發(fā)布時間：2018-03-02 08:13

  本文關(guān)鍵詞： 百里醌 胃癌 STAT3 增殖 凋亡　出處：《武漢大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分百里醌在三種胃癌細(xì)胞中通過STAT3信號通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖凋亡的機制目的：探討百里醌在三種胃癌細(xì)胞中是否通過STAT3通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖凋亡的機制。方法：將HGC27、BGC823、SGC7901細(xì)胞體外培養(yǎng)并用百里醌于每12小時、24小時、36小時作用于細(xì)胞(濃度梯度為0、10、25、50、75、100、125μmol/L)),并以MTT實驗法檢測細(xì)胞增殖抑制率,Western blot方法檢測,分析STAT3蛋白、p-STAT3蛋白、STAT5蛋白表達(dá)量。結(jié)果：百里醌抑制STAT3在所有這些細(xì)胞中活化,以最大抑制發(fā)生在TQ濃度為50μM時且并沒有影響STAT3蛋白的表達(dá)。免疫印跡清晰表明TQ在HGC27細(xì)胞細(xì)胞核中阻礙了STAT3核易位。TQ沒有抑制STAT5磷酸化或STAT3蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明,TQ專門抑制STAT3酪氨酸磷酸化。結(jié)論：在這三種胃癌細(xì)胞中TQ均通過抑制STAT3絡(luò)氨酸磷酸化調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,STAT3蛋白表達(dá)沒有改變第二部分在HGC27胃癌細(xì)胞中STAT3信號通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖凋亡的相關(guān)基因目的：探討HGC27胃癌細(xì)胞中哪些基因在STAT3信號通路中起決定性作用方法：本部分以胃癌細(xì)胞HGC27為研究對象,經(jīng)RT-PCR、STAT3-熒光素酶報告基因分析、MTT、Hoechst 33258、膜聯(lián)蛋白V細(xì)胞凋亡染色分析檢測。STAT3, p-STAT3, STAT5, p-STAT5, p-JAK2, JAK2, p-Src, Src, GAPDH, Lamin-A, survivin, Cyclin D, Bcl-2, Bax, PPAR, Caspase-3,7,9蛋白的表通過免疫印跡法Western blot檢測。流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。在HGC27細(xì)胞株中,TQ誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞死亡時存在劑量依賴相關(guān)性現(xiàn)象,并通過Annexin V-FITC/PI分析和Hoechst 33258法檢測。與對照組相比,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：TQ誘導(dǎo)下調(diào)STAT3的激活和減少JAK2和C-src的活動。TQ也下調(diào)STAT3相關(guān)基因的表達(dá),如Bcl-2, cyclin D, surviving和VEGF,但激活caspase-3,7,9。 Annexin V-FITC/PI分析結(jié)果顯示TQ以濃度依賴性模式誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Hoechst33258染色結(jié)果可見包含核碎片的凋亡小體。結(jié)論：TQ在HGC27細(xì)胞中抑制STAT3相關(guān)基因的表達(dá),包括細(xì)胞周期蛋白D1、 bcl-2、生存素、血管生成基因產(chǎn)物(VEGF)、Bcl-xL和存活素可能與PARP的分裂有關(guān),TQ可濃度依賴性激活caspase-3,7,9。第三部分體內(nèi)實驗百里醌對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究目的：本部分研究探討百里醌在裸鼠體內(nèi)對胃癌細(xì)胞皮下移植瘤作用的具體作用機制。方法：在體內(nèi),裸鼠建立胃癌皮下移植瘤模型,被分為四組,每籠四只。腫瘤模型建成后裸鼠隨機分配為四組：(1)未經(jīng)處理,等容生理鹽水；(2)10毫克／公斤TQ；(3)20毫克/公斤TQ；(4)30毫克/公斤TQ。腹腔內(nèi)注射給藥,每周三次。每3天稱重,卡尺測量大小。30天后處死、稱重。TUNNEL法檢測胃癌細(xì)胞數(shù)量。與對照組相比,P0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：實驗裸鼠處死后剝離腫瘤稱重。四組重量為別為：(762.7±35.2mg) (647.8±33.9mg) (595.3±30.3mg) (305.1±34.8mg),P0.05,有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論：與對照組相比治療后腫瘤明顯降低重量和體積。
[Abstract]:Part one the mechanism of thyriquinone regulating tumor cell proliferation and apoptosis through STAT3 signaling pathway in three kinds of gastric cancer cells objective: to investigate whether thyriquinone regulates tumor cell proliferation and apoptosis through STAT3 pathway in three gastric cancer cells. Methods: HGC27BGC823 SGC7901 cells were cultured in vitro and treated with thyriquinone every 12 hours for 24 hours or 36 hours (concentration gradient was 0101055075 / 100 渭 mol 路L ~ (-1)). The cell proliferation inhibition rate was detected by MTT assay, and the inhibition rate of cell proliferation was determined by Western blot assay, and the proliferation inhibition rate of HGC27BGC823 / SGC7901 cell line was determined by Western blot. The expression of STAT3 p-STAT3 protein and STAT5 protein were analyzed. Results: