本文關(guān)鍵詞： 腎透明細胞癌 侵襲轉(zhuǎn)移 睪丸孤核受體4 miR-32-5p circ_000002　出處：《浙江大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景和目的：腎透明細胞癌(Clear Cell Renal cell carcinoma, ccRCC)是起源于腎實質(zhì)泌尿小管上皮系統(tǒng)的惡性腫瘤,是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤。腎透明細胞癌起病較隱匿,大多無典型的臨床表現(xiàn),早期診斷率不高,其中大約30%患者在診斷時已發(fā)生轉(zhuǎn)移,失去手術(shù)機會。轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌的治療目前主要依賴靶向治療,但其平均有效時間僅6-15個月。因此,深入研究腎透明細胞癌轉(zhuǎn)移的機制,尋求更好的治療轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌的方法顯得尤為重要。近兩年我們的研究發(fā)現(xiàn)TR4可以通過CCL2/CCR或者miR-373-3p促進前列腺癌的遷移和侵襲,亦可影響前列腺癌干細胞的侵襲和遷移能力促進前列腺癌轉(zhuǎn)移,并且我們也發(fā)現(xiàn)TR4可以促進前列腺癌的化療抵抗和放療抵抗。TR4在前列腺癌轉(zhuǎn)移以及前列腺癌放化療抵抗中的作用已逐漸得到研究人員的認可并引起重視,而關(guān)于TR4在腎癌中的作用尚未見報道。在本研究中,我們探索了TR4在ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用,并通過運用分子生物學方法闡述其具體機制。研究方法和結(jié)果：1.TR4在人類ccRCC組織標本和細胞株中的表達、與患者預后相關(guān)性及其在ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移中功能的研究我們通過對ccRCC患者組織標本進行免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移性ccRCC患者腎癌組織中TR4表達明顯高于非轉(zhuǎn)移性ccRCC患者,并且通過TCGA數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)TR4與ccRCC患者的預后呈負相關(guān),進一步在細胞水平發(fā)現(xiàn)TR4在侵襲能力較強的ccRCC細胞株中表達相對較高,并且通過調(diào)控細胞株內(nèi)TR4表達水平在細胞進一步驗證TR4促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移的作用。2.TR4通過miR-32-5p/TR4/HGF/Met信號通路促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移的具體機制研究我們運用Western blot, CbIP、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒�、拯救實驗等方法在細胞層面證明TR4可以通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控上調(diào)HGF/Met/MMP2/MMP9通路的表達促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,miR-32-5p可以抑制TR4及TR4下游通路HGF/Met/MMP2/MMP9的表達進而抑制ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,并且miR-32-5p可以通過與TR43'UTR的結(jié)合抑制TR4的表達。最后通過動物實驗進一步驗證細胞實驗的結(jié)果。3.TR4通過上調(diào)circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1通路促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移的具體機制研究我們運用qRT-PCR、Western blot、ChIP、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒�、拯救實驗、RNA-pulldown等方法證明TR4可以通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控上調(diào)circ_000002的表達,而circ_000002可以和miR-19s-3p、miR-29s-3p結(jié)合,影響其分布進而促進其下游IGF-1的表達,最終促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移。研究結(jié)論：本研究在ccRCC組織標本中發(fā)現(xiàn)TR4在轉(zhuǎn)移性ccRCC中高表達,并在細胞層面、動物層面驗證TR4可以促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,進一步在細胞層面探索其具體機制發(fā)現(xiàn)TR4可以通過上調(diào)HGF/Met/MMP2/MMP9通路活性促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,并且發(fā)現(xiàn)其上游分子miR-32-5p可以靶向TR4抑制TR4的表達及其下游HGF/Met/MMP2/MMP9通路。此外我們也發(fā)現(xiàn)TR4也可以通過上調(diào)circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1通路活性促進ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:Background and objective: clear Cell Renal cell carcinoma (ccRCCs) is a malignant tumor originating from the renal parenchymal urothelial system and a common malignant tumor of the urinary system. The early diagnosis rate is not high, about 30% of them have metastasized at the time of diagnosis and have lost the opportunity of operation. The treatment of metastatic clear cell renal cell carcinoma is mainly dependent on targeted treatment, but its average effective time is only 6-15 months. It is particularly important to study the mechanism of metastasis of renal clear cell carcinoma and to find a better treatment for metastatic renal clear cell carcinoma. In the last two years, we have found that TR4 can promote the migration and invasion of prostate cancer through CCL2/CCR or miR-373-3p. It also affects the ability of prostate cancer stem cells to invade and migrate to promote the metastasis of prostate cancer, We also found that the role of TR4 in promoting chemotherapy resistance and radiotherapy resistance of prostate cancer. TR4 in prostate cancer metastasis and chemoradiotherapy resistance of prostate cancer has gradually been recognized and paid attention to by researchers. However, the role of TR4 in renal cell carcinoma has not been reported. In this study, we explored the role of TR4 in the invasion and metastasis of ccRCC. The expression of TR4 in human ccRCC tissues and cell lines was studied by molecular biology. Correlation with prognosis and its role in ccRCC invasion and Metastasis; the expression of TR4 in metastatic ccRCC patients was significantly higher than that in non-metastatic ccRCC patients by immunohistochemical staining. TCGA database showed that TR4 was negatively correlated with the prognosis of ccRCC patients, and the expression of TR4 was relatively high in ccRCC cell lines with strong invasiveness at the cellular level. The effect of TR4 on the invasion and metastasis of ccRCC was further verified by regulating the expression of TR4 in the cell line. 2. The specific mechanism of promoting the invasion and metastasis of ccRCC by miR-32-5p/TR4/HGF/Met signaling pathway was studied. We used Western blot, CbIPand double luciferase reporter gene experiment. At the cell level, it was demonstrated that TR4 could up-regulate the expression of HGF/Met/MMP2/MMP9 pathway through transcriptional regulation to promote the invasion and metastasis of ccRCC. MiR-32-5p could inhibit the expression of HGF/Met/MMP2/MMP9 in TR4 and TR4 downstream pathway and then inhibit ccRCC invasion and metastasis. And miR-32-5p can inhibit the expression of TR4 by binding with TR43'UTR. Finally, we further verify the results of cell experiment by animal experiments. 3. TR4 can promote the invasion and metastasis of ccRCC through up-regulation of circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1 pathway. Enzyme reporter gene experiment, Rescue RNA-pulldown method showed that TR4 could up-regulate the expression of circ_000002 through transcriptional regulation, while circ_000002 could bind to miR-19s-3pnmiR-29s-3p, which affected its distribution and promoted the expression of IGF-1 downstream. In this study, we found that high expression of TR4 in metastatic ccRCC was found in ccRCC tissues, and at the cell level, it was demonstrated that TR4 could promote invasion and metastasis of ccRCC. Further exploring its specific mechanism at the cellular level, we found that TR4 can promote the invasion and metastasis of ccRCC by up-regulating the activity of HGF/Met/MMP2/MMP9 pathway. It was also found that upstream miR-32-5p could target TR4 to inhibit the expression of TR4 and its downstream HGF/Met/MMP2/MMP9 pathway. In addition, we also found that TR4 could promote ccRCC invasion and metastasis by upregulating the activity of circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1 pathway.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

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本文編號：1545801