本文選題：AIMP2-DX2　切入點(diǎn)：鼻咽癌　出處：《暨南大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：背景鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是來(lái)源于鼻咽上皮組織的一種頭頸部惡性腫瘤,大多數(shù)為非角化未分化癌,其惡性化程度高,極易轉(zhuǎn)移,早期診斷困難。我國(guó)是鼻咽癌高發(fā)病率國(guó)家,在我國(guó)南方特別是廣東省發(fā)病率高。鼻咽癌患者的治療以放療和化療為主,而早期診斷、早期治療則是挽救患者生命和提高生活質(zhì)量的有效手段。但鼻咽癌起病隱匿,有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移傾向,轉(zhuǎn)移早,易復(fù)發(fā),大約75%左右患者首診既被確診為中晚期。鼻咽癌患者的五年生存率維持在70%左右,仍有30%多的患者由于轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)不能長(zhǎng)期生存。因此,闡明鼻咽癌發(fā)生,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,篩選鼻咽癌的腫瘤標(biāo)志物,尋找治療新靶點(diǎn)對(duì)鼻咽癌診療具有重要的臨床意義。多能氨酰基-t RNA合成酶作用蛋白(Aminoacyl-t RNA synthetase interacting multifunctional proteins,AIMPs)是人類(lèi)t RNA合成酶復(fù)合物的支架蛋白,也是�；�-t RNA連接酶復(fù)合物的核心蛋白。AIMPs家族有三個(gè)亞型蛋白:AIMP1,AIMP2,AIMP3。AIMP2(也被稱(chēng)為p38/JTV-1蛋白),是AIMPs家族三個(gè)亞型之一,參與多種生物學(xué)功能,如細(xì)胞分化,細(xì)胞凋亡等。最近的研究表明,AIMP2的一個(gè)缺少外顯子Exon2的轉(zhuǎn)錄本AIMP2-DX2也與腫瘤相關(guān),但功能與AIMP2不同。AIMP2-DX2在多種腫瘤細(xì)胞系及腫瘤組織中被檢測(cè)到。與AIMP2類(lèi)似,AIMP2-DX2也能夠結(jié)合FBP、TRAF2及p53,故AIMP2-DX2與AIMP2競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合目標(biāo)蛋白,從而抑制AIMP2的功能,表現(xiàn)為促癌因子。AIMP2-DX2與AIMP2的比例與肺癌病人的惡性程度正相關(guān),與卵巢癌的抗藥性正相關(guān)。抑制AIMP2-DX2水平可顯著抑制肺癌細(xì)胞分化及其在裸鼠體內(nèi)的成瘤。這些研究表明,AIMP2-DX2可能是有潛力的癌癥新靶點(diǎn)�；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一組鋅依賴(lài)型的蛋白水解酶,它主要是負(fù)責(zé)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解和重塑。MMPs在成體組織中的表達(dá)和活性相對(duì)較低,但在出現(xiàn)病理狀況異常的組織中顯著增加,例如炎性疾病,腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。近年來(lái),MMPs是抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究的熱點(diǎn)。在各種MMPs成員中,MMP-2和MMP-9與多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移表型關(guān)系最為密切,其主要作用底物是IV型膠原、明膠、彈力蛋白等,它們是基底膜及ECM的主要成分。基底膜的降解意味著腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。鼻咽癌組織中MMP-2和MMP-9的活性水平均顯著高于正常鼻咽組織,并且與鼻咽癌的臨床分期密切相關(guān)。文獻(xiàn)表明,抑制MMP-2及MMP-9可以抑制鼻咽癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。所以,MMP-2及MMP-9對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移至關(guān)重要,是抑制其侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵靶點(diǎn)。目前AIMP2-DX2在鼻咽癌中的作用未見(jiàn)報(bào)道,而AIMP2-DX2調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制也亟待闡明,本研究以人高分化鼻咽癌細(xì)胞株(CNE-1)為研究對(duì)象,擬通過(guò)分子克隆、轉(zhuǎn)染、q PCR和T-PCR、western blot等分子生物學(xué)手段,流式細(xì)胞術(shù)、MTT、transwell侵襲及遷移等實(shí)驗(yàn)方法,進(jìn)一步建立CNE-1鼻咽癌細(xì)胞的裸鼠成瘤模型,觀察AIMP2-DX2對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響,檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)中關(guān)鍵分子MMP-2及MMP-9核酸水平和蛋白水平的變化,闡明MMP-2及MMP-9水平變化與AIMP2-DX2的關(guān)系,探討AIMP2-DX2調(diào)控鼻咽癌細(xì)胞遷移與侵襲的相關(guān)機(jī)制。