本文關(guān)鍵詞： 胃腫瘤 微載體 MKN45細胞 動物模型　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的基于新型微載體(microcarrier 6)復(fù)合人胃癌MKN45細胞接種于具有正常免疫功能的小鼠,以期建立新型人胃癌正常免疫小鼠移植瘤模型,并探討其病理學(xué)特征。研究方法將60只雄性C57BL/6小鼠隨機分成3組,2D組、對照組和3D組,每組20只;2D組只接種MKN45細胞,對照組只接種微載體,3D組接種細胞-微載體復(fù)合體。將人胃癌MKN45細胞與microcarrier 6共培養(yǎng)建立三維腫瘤細胞培養(yǎng)體系,采用皮下接種法將細胞-微載體復(fù)合體接種于C57BL/6小鼠皮下建立小鼠移植瘤模型。觀察記錄小鼠一般狀況及瘤體生長情況,統(tǒng)計成瘤時間及成瘤率,分別于接種第10、20、30天分三批處死荷瘤小鼠并對瘤組織進行病理學(xué)檢查。采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料數(shù)據(jù)以x士s表示,采用獨立樣本t檢驗進行組間比較,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)果1.基于microcarrier6體外建立MKN45細胞三維培養(yǎng)體系:2D環(huán)境下觀察MKN45細胞貼壁,呈不規(guī)則形;microcarrier 6鏡下觀察為不規(guī)則團狀或長梭狀,質(zhì)地疏松;MKN45細胞與microcarrier 6共培養(yǎng)24h后可以看到MKN45細胞可以很好的貼附在microcarrier6上,接種均勻,達到飽和。2.動物生存及成瘤情況:2D組和對照組小鼠食欲和活動度沒有明顯變化,第10天開始,3D組小鼠活動稍減少;各組食欲、毛發(fā)、體質(zhì)量無明顯差異;實驗過程中沒有小鼠死亡。對照組和2D組小鼠均未成瘤,3D組小鼠在接種后8～10 d即可觸及皮下腫塊,2周左右肉眼可觀察到皮下有隆起包塊,腫塊生長迅速,3周左右即可達到0.5～1cm3體積,成瘤率為80%(16/20只)。3.病理學(xué)檢查:HE染色后光鏡下可見大量雜亂排列、大小不一、異形性明顯的細胞,并向周圍脂肪、肌肉組織浸潤生長;伴有明顯壞死,主要位于腫瘤中央,以20天處死組最為顯著;10天處死組未被清除的部分microcarrier 6被包繞形成肉芽腫,20天時仍可見少許microcarrier 6,30天時microcarrier 6基本被清除干凈;各組移植瘤組織中新生毛細血管豐富,多位于腫瘤邊緣。免疫組化染色結(jié)果顯示,CA199、CEA、COX-2、CK-7均為陽性表達,進一步證實異形性細胞為人腫瘤細胞。研究結(jié)論本實驗成功基于microcarrier 6復(fù)合人胃癌MKN45細胞在正常免疫小鼠中建立了人胃癌小鼠移植瘤模型,且移植瘤的病理學(xué)特征符合人胃癌的特點,此模型可以更好的研究和進一步闡明胃癌在免疫功能正常機體中發(fā)生、發(fā)展機制,同時也為胃癌的精準化個體治療及抗癌藥的研發(fā)提供了較以往更有價值的新的動物模型。
[Abstract]:Objective to establish a xenograft tumor model of a new type of human gastric cancer immunized mice based on a novel microcarrier microcarrier 6 combined with human gastric cancer MKN45 cells inoculated into mice with normal immune function. Methods 60 male C57BL / 6 mice were randomly divided into 3 groups: 2D group, control group and 3D group. 20 mice in each group were inoculated with MKN45 cells only. Human gastric cancer MKN45 cells were co-cultured with microcarrier 6 to establish a three-dimensional tumor cell culture system. C57BL / 6 mice were inoculated subcutaneously with cell-microcarrier complex to establish transplanted tumor model. The general status and tumor growth of mice were observed and recorded, and the tumorigenesis time and tumorigenesis rate were counted. The tumor-bearing mice were killed in three batches on the 30th day of the 10th day of inoculation and the pathological examination of the tumor tissue was carried out. The data were analyzed by SPSS 13.0 statistical software. The measurement data were expressed as x + s, and the independent sample t test was used to carry out the inter-group comparison. Results 1. The three-dimensional culture system of MKN45 cells based on microcarrier6 was established in vitro to observe the adhesion of MKN45 cells under the environment of 1: 2D. The cells were observed to be irregular clusters or long fusiform cells under the microscope. 2. After co-culture of MKN45 cells with microcarrier6 for 24 hours, it was found that MKN45 cells could be well attached to microcarrier6, inoculated evenly and reached saturation. 2. There was no significant change in appetite and activity of mice in 2: 2D group and control group. On the 10th day, the activity of mice in 3D group decreased slightly, but there was no significant difference in appetite, hair and body mass in each group. No mice died in the experiment. In the control group and 2D group, the mice in the control group and the 2D group could reach the subcutaneous mass about 2 weeks after inoculation. The tumor could reach 0.5 ~ 1 cm ~ 3 volume in 3 weeks, and the tumorigenesis rate was 80 / 16 / 20. Pathological examination showed a large number of irregular cells with different size and obvious heteromorphism, and infiltrated and grew in the surrounding fat and muscle tissue under the light microscope after the pathological examination: 1. There was obvious necrosis, mainly located in the center of the tumor. The most significant part of microcarrier 6 in the death group on the 20th day was that microcarrier 6 was removed basically after 20 days of death, and the part of microcarrier 6 was wrapped around to form granuloma after 20 days of death. At 30 days, a little microcarrier 6 could still be removed. The new capillaries were abundant in the transplanted tumor tissues in each group, and most of them were located at the margin of the tumor. The immunohistochemical staining showed that the expression of CK-7 was positive in CA199CEACOX-2CK-7 cells. Conclusion the xenograft tumor model of human gastric cancer mice was successfully established in normal immunized mice based on microcarrier 6 combined with human gastric cancer MKN45 cells. The pathological characteristics of transplanted tumor accord with the characteristics of human gastric cancer. This model can better study and further elucidate the mechanism of gastric cancer occurrence and development in normal immune system. It also provides a more valuable animal model for the precise individual treatment of gastric cancer and the development of anti-cancer drugs.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2;R-332

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本文編號：1527348