本文關(guān)鍵詞： miR-490-3p 結(jié)腸癌 腫瘤 miRNA SW480　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:結(jié)腸癌對人們健康有著極大危害,是癌癥相關(guān)死亡率位列第三位的惡性腫瘤。雖然早期的結(jié)腸癌5年生存率大約為90%,但在轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌中其生存率下降至15%。侵襲轉(zhuǎn)移是其最常見的致死原因。結(jié)腸癌是多步驟、多階段和多基因參與的細胞遺傳性疾病。micro RNA(miRNA)是一種普遍存在于動植物體內(nèi)的單鏈RNA,約由21-24個核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼的小分子RNA,可影響靶基因的表達,抑制某種蛋白質(zhì)的合成,從而發(fā)揮生物學(xué)功能。micro RNA-490(簡稱miR-490)是miRNAs家族中的一員,是近年來研究較多的一種miRNA,位于7號染色體。研究表明miR-490-3p可以抑制多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。如miR-490-3p可以抑制卵巢癌的發(fā)生發(fā)展,在胃癌中miR-490-3p的低表達可以通過修飾染色質(zhì)以增強幽門螺旋桿菌的致癌作用,miR-490-3p也可抑制肺癌細胞的增殖等。雖然有研究報道m(xù)iR-490-3p在結(jié)腸癌中呈現(xiàn)低表達,然而miR-490-3p的低表達與患者的臨床病理特征、預(yù)后之間的關(guān)系以及miR-490-3p對結(jié)腸癌細胞的生物學(xué)行為的影響仍不十分清楚。本研究就miR-490-3p在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的作用進行研究。目的:1研究miR-490-3p在結(jié)腸癌組織中的表達情況及與臨床病理指標(biāo)和患者預(yù)后的關(guān)系;2探索miR-490-3p對結(jié)腸癌細胞SW480細胞生物學(xué)行為的影響及作用。材料和方法:1材料1.1組織標(biāo)本:選取2010年7月至2010年12月有完整病理資料的配對的結(jié)腸癌患者腫瘤原發(fā)灶和相應(yīng)癌旁正常黏膜組織標(biāo)本40例;1.2細胞系:SW480細胞系;1.3 miR-490-3p模擬物及其對照物。2方法2.1 q RT-PCR方法檢測miR-490-3p在組織中的表達,分析其與臨床病理指標(biāo)和預(yù)后的關(guān)系;2.2 Transwell侵襲實驗評估細胞侵襲能力;2.3細胞周期實驗(PI染色法)檢測細胞周期;2.4平板克隆形成實驗評估細胞克隆形成能力;2.5 Western Blot實驗檢測EMT相關(guān)蛋白的表達變化;2.6統(tǒng)計學(xué)方法:卡方檢驗分析miR-490-3p的表達與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系,采用Kaplan-Meier法進行生存分析,兩兩比較采用非配對t檢驗,P0.05被認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1結(jié)腸組織標(biāo)本中miR-490-3p表達情況及臨床病理特征、生存分析與相對應(yīng)的正常結(jié)腸黏膜組織相比,40例結(jié)腸癌組織中miR-490-3p顯著低表達(0.87±0.17vs.1.97±0.39,P=0.01)。對40例結(jié)腸癌miR-490-3p表達與患者的臨床病理特征分析,結(jié)果顯示miR-490-3p表達與TNM分期和遠處轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(TNM分期:P=0.025;遠處轉(zhuǎn)移:P=0.048)。生存分析顯示癌組織中micro RNA-490-3p低表達者(23例)的平均生存時間明顯低于高表達患者(17例),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(c2=5.55,P=0.018)。2轉(zhuǎn)染后兩組細胞中miR-490-3p的表達情況RT-PCR結(jié)果顯示細胞轉(zhuǎn)染miR-490-3p模擬物(miR-490-3p mimics,簡稱m490)后細胞內(nèi)的miRNA-490-3p水平明顯高于轉(zhuǎn)染miR-490-3p陰性對照模擬物的細胞(miR-490-3p mimics Negative Control,簡稱m NC),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(m490組vs.m NC組:1.04±0.17vs.58.97±3.04,P0.001)。3轉(zhuǎn)染miR-490-3p模擬物后,miR-490-3p對結(jié)腸癌細胞SW480生物學(xué)行為的影響3.1過表達miR-490-3p對結(jié)腸癌細胞SW480侵襲能力的影響與對照組轉(zhuǎn)染miR-490-3p mimics Negative Control(m NC組)比較,轉(zhuǎn)染miR-490-3p mimics(m490組)后結(jié)腸癌細胞SW480侵襲轉(zhuǎn)移能力顯著降低(m490組vs.m NC組:134.80±23.76vs.214.55±9.55,P=0.048)。3.2過表達miR-490-3p后結(jié)腸癌細胞SW480EMT相關(guān)蛋白的表達情況進一步驗證上述結(jié)果,對幾種EMT相關(guān)蛋白進行檢測。