)。2.調(diào)高mirna-432表達(dá),肺腺癌細(xì)胞活力下降,細(xì)胞更多的停滯于s期,mirna-432通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)肺腺癌細(xì)胞增殖。3.mirna-432表達(dá)與e2f3及axl表達(dá)呈負(fù)相關(guān),mirna-432通過(guò)調(diào)節(jié)e2f3和axl起到調(diào)節(jié)肺腺癌發(fā)生及發(fā)展的作用。4.調(diào)高mirna-432可逆轉(zhuǎn)肺腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性,以提高肺腺癌患者對(duì)治療的療效。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

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1 崔虎山,李星云,李成福,韓京軍,池永涌;三磷酸腺苷氯化鎂對(duì)肺腺癌細(xì)胞的抗癌作用[J];延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào);2002年03期

2 楊晉平,王澤,張?zhí)K;肺腺癌5-羥色胺受體的免疫組織化學(xué)定位[J];四川解剖學(xué)雜志;2003年02期

3 吳一龍,林嘉穎,楊學(xué)寧,喬貴賓,王坤,陳剛;肺腺癌患者酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常與臨床預(yù)后[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2004年12期

4 張利群,陳杭薇,王四海,辛慶紅,杜玉國(guó),尤蘭華;人呼吸道合胞病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)染肺腺癌細(xì)胞系的研究[J];山東醫(yī)藥;2005年12期

5 黎聯(lián);梅同華;周向東;張新高;車德亞;;細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路與基質(zhì)金屬蛋白酶-26在肺腺癌表達(dá)中的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

6 王亞南;顧國(guó)浩;;生物芯片在肺腺癌研究和診療中的應(yīng)用進(jìn)展[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年02期

7 ;我國(guó)人體肺腺癌細(xì)胞系建立[J];腫瘤;1981年06期

8 季晨陽(yáng),張義R，

本文編號(hào)：1584177