本文關(guān)鍵詞： Lfcin B 胃癌細胞 細胞凋亡 基因表達 荷瘤鼠　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探究乳鐵蛋白抗菌肽(LfcinB)體外對人胃癌細胞系MGC803細胞增殖和細胞凋亡、細胞周期,以及體內(nèi)對移植瘤生長的影響,探討其相關(guān)分子機制,為研發(fā)治療胃癌的新手段和新方法提供基礎(chǔ)。方法從體外、體內(nèi)實驗兩個方面來探討LfcinB對胃癌的作用及其機制。在體外實驗,用LfcinB作用于胃癌細胞系MGC803,檢測其對細胞增殖、凋亡和周期的影響,同時檢測其對相關(guān)基因表達的影響。具體程序如下,1.CCK-8法測定10~(-6)~10_(-2) mg/ml不同濃度梯度的LfcinB對胃癌細胞株MGC803作用24、48和72 h后細胞增殖的影響。2.流式細胞術(shù)檢測LfcinB處理胃癌細胞系MGC803后其細胞周期與細胞凋亡的變化。3.RT-PCR檢測凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax和caspase-3的m RNA變化情況。4.Western blot檢測MGC803細胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白變化。體內(nèi)實驗構(gòu)建荷人胃癌裸鼠(BALB/cAnN-nu/nu)動物模型,實驗程序如下,1.將MGC803細胞接種到裸鼠皮下進行造模,并分為4組:生理鹽水組,乳鐵蛋白抗菌肽高劑量組,乳鐵蛋白抗菌肽低劑量組,順鉑對照組。根據(jù)分組將不同劑量的LfcinB腹腔注射裸鼠腹部,觀察移植瘤生長情況。2.將剝離的移植瘤組織用來做免疫組化實驗,觀察凋亡相關(guān)蛋白指標變化情況。3.用適量瘤組織做TUNEL實驗,檢測不同濃度組的凋亡情況。4.用Western blot實驗檢測組織中不同蛋白變化情況。結(jié)果體外實驗,1.不同濃度LfcinB對胃癌細胞株MGC803的增殖均具有抑制作用,但在作用24 h時,抑制效果不明顯,48 h以后有抑制效果,最高抑制率可達到(30.62±0.72)%,72 h的抑制率為(42.06±0.72)%,并且與陰性對照組比較,差異具有顯著性(P0.05,P0.01)。2.LfcinB能促進胃癌細胞株MGC803細胞凋亡,作用24 h時已能促進細胞凋亡,但效果不明顯,其中24 h以早期凋亡為主,48 h后開始出現(xiàn)晚期凋亡,72 h總凋亡率最高可達到(25.78±1.74)%,DDP組則主要作用細胞早期凋亡。并且具有時間和劑量依賴性(P0.05,P0.01)。3.細胞周期結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,G0/G1期細胞數(shù)量略下降,S期細胞逐漸增多,說明LfcinB在10~(-6)~10_(-2) mg/ml濃度范圍內(nèi)均能影響胃癌細胞的周期,這可能作用于S/G2期,使細胞阻滯在S期產(chǎn)生影響,并且隨作用延長呈時間濃度依賴性,但整體來看作用趨勢不明顯。4.Lfcin B能顯著抑制胃癌細胞株MGC803bcl-2基因的mRNA表達,同時促進bax和caspase-3基因的mRNA表達,并且隨著LfcinB濃度的增高相關(guān)基因下降或上升越明顯(P0.05,P0.01)。5.Western blot結(jié)果也顯示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表達,促進Caspase-3和Bax蛋白表達,其變化規(guī)律與mRNA相同(P0.05,P0.01)。體內(nèi)實驗,1.根據(jù)瘤重、瘤體積變化結(jié)果可知,不同劑量的LfcinB均能抑制移植瘤的生長,但高劑量LfcinB雖是低劑量濃度一倍,但抑瘤作用不是等比增長,而是近似相同。2.免疫組化實驗說明,組織中Bax、Caspase-3的蛋白在陰性對照組中幾乎不表達,在高、低劑量組中表達相對較高,而Bcl-2在對照組中表達比較多,在低劑量組中呈散在分布,在高劑量組中幾乎不表達。3.TUNEL實驗表明,高劑量LfcinB組中細胞凋亡明顯,低劑量凋亡程度較低,凋亡指數(shù)(AI)分別為(1.84±0.39)%,(8.46±1.01)%,(11.63±1.92)%,(16.54±2.81)%。4.Western-blot實驗結(jié)果趨勢與免疫組化一致,Bax、Caspase-3蛋白表達量隨劑量升高而升高,Bcl-2蛋白表達隨劑量升高而降低,與陰性對照組比較,差異具有顯著性意義(P0.05,P0.01)。結(jié)論1.LfcinB能顯著抑制MGC803胃癌細胞株的生長、誘導(dǎo)細胞凋亡,作用MGC803細胞周期的S/G2期,使其阻滯在S期。2.LfcinB顯著抑制移植瘤的生長,并能體內(nèi)介導(dǎo)移植瘤細胞凋亡。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of LfcinB ( LfcinB ) on proliferation and apoptosis of gastric cancer cell line MGC803 . The effect of LfcinB on proliferation , apoptosis and apoptosis of gastric cancer cell line MGC803 was investigated by Western blot . The results showed that LfcinB could inhibit the expression of bax and caspase - 3 genes and promote the expression of bax and caspase - 3 genes . The results of Western blot showed that LfcinB could inhibit the expression of Bcl - 2 protein and promote the expression of Caspase - 3 and Bax protein . The expression of Bax and Caspase - 3 in high - dose LfcinB group was significantly higher than that in the control group . Conclusion 1 . LfcinB can significantly inhibit the growth of MGC803 gastric cancer cell line , induce apoptosis , inhibit the S / G2 phase of MGC803 cell cycle , arrest it in S phase . 2 . LfcinB significantly inhibits the growth of transplanted tumor and can mediate the apoptosis of transplanted tumor cells in vivo .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：1545271