神經(jīng)性鈣粘附蛋白(N-cadherin)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP2)、波形蛋白(Vimentin)在上調(diào)miR-490-3p后其表達量顯著降低,而上皮性鈣粘附蛋白(E-cadherin)則表達增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(m490組vs.m NC組:N-cad:0.93±0.05vs.1.07±0.05,P=0.01,E-cad:1.20±0.09vs.0.89±0.09,P0.001,MMP2:0.91±0.075vs.1.10±0.09,P0.001,vinmentin:0.84±0.10vs.1.16±0.10,P0.001),EMT相關(guān)蛋白的檢測結(jié)果與transwell細胞侵襲實驗相一致。3.3過表達miR-490-3p對結(jié)腸癌細胞SW480克隆形成能力的影響與對照組(m NC組)比較,轉(zhuǎn)染miR-490-3p mimics(m490組)后的結(jié)腸癌細胞SW480克隆形成能力顯著減弱(m490組vs.m NC組:117±9.17vs.145.30±13.80,P=0.04),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.4過表達miR-490-3p對結(jié)腸癌細胞SW480細胞周期的影響本研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染miR-490-3p mimics后,產(chǎn)生G2-M期阻滯的結(jié)腸癌細胞SW480明顯增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義:G2-M期分布(m490組vs.m NC組:5.72±0.62 vs.2.97±1.84,P=0.034)。結(jié)論:1 miR-490-3p在結(jié)腸癌組織中顯著低表達,與腫瘤的TNM分期和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān);miR-490-3p表達水平低的患者預(yù)后較差;2轉(zhuǎn)染miR-490-3p mimics可抑制結(jié)腸癌細胞的侵襲,減弱其克隆形成能力,并使癌細胞發(fā)生G2-M期阻滯,miR-490-3p可能成為結(jié)腸癌潛在的新靶點。
[Abstract]:BACKGROUND : Colorectal cancer has a great potential for human health , and it is the third malignant tumor associated with cancer - related mortality . Although early stage colon cancer has a 5 - year survival rate of about 90 % , it is not clear that miR - 490 - 3P can inhibit the development of ovarian cancer . The expression of miR - 490 - 3P in 40 cases of colon cancer was correlated with the clinical and pathological characteristics of the patients . The results showed that the expression of miR - 490 - 3P was correlated with TNM staging and distant metastasis ( TNM stage : P = 0.025 ; distant metastasis : P = 0.048 ) . The expression of miR - 490 - 3P in colon cancer cell SW480 was significantly lower than that of control group ( m490 group vs . m NC group : 134.80 鹵 23.76vs . 214.55 鹵 9.55 , P = 0.048 ) . The expression of SW480 in colon cancer cells transfected with miR - 490 - 3P ( m490 group ) was significantly decreased ( m490 vs . m NC group : 117 鹵 9.17 vs . 145.30 鹵 13.80 , P = 0.04 ) . The difference was statistically significant . The results showed that the G2 - M phase distribution ( m490 vs . m NC group : 5.72 鹵 0.62 vs . 2.97 鹵 1.84 , P = 0.034 ) . Conclusion : 1 miR - 490 - 3P is significantly lower in colon cancer tissue , which is associated with TNM stage and distant metastasis of tumor ; the poor prognosis in patients with low expression level of miR - 490 - 3P can inhibit invasion of colon cancer cells , weaken its clonal formation ability , and cause G2 - M phase block in cancer cells , and miR - 490 - 3P may become a potential new target for colon cancer .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.35

【參考文獻】

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本文編號：1545577