目的(1)明確AIMP2-DX2與鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。(2)研究MMP-2及MMP-9水平變化與AIMP2-DX2的關(guān)系,探討AIMP2-DX2調(diào)控鼻咽癌細(xì)胞遷移與侵襲的相關(guān)機(jī)制。材料和方法(1)應(yīng)用免疫組化、Western blot及q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)正常鼻咽組織與臨床病人鼻咽癌樣本中AIMP2-DX2和AIMP2-F(全長(zhǎng))的表達(dá)差異。(2)通過(guò)Western blot、RT-PCR及侵襲遷移實(shí)驗(yàn)比較正常鼻咽細(xì)胞與鼻咽癌細(xì)胞相關(guān)促癌基因的表達(dá)情況以及侵襲遷移的情況;構(gòu)建AIMP2-DX2真核過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,應(yīng)用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)手段觀察AIMP2-DX2對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲、凋亡的影響。(3)構(gòu)建沉默sh AIMP2-DX2的CNE-1穩(wěn)定細(xì)胞株,AIMP2-DX2基因沉默對(duì)鼻咽癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響。(4)構(gòu)建鼻咽癌裸鼠成瘤動(dòng)物模型,檢測(cè)沉默AIMP2-DX2對(duì)裸鼠鼻咽癌模型皮下成瘤性影響。(5)所有統(tǒng)計(jì)處理均用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±standard deviation,SD)表示,采用方差分析進(jìn)行差異顯著性分析(ANOVA),P0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果(1)與正常鼻咽樣本相比,臨床病人鼻咽癌樣本中AIMP2-DX2的表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);AIMP2-F無(wú)顯著變化;q RT-PCR結(jié)果提示鼻咽癌組織與正常鼻咽組織相比AIMP2-DX2的表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而二者AIMP2-F表達(dá)無(wú)明顯差異。AIMP2-DX2低表達(dá)組的5年生存率明顯高于AIMP2-DX2高表達(dá)組,兩者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018),提示AIMP2-DX2的表達(dá)量與鼻咽癌患者的預(yù)后相關(guān)。(2)Transwell小室遷移和Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示CNE-1細(xì)胞株中AIMP2-DX2過(guò)表達(dá)和干擾的結(jié)果表明,細(xì)胞的遷移和侵襲與AIMP2-DX2的表達(dá)成正相關(guān)。(3)與人永生化鼻咽上皮細(xì)胞系比較,鼻咽癌細(xì)胞系中AIMP2-DX2的m RNA水平及蛋白水平升高,基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2及MMP-9的水平升高,細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(4)q RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示sh-AIMP2-DX2慢病毒能明顯抑制CNE-1細(xì)胞AIMP2-DX2的表達(dá),抑制AIMP2-DX2顯著抑制鼻咽CNE-1細(xì)胞的遷移和侵襲,同時(shí)也能抑制在CNE-1細(xì)胞的侵襲和浸潤(rùn)過(guò)程中起到重要作用的調(diào)節(jié)蛋白MMP-2及MMP-9的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(5)在裸鼠成瘤模型中,CNE-1細(xì)胞系的腫瘤成瘤可被sh-AIMP2-DX2抑制。結(jié)論(1)臨床病人鼻咽癌組織中AIMP2-DX2的表達(dá)明顯增高,且與病人預(yù)后相關(guān)。(2)AIMP2-DX2是調(diào)控鼻咽癌細(xì)胞增殖,遷移和侵襲能力的充分必要條件(過(guò)表達(dá)及小分子干擾)。(3)sh-AIMP2-DX2慢病毒能明顯抑制CNE-1細(xì)胞AIMP2-DX2,沉默AIMP2-DX2基因引發(fā)MMP-2及MMP-9基因的表達(dá)下調(diào)。(4)沉默AIMP2-DX2可抑制CNE-1細(xì)胞的遷移和侵襲,可抑制CNE-1細(xì)胞的裸鼠模型中的成瘤生長(zhǎng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1574230