本文選題：SOX18　切入點：HCC　出處：《山西醫(yī)科大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:肝癌(HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一。SOX家族是由一類含有高度保守的HMG DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子。研究發(fā)現(xiàn)SOX基因與癌癥存在聯(lián)系,SOX7和SOX17屬于SOX家族F組,它們可以通過抑制Wnt信號通路來抑制肝癌細胞增殖和遷移等。SOX18是F組的另一成員,它在胃癌、卵巢癌、非小細胞肺癌和乳腺癌中表達上調(diào),但在肝癌細胞中SOX18的表達情況和功能目前還沒有報道。因此,本文將通過檢測肝癌組織中SOX18表達和在細胞水平上改變SOX18的表達來探討SOX18與肝癌的關(guān)系。方法:從山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院募集肝癌病例75例,收集患者手術(shù)切除的肝癌組織和癌旁組織,通過熒光定量PCR檢測組織中SOX18的相對表達量,于手術(shù)結(jié)束開始隨訪記錄患者總生存期,總生存期定義為從手術(shù)到死亡的時間或從手術(shù)至健在病人最后一次觀察的時間;選擇SOX18表達水平高的細胞株MHCC-97H和HepG2進行后續(xù)實驗,轉(zhuǎn)染SOX18-siRNA敲低這兩個細胞中SOX18的表達水平,觀察敲低SOX18后對MHCC-97H和HepG2肝癌細胞的增殖、細胞周期、細胞凋亡、細胞的侵襲和遷移能力的影響;利用癌癥基因組圖譜項目(TCGA)中肝癌細胞隊列的高通量RNA測序結(jié)果進行基因集富集分析(GSEA)探討SOX18可能調(diào)控的信號通路,再比較SOX18表達下調(diào)后該信號通路是否受到影響。結(jié)果:熒光定量PCR檢測75例肝癌患者肝癌組織及其癌旁組織中的SOX18 mRNA水平顯示肝癌組織中SOX18 mRNA表達顯著高于癌旁組織(P0.001),TCGA肝癌隊列的高通量RNA測序數(shù)據(jù)也發(fā)現(xiàn)肝癌組織中SOX18表達顯著高于正常組織,SOX18高表達的腫瘤患者的生存期與SOX18表達較低的患者相比明顯縮短(P0.01);Western blot和實時定量PCR檢測顯示MHCC-97H和HepG2細胞中SOX18的表達顯著高于其它細胞,SOX18 siRNA可以有效下調(diào)MHCC-97H和HepG2兩種細胞中SOX18的表達;CCK-8法檢測顯示轉(zhuǎn)染SOX18 siRNA后MHCC-97H和HepG2的增殖能力與對照組(WT)和未轉(zhuǎn)染組(NC)相比增殖能力明顯減弱;細胞周期檢測顯示SOX18下調(diào)后MHCC-97H和HepG2停滯在G1期的細胞數(shù)增加,而且處于S期和G2/M期的細胞數(shù)目減少;敲低MHCC-97H和HepG2中SOX18后細胞遷移和侵襲能力明顯降低;GSEA分析HCC數(shù)據(jù)資料顯示粘附途徑和趨化因子信號轉(zhuǎn)導途徑與SOX18表達顯著相關(guān);實時定量PCR和Western blot檢測顯示敲低SOX18能夠降低粘附通路基因(RhoA、PDGF和IGF1R)和趨化因子的信號通路基因(CCL2,CCL3、CCL5)mRNA和蛋白質(zhì)表達水平。結(jié)論:本研究首次證明SOX18在肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲中起著關(guān)鍵的作用,該作用可能是通過影響?zhàn)じ胶挖吇蜃拥男盘柾穪韺崿F(xiàn)的。臨床研究顯示SOX18表達水平與患者的低生存率有關(guān),抑制腫瘤組織中SOX18的表達可能為肝癌治療提供一個新的治療策略。
[Abstract]:Objective: hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant tumors in the world. The Sox family is a class of transcription factors containing highly conserved HMG DNA binding domain. They inhibit the proliferation and migration of hepatoma cells by inhibiting the Wnt signaling pathway. SOX18 is another member of group F. it is up-regulated in gastric cancer, ovarian cancer, non-small cell lung cancer and breast cancer. However, the expression and function of SOX18 in HCC cells have not been reported. The relationship between SOX18 and liver cancer was studied by detecting the expression of SOX18 and changing the expression of SOX18 at the cellular level. Methods: 75 cases of liver cancer were recruited from the first Hospital of Shanxi Medical University. The liver cancer tissues and adjacent tissues were collected. The relative expression of SOX18 was detected by fluorescence quantitative PCR, and the total survival time was recorded at the beginning of operation. The total survival time was defined as the time from operation to death or from surgery to the last observation of the patient, and the cell lines MHCC-97H and HepG2, which had high SOX18 expression level, were selected to carry out follow-up experiments, and the expression of SOX18 in the two cells was reduced by transfection of SOX18-siRNA knockout. The effects of SOX18 knockout on the proliferation, cell cycle, apoptosis, invasion and migration of MHCC-97H and HepG2 hepatoma cells were observed. The high throughput RNA sequencing results of HCC cell cohort in cancer genome mapping project (TCGA) were used to study the possible signal pathways regulated by SOX18 by gene set enrichment analysis. Results: the expression of SOX18 mRNA in hepatocellular carcinoma tissues and its adjacent tissues was significantly higher than that of adjacent tissues in 75 patients with hepatocellular carcinoma by fluorescence quantitative PCR. The high throughput RNA sequencing data of P0.001TCGA HCC cohort also showed that the survival time of tumor patients with high expression of SOX18 in HCC tissue was significantly higher than that in patients with high expression of SOX18, compared with patients with lower SOX18 expression. It was also found that the expression of SOX18 in HCC tissues was significantly shorter than that in patients with lower SOX18 expression. PCR analysis showed that the expression of SOX18 in MHCC-97H and HepG2 cells was significantly higher than that in other cells, SOX18 siRNA could effectively down-regulate the expression of SOX18 in MHCC-97H and HepG2 cells. CCK-8 assay showed that the proliferation ability of MHCC-97H and HepG2 after SOX18 siRNA transfection was significantly higher than that of control group. The proliferative ability of the infected group was significantly lower than that of the control group. Cell cycle analysis showed that after SOX18 down-regulation, the number of MHCC-97H and HepG2 stagnated in G1 phase increased, and the number of cells in S phase and G _ 2 / M phase decreased. The ability of cell migration and invasion after knockout of SOX18 in MHCC-97H and HepG2 decreased significantly. The results of HCC data analysis showed that adhesion pathway and chemokine signal transduction pathway were significantly correlated with SOX18 expression. Real-time quantitative PCR and Western blot analysis showed that low SOX18 knockout could decrease the expression of mRNA and protein in adhesion pathway gene (Rho PDGF and IGF1R) and chemokine. Conclusion: this study is the first to prove the proliferation of SOX18 in hepatocellular carcinoma cells. Migration and invasion play a key role, which may be achieved through signaling pathways that affect adhesion and chemokines. Clinical studies have shown that SOX18 expression levels are associated with low survival rates in patients. Inhibition of SOX18 expression in tumor tissues may provide a new therapeutic strategy for liver cancer therapy.
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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本文編號：1582580