thyriquinone inhibited the activation of STAT3 in all these cells. The maximum inhibition occurred when TQ concentration was 50 渭 M and did not affect the expression of STAT3 protein. Western blot showed that TQ blocked the translocation of STAT3 nucleus in HGC27 cells. TQ did not inhibit the expression of STAT5 phosphorylation or STAT3 protein. Conclusion: in these three gastric cancer cells, TQ regulates the expression of apoptotic STAT3 protein by inhibiting STAT3 complex phosphorylation. The second part of TQ does not change the STAT3 signal pathway in HGC27 gastric cancer cells. Objective: to investigate which genes play a decisive role in the STAT3 signaling pathway in HGC27 gastric cancer cells. The expression of MTT3, p-STAT3, STAT5, p-STAT5, p-JAK2, JAK2, p-Src, Src, GAPDH, Lamin-A, survivin, Cyclin D, Bcl-2, Bax, PPAR, Caspase-3PPAR, Caspase-79 protein were detected by Western flow cytometry (FCM). Cell cycle and apoptosis. TQ induced apoptosis in HGC27 cell line in a dose-dependent manner. Compared with the control group, Annexin V-FITC / Pi analysis and Hoechst 33258 assay showed that there was a significant difference. Results: 1 TQ induced down-regulation of STAT3 activation and decreased the activity of JAK2 and C-src. TQ also down-regulated the expression of STAT3 related genes. For example, Bcl-2, cyclin D, surviving and VEGF, but caspase-3 was activated. The results of Annexin V-FITC / Pi analysis showed that TQ induced cell apoptosis in a concentration-dependent manner. Hoechst33258 staining showed that apoptotic bodies containing nuclear fragments could be found in HGC27 cells. Conclusion: TQ inhibits the expression of STAT3 related genes in HGC27 cells. Including cyclin D1, bcl-2, survivin, Bcl-xL and survivin may be related to the division of PARP. TQ can activate caspase-3 in a concentration-dependent manner. Part III: study on the effect of thyriquinone on the biological behavior of gastric cancer cells in vivo: this part is to investigate the effect of thyriquinone on the biological behavior of gastric cancer cells. The specific mechanism of the effect of quinone on subcutaneous tumor transplantation of gastric cancer cells in nude mice. Methods: in vivo, Nude mice were divided into four groups, four in each cage. After the tumor model was established, nude mice were randomly assigned to four groups: 1) untreated. Isovolumetric normal saline 2mg / kg TQX 3N 20 mg / kg TQX 430mg / kg TQ.Intraperitoneal injection, three times a week, weighing every 3 days, the caliper measured the size of the drug and was executed after 30 days. The number of gastric cancer cells was measured by weighing. Tunel method. Compared with the control group, P05 was statistically significant. Results: the weight of the tumor was removed after the nude mice were killed. The weight of the four groups was 647.8 鹵33.9mg) 595.3 鹵30.3mg), there was statistical difference between the four groups and the control group. Conclusion: there is a statistical difference between the four groups. Tumor weight and volume were significantly reduced after treatment.
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

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本文編號：1555716