發(fā)布時(shí)間：2018-03-04 03:06

  本文選題：姜黃　切入點(diǎn)：對(duì)人　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究姜黃素對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549增殖、侵襲、遷移能力以及HIF-1α表達(dá)的影響,探討姜黃素可能的抗腫瘤機(jī)制。方法:(1)用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)A549細(xì)胞,在5%CO2、37℃恒溫孵育箱進(jìn)行培養(yǎng)。(2)取處于對(duì)數(shù)生長期的A549傳代3-4次后,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),按姜黃素刺激時(shí)間分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組:24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)3組。每組設(shè)2個(gè)對(duì)照組:空白對(duì)照組、DMSO對(duì)照組;按姜黃素濃度梯度分為5個(gè)實(shí)驗(yàn)組,5umol/L;10umol/L;20umol/L;40umol/L;80umol/L。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收集各組細(xì)胞,利用MMT法檢測各組細(xì)胞的吸光度值,計(jì)算各組細(xì)胞生長抑制率情況。(3)取對(duì)數(shù)生長期的A549細(xì)胞接種于預(yù)鋪基質(zhì)膠的Transwell小室,再按設(shè)計(jì)的姜黃素刺激的時(shí)間梯度和濃度梯度干預(yù)細(xì)胞,于5%CO2、37℃恒溫孵育箱進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后染色并于顯微鏡下拍照,計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)量,評(píng)估各組A549細(xì)胞侵襲能力。(4)取對(duì)數(shù)生長期的A549細(xì)胞接種于6孔板,待細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%,用200ul無菌槍頭在6孔板中劃痕,PBS沖洗2次,再按設(shè)計(jì)的姜黃素刺激的時(shí)間梯度和濃度梯度干預(yù)細(xì)胞,于5%CO2、37℃恒溫孵育箱進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后于顯微鏡下觀察并拍照,使用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件比價(jià)各組細(xì)胞的遷移能力。(5)取對(duì)數(shù)生長期的A549細(xì)胞接種于96孔板,按設(shè)計(jì)的姜黃素刺激的時(shí)間梯度和濃度梯度干預(yù)細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收集各組細(xì)胞上清液,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定各組細(xì)胞中HIF-1α表達(dá)。結(jié)果:(1)MTT結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,同一時(shí)間內(nèi)不同濃度的姜黃素刺激A549后,對(duì)A549細(xì)胞增殖均有抑制作用,與姜黃素濃度有關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,同一時(shí)間內(nèi)不同濃度的姜黃素刺激人肺腺癌細(xì)胞株A549后,各濃度組(除外5umol/L組)對(duì)A549細(xì)胞侵襲均有抑制作用,與姜黃素濃度有關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(3)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,同一時(shí)間內(nèi)不同濃度的姜黃素刺激人肺腺癌細(xì)胞株a549后,各濃度組(除外5umol/l組)對(duì)a549細(xì)胞遷移均有抑制作用,與姜黃素濃度有關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(4)elisa結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,同一時(shí)間內(nèi)不同濃度的姜黃素刺激人肺腺癌細(xì)胞株后,對(duì)a549細(xì)胞hif-1α表達(dá)均有抑制作用,與姜黃素濃度有關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:(1)姜黃素可以抑制a549細(xì)胞生長。(2)姜黃素抑制a549細(xì)胞侵襲和遷移。(3)姜黃素抑制a549細(xì)胞可能與hif-1α表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of curcumin on proliferation, invasion, migration and HIF-1 偽 expression of human lung adenocarcinoma cell line A549 in vitro. To explore the possible antitumor mechanism of curcumin. Methods: A549 cells were cultured on RPMI1640 complete culture medium containing 10% fetal bovine serum. A549 cells were cultured in 5CO2 incubator at 37 鈩，

本文編號(hào)：1563845