本文關鍵詞： microRNA miR-193a-3p 前列腺癌 細胞增殖 細胞周期 CyclinD1　出處：《浙江大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景：前列腺癌是男性人群中最常見的腫瘤之一。根據(jù)國家癌癥中心的最新數(shù)據(jù),前列腺癌自2008年起稱為泌尿系統(tǒng)中發(fā)病率最高的腫瘤,在男性惡性腫瘤發(fā)病率排名中居第6位。然而,目前我們對于前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的生物學機制缺乏更為深入的了解。除了常見的流行病學和遺傳學因素,許多錯綜復雜的分子事件是導致腫瘤細胞形成、進展和轉移的深層次原因。microRNA(又稱為miRNA)是小分子(長度約22nt)的非編碼RNA,它在諸多生物信號通路中都具備至關重要的調控作用。異常表達的microRNA常常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關。已有諸多研究表明前列腺癌與miRNA表達譜異常密切相關。 目的：本研究首先利用定量PCR技術考察miR-193a-3p在兩種不同的前列腺癌細胞株(DU-145,PC3)中的表達情況,并以細胞功能實驗展示了轉染miR-193a-3p對前列腺癌細胞中的生物學功能的影響。隨后根據(jù)生物信息學知識,篩查潛在的miR-193a-3p作用靶點進行驗證,最后通過靶基因分子的沉默和過表達實驗,證實]miR-193a-3p對靶基因的調控意義。 方法：1.比較前列腺癌細胞株(DU-145, PC3)中與正常前列腺上皮細胞(RWPE-1)中miR-193a-3p的表達是否存在差異； 2.通過體外轉染miR-193a-3p模擬體的方式使細胞進入miR-193a-3p過表達狀態(tài),在此基礎上,通過細胞活力分析實驗(CCK-8)、流式細胞周期檢測、平板克隆形成,研究miR-193a-3p與前列腺癌細胞的何種功能有關； 3.利用生物信息學工具(TargetScan),預測miR-193a-3p的靶基因。并且通過定量PCR技術,Western Blot技術進行轉錄水平及翻譯水平的驗證。與此同時進行熒光素酶雙報告系統(tǒng)對miR-193a-3p的作用序列進行進一步的鑒定。以及使用RNA干擾、質粒過表達實驗驗證miR-193a-3p與靶基因的調控關系。 結果：1.在前列腺癌細胞株中,miR-193-3p呈現(xiàn)低表達狀態(tài),其中DU-145中miR-193a-3p的含量是RWPE-1的46.3%,在PC3中這個比例是19.0%； 2.通過對DU-145及PC3細胞株轉染(?)niR-193a-3p模擬體獲得miR-193a-3p過表達狀態(tài)。首先我們可以觀察到細胞的活力明顯受到了抑制。PC3細胞株中,25nM濃度的mniR-193a-3p轉染會使細胞活力下降13%(轉染后48小時)和24%(轉染后72小時)。DU-145細胞株中25nM的模擬體轉染可使細胞活力下降17%(48小時)和63%(72小時)。流式細胞技術顯示miR-193a-3p模擬體可顯著誘導腫瘤細胞的G1期阻滯。DU-145和PC3的G1期細胞百分比與對照組(NC)相比分別為77.36%對54.89%(p0.05),81.57%對61.80%(p0.05)�？寺⌒纬蓪嶒炛�,miR-193a-3p同樣會抑制細胞的集落形成。DU-145和PC3細胞株在轉染miR-193a-3p后的克隆形成率分別為59.1%(p0.05)和31.6%(p0.05)。 3.根據(jù)生物信息學工具的預測,miR-193a-3p的靶基因可能為Cyclin D1,MMP-9, CADM1等。根據(jù)定量PCR的驗證結果,Cyclin D1在DU-145及PC3細胞轉染miR-193a-3p后出現(xiàn)轉錄水平明顯下調,而MMP-9和CADM-1并未顯示出如此趨勢。進一步的熒光素酶雙報告系統(tǒng)實驗確認了Cyclin D1是miR-193a-3p的直接作用靶點。對Cyclin D1的特異性沉默和過表達Rescue實驗進一步證實了它在細胞周期及增殖過程中的作用。 結論：1.miR-193a-3p在前列腺癌細胞中呈低表達； 2.細胞內過表達miR-193a-3p可使前列腺癌細胞DU-145和PC3出現(xiàn)G1期阻滯,抑制細胞增殖； 3. Cyclin D1是miR-193a-3p的靶基因,通過抑制Cyclin D1的表達,miR-193a-3p可以將細胞周期阻滯在G1期,進而抑制細胞增殖。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 韓蘇軍;張思維;陳萬青;李長嶺;;中國前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流行趨勢分析[J];臨床腫瘤學雜志;2013年04期

，

本文編號：1530875