本文關(guān)鍵詞： 乳腺癌MCF-7細(xì)胞 阿司匹林 血小板 遷移 侵襲　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,在女性惡性腫瘤發(fā)病率中占據(jù)主要地位,乳腺癌的發(fā)病率也逐年增高。乳腺癌是中國女性最常見惡性腫瘤,中國乳腺癌新增病例數(shù)占全球的12.2%,中國乳腺癌死亡人數(shù)占全球乳腺癌死亡人數(shù)的9.6%。約90%的乳腺癌死亡患者是由遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移引起。因此深入探究乳腺癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的機(jī)制并找到預(yù)防其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的靶點對改善乳腺癌患者預(yù)后有非常重要的意義。阿司匹林(aspirin)是一種非甾體類抗炎藥誕生于1899年,最早用于解熱鎮(zhèn)痛,現(xiàn)多用于預(yù)防血栓等疾病。1968年Gasic首次提出aspirin在腫瘤預(yù)防和治療中的潛在作用,并提出阿司匹林可預(yù)防腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,隨后的動物實驗、流行病學(xué)調(diào)查研究及臨床試驗研究證實,阿司匹林對減少乳腺癌、消化道腫瘤、前列腺癌、肝癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要的影響,但其具體機(jī)制仍未得到闡明。繼往臨床研究發(fā)現(xiàn)血小板增多可影響腫瘤預(yù)后,之后的研究發(fā)現(xiàn)活化的血小板可與腫瘤細(xì)胞作用分泌多種細(xì)胞因子,影響腫瘤細(xì)胞基因表達(dá),使腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition EMT),繼而增加腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力。研究目的:探討阿司匹林對血小板誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和遷移侵襲能力的影響。研究方法:1、阿司匹林對MCF-7乳腺癌細(xì)胞的增殖影響(1)使用CCK-8檢測不同濃度阿司匹林對MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。2、阿司匹林、花生四烯酸激活的血小板及不同濃度阿司匹林預(yù)處理花生四烯酸激活的血小板分別干預(yù)MCF-7細(xì)胞后,對腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。(1)實驗分組a、空白對照組(control group):加入等體積1640培養(yǎng)基;b、低濃度阿司匹林組(low aspirin group):加入終濃度為0.5mmol/l的阿司匹林;c、高濃度阿司匹林組(high aspirin group):加入終濃度2mmol/l的阿司匹林;d、花生四烯酸(Arachidonic Acid)激活的血小板(Platelet)組(platelet group):加入花生四烯酸終濃度為20μmmol/l,血小板終濃度為150000個/μl;e、低濃度阿司匹林預(yù)處理花生四烯酸激活的血小板組(low aspirin+plateletgroup):加入0.5mmol/l阿司匹林、20μmmol/l花生四烯酸及血小板;f、高濃度阿司匹林預(yù)處理花生四烯酸激活的血小板組(highaspirin+plateletgroup):加入2mmol/l阿司匹林、20μmmol/l花生四烯酸及血小板。(2)按實驗分組方法干預(yù)后,倒置顯微鏡下觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)變化。(3)Western Blot檢測腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白E-cadherin及Vimentin的表達(dá)。3、阿司匹林、花生四烯酸激活的血小板及不同濃度阿司匹林預(yù)處理花生四烯酸激活的血小板分別干預(yù)MCF-7細(xì)胞后對腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力的影響。(1)按實驗分組干預(yù)腫瘤細(xì)胞后采用劃痕實驗、Transwell實驗檢測MCF-7細(xì)胞遷移侵襲能力。研究結(jié)果:1、0.5mmol/l-2mmol/l的阿司匹林對MCF-7細(xì)胞增殖無影響,阿司匹林濃度≥5mmo/l時對MCF-7細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用。2、阿司匹林、活化血小板及阿司匹林干預(yù)血小板活化后對MCF-7細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響:(1)細(xì)胞形態(tài)變化:空白對照組細(xì)胞為多角形上皮樣細(xì)胞形態(tài),花生四烯酸激活的血小板組細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)殚L梭形的間質(zhì)樣細(xì)胞形態(tài)。低濃度和高濃度阿司匹林預(yù)處理花生四烯酸激活的血小板組細(xì)胞以多邊形為主。低濃度和高濃度阿司匹林單獨處理組細(xì)胞形態(tài)也為多角形上皮樣細(xì)胞形態(tài)。(2)腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白的表達(dá)變化:活化的血小板處理后與對照組相比E-cadherin表達(dá)顯著減少(P0.01),Vimentin的表達(dá)顯著增加(P0.01)。阿司匹林預(yù)處理血小板活化后干預(yù)MCF-7細(xì)胞,E-cadherin表達(dá)顯著增高(P0.01),Vimentin的表達(dá)顯著減少(P0.05)。阿司匹林單獨處理后的MCF-7細(xì)胞E-cadherin及Vimentin的表達(dá)亦無顯著改變(P0.05)。以上結(jié)果提示:活化的血小板與MCF-7細(xì)胞共培養(yǎng)后可誘導(dǎo)其發(fā)生EMT;阿司匹林預(yù)處理花生四烯酸活化的血小板后,阿司匹林可抑制血小板介導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞的EMT。3、阿司匹林、活化血小板及阿司匹林干預(yù)血小板活化后對MCF-7細(xì)胞遷移侵襲能力的影響:(1)細(xì)胞劃痕實驗提示:活化血小板處理組劃痕閉合分?jǐn)?shù)較對照組顯著增大(P0.05)。低濃度和高濃度阿司匹林預(yù)處理血小板組的劃痕閉合分?jǐn)?shù)較活化血小板處理組顯著減小(P0.05、P0.01),低濃度和高濃度阿司匹林單獨處理組劃痕閉合分?jǐn)?shù)與對照組無顯著差別(P0.05、P0.05)。(2)Transwell檢測MCF-7遷移能力:活化血小板處理組腫瘤細(xì)胞遷移能力較對照組顯著增強(qiáng)(P0.01)。低濃度和高濃度阿司匹林預(yù)處理血小板組腫瘤細(xì)胞遷移能力較活化血小板處理組顯著減弱(P0.01、P0.01),低濃度和高濃度阿司匹林單獨處理組腫瘤細(xì)胞遷移能力與對照組相比無顯著性差異(P0.05、P0.05)。(3)Transwell檢測MCF-7侵襲能力:活化血小板處理組腫瘤細(xì)胞侵襲能力較對照組顯著增強(qiáng)(P0.01)。低濃度和高濃度阿司匹林預(yù)處理血小板組腫瘤細(xì)胞侵襲能力較活化血小板處理組顯著減弱(P0.01,P0.01),低濃度和高濃度阿司匹林單獨處理組腫瘤細(xì)胞侵襲能力與對照組相比無顯著性差異(P0.05,P0.05)。研究結(jié)論:活化的血小板與MCF-7細(xì)胞共培養(yǎng)后可誘導(dǎo)其發(fā)生EMT,進(jìn)而增強(qiáng)其遷移侵襲能力,阿司匹林則可通過抑制環(huán)氧合酶活性減少血小板活化,進(jìn)而抑制活化血小板誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞EMT及遷移侵襲能力。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9
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本文編號：1550141