本文選題：骨肉瘤　切入點：化療耐藥　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的骨肉瘤是最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤,主要發(fā)生于青少年。雖然嘗試新輔助化療后,骨肉瘤生存率明顯提高。然而,自上世紀(jì)80年代以來骨肉瘤的治療未見明顯提高,可能與骨肉瘤發(fā)生耐藥相關(guān)。化療耐藥發(fā)生的機(jī)制有多種,近年來研究發(fā)現(xiàn)DNA損傷修復(fù)是導(dǎo)致化療耐藥的因素之一。DNA修復(fù)基因Rad51是同源重組修復(fù)的關(guān)鍵蛋白,同源重組修復(fù)是DNA損傷修復(fù)的重要修復(fù)形式。多種研究表明Rad51在腫瘤中高表達(dá),且與耐藥密切相關(guān)。FoxM1是與增殖密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,在細(xì)胞周期的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。近年研究發(fā)現(xiàn)FoxM1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),在多種惡性腫瘤中表達(dá)明顯升高,且通過調(diào)節(jié)DNA損傷修復(fù)基因參與耐藥。本實驗為探討FoxM1是否通過調(diào)控DNA修復(fù)基因Rad51參與順鉑(CDP)對骨肉瘤耐藥細(xì)胞化療抑制作用。方法以骨化性肌炎組織為對照組,骨肉瘤組織為實驗組,采用免疫組化方法檢測骨肉瘤組織中FoxM1的表達(dá);以骨肉瘤細(xì)胞系MG-63和HOS-MNNG為親本細(xì)胞系,采用大劑量沖擊和逐步增加劑量相結(jié)合的方法誘導(dǎo)骨肉瘤耐藥細(xì)胞系,實驗起始用0.1μ g/mL CDP培養(yǎng)細(xì)胞24h,撤藥培養(yǎng)至細(xì)胞穩(wěn)定傳代,如此重復(fù)3次后增加藥物劑量至0.2μ g/mLCDP培養(yǎng)24h,撤藥培養(yǎng)至細(xì)胞穩(wěn)定傳代,按以上方法如此大劑量沖擊和逐步增加劑量相結(jié)合逐步增加劑量誘導(dǎo)近4個月后建立的骨肉瘤耐藥細(xì)胞系。采用MTT法檢測耐藥細(xì)胞耐藥指數(shù)(RI)。qRT-PCR法檢測耐藥細(xì)胞與親本細(xì)胞FoxM1和Rad51的mRNA水平的表達(dá);Western blot檢測耐藥細(xì)胞與親本細(xì)胞FoxM1和Rad51的蛋白水平的表達(dá);耐藥細(xì)胞中運用FoxM1-shRNAs敲低FoxM1后檢測Rad51的mRNA及蛋白水平的表達(dá)變化;耐藥細(xì)胞中加入4μ mol/L Thiostrepton處理前后檢測FoxM1和Rad51的mRNA及蛋白水平的表達(dá)變化;細(xì)胞計數(shù)法檢測單獨或聯(lián)合運用4μ mol/L Thiostrepton和2μ g/mL CDP對骨肉瘤耐藥細(xì)胞增殖率的影響。結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示骨肉瘤組織中FoxM1陽性表達(dá)率較骨化性肌炎組織明顯增高。采用大劑量沖擊和逐步增加劑量相結(jié)合的方法,建立在2μ g/mL CDP濃度中穩(wěn)定生長的耐藥細(xì)胞系,并分別命名為MG-63/R和HOS-MNNG/R;MTT法檢測兩耐藥細(xì)胞系MG-63/R和HOS-MNNG/R對CDP的耐藥指數(shù)分別為30.52和37.87兩耐藥細(xì)胞系均顯示對CDP重度耐藥。qRT-PCR法檢測FoxM1和Rad51的mRNA表達(dá)水平在耐藥細(xì)胞中表達(dá)較親本細(xì)胞明顯增高;Western blot法檢測FoxM1和Rad51的蛋白表達(dá)水平在耐藥細(xì)胞中表達(dá)較親本細(xì)胞明顯增高;耐藥細(xì)胞中運用FoxM1-shRNAs敲低FoxM1后檢測Rad51的mRNA及蛋白水平表達(dá)均降低;耐藥細(xì)胞4μ mol/L Thiostrepton處理后FoxM1及Rad51的mRNA和蛋白水平表達(dá)均明顯降低。在耐藥細(xì)胞中聯(lián)合運用4μ mol/L Thiostrepton和2μ g/mL CDP組較單獨應(yīng)用4μ mol/L Thiostrepton組或2μ g/mL CDP組細(xì)胞增殖率明顯降低。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)FoxM1及Rad51在骨肉瘤耐藥細(xì)胞中高表達(dá),運用FoxM1-shRNAs和FoxM1抑制劑Thiostrepton可下調(diào)Rad51的表達(dá)。在耐藥細(xì)胞中聯(lián)合運用Thiostrepton和CDP導(dǎo)致細(xì)胞增殖率明顯降低,表明抑制FoxM1可能增加耐藥細(xì)胞對化療的敏感性。本研究結(jié)果提示聯(lián)合應(yīng)用FoxM1抑制劑和化療藥物可能提高骨肉瘤耐藥治療的療效,為骨肉瘤耐藥機(jī)制及治療提供新的靶點。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R738.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 蔣智銘,張惠箴,陳潔晴,黃瑾,劉亮;骨肉瘤的組織學(xué)類型[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2004年02期

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本文編號：1579304