本文選題：原發(fā)性肝細(xì)胞癌　切入點(diǎn)：索拉非尼　出處：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的:本研究探討原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子1α (HIF1α)蛋白的表達(dá)情況,評(píng)估晚期肝癌患者口服索拉非尼的療效,分析HIF1α蛋白表達(dá)與索拉非尼(sorafenib)耐藥之間的關(guān)系。并在體外實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步探討HIF1α誘導(dǎo)索拉非尼耐藥的作用和可能的分子機(jī)制。希望能夠?yàn)榻鉀Q索拉非尼耐藥提供思路和幫助。材料與方法:回顧性收集自2006年1月至2014年1月在我院接受過肝癌手術(shù)或肝癌穿刺活檢術(shù)并且接受了正規(guī)索拉非尼治療的患者的臨床病理資料,查閱病例資料并對(duì)病人進(jìn)行隨訪。采用免疫組化方法,對(duì)肝癌組織切片進(jìn)行HIF1α蛋白染色。根據(jù)染色結(jié)果,將所有病人分為HIF1α蛋白表達(dá)陰性組和HIF1α蛋白表達(dá)陽性組。收集這兩組病人的臨床病理特征、口服索拉非尼后的總體生存時(shí)間(OS)、口服索拉非尼后的無疾病進(jìn)展生存時(shí)間(PFS),分析索拉非尼的療效,并分析HIF1α蛋白表達(dá)對(duì)索拉非尼療效的影響。培養(yǎng)肝癌細(xì)胞,建立缺氧模型,構(gòu)建HIF1α過表達(dá)和下調(diào)慢病毒載體,分別將HIF1α過表達(dá)和下調(diào)慢病毒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞,并進(jìn)行Western Blot(WB)、CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期等實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步分析HIF1α對(duì)索拉非尼耐藥的作用和機(jī)制。結(jié)果:(1)共有67人納入本研究中,其中男性59名,女性8名,中位隨訪時(shí)間327.5天。HIF1α蛋白表達(dá)陽性患者共30例(44.8%),HIF1α蛋白表達(dá)陰性患者共37例(55.2%)。HIF1α蛋白陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞漿,少部分也可以出現(xiàn)在細(xì)胞核,或者細(xì)胞漿和細(xì)胞核。(2) HIF1α蛋白陽性表達(dá)與AFP高表達(dá)水平、腫瘤分化程度低、腫瘤直徑大呈正相關(guān)。(3) 口服索拉非尼后,部分緩解(PR)有7人(10.4%),疾病穩(wěn)定(SD)有44人(65.7%),疾病進(jìn)展(PD)有10人(14.9%),未獲取到療效評(píng)價(jià)信息的6人(9%)。PD組患者HIF1α蛋白陽性表達(dá)率為80%,顯著高于SD組(36.4%),PR組(14.3%) (P=0.0126)。(4)生存分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)HIF1α蛋白陽性表達(dá)、患者高齡、有腫瘤家族史、KPS評(píng)分低、腫瘤有肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度低、腫瘤直徑大、口服索拉非尼前未行TACE治療是影響總體生存時(shí)間的不良預(yù)后因素;HIF1α蛋白陽性表達(dá)、有腫瘤家族史、KPS評(píng)分低、腫瘤有肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度低、口服索拉非尼前未行TACE治療是影響疾病無進(jìn)展生存時(shí)間的不良預(yù)后因素。(5)常規(guī)培養(yǎng)肝癌細(xì)胞,細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,缺氧條件與常氧條件下對(duì)比,索拉非尼抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用明顯減弱(P0.05)。凋亡實(shí)驗(yàn)提示,缺氧條件與常氧條件對(duì)比,索拉非尼促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用明顯減弱(P0.01)。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)缺氧和常氧條件下分別加入索拉非尼后,肝癌細(xì)胞周期各階段的百分比有明顯差異。(6)分別利用HIF1α過表達(dá)慢病毒和HIF1α下調(diào)慢病毒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示HIF1α過表達(dá)后,隨著索拉非尼濃度的增加,細(xì)胞增殖率較常氧+空載轉(zhuǎn)染組明顯增加(P0.01);相反,HIF1α下調(diào)后,隨著索拉非尼濃度的增加,細(xì)胞增殖率與常氧+空載轉(zhuǎn)染組相仿,但是較缺氧+空載轉(zhuǎn)染組明顯減少(P0.01)。凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,HIF1α過表達(dá)后,加入索拉非尼,細(xì)胞凋亡率較常氧+空載轉(zhuǎn)染+索拉非尼組明顯減少(P0.01);相反,HIF1α下調(diào)后,加入索拉非尼,細(xì)胞凋亡率與常氧+空載轉(zhuǎn)染+索拉非尼組相仿,并顯著高于缺氧+空載轉(zhuǎn)染+索拉非尼組(P0.01)。(7)將HIF1α過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞后,利用Western Blot的方法檢測(cè)索拉非尼各靶點(diǎn)磷酸化水平的變化(pVEGFR2、pPDGFRβ、pRAF、pMEK1、pERK),我們發(fā)現(xiàn)其靶點(diǎn)蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組(常氧狀態(tài)下加入索拉非尼)明顯升高。結(jié)論:1.HIF1α蛋白在肝癌組織中可以出現(xiàn)陽性表達(dá),并且主要位于細(xì)胞漿。肝癌組織中HIF1α蛋白的表達(dá)是預(yù)測(cè)索拉非尼療效和肝癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2.HIF1α蛋白陽性表達(dá)、有腫瘤家族史、KPS評(píng)分低、腫瘤有肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度低、口服索拉非尼前未行TACE治療是影響總體生存時(shí)間和無疾病進(jìn)展生存時(shí)間的不良預(yù)后因素。3.缺氧通過降低索拉非尼抑制肝癌細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用,可以誘導(dǎo)索拉非尼耐藥。4.HIF1α同樣可以通過上述兩方面作用來誘導(dǎo)索拉非尼耐藥。5.HIF1α誘導(dǎo)索拉非尼耐藥的分子機(jī)制可能是其上調(diào)了索拉非尼作用靶點(diǎn)的磷酸化水平。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉國(guó)科;趙健;;腫瘤微環(huán)境與腫瘤耐藥[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2015年03期

2 陳斐;齊心一;戴悅;錢敏;孫宇;;腫瘤微環(huán)境與腫瘤耐藥的研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2014年10期

3 姚平;時(shí)開網(wǎng);張厚斌;;SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)胰腺癌中HIF1α、VEGF和bFGF的表達(dá)及其臨床意義[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

，

本文編號(hào)：1562071