本文關(guān)鍵詞： 肝細(xì)胞癌 miR-497 血管生成 癌癥轉(zhuǎn)移 VEGFA AEG-1　出處：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的原發(fā)性肝癌(主要是肝細(xì)胞癌)是全球第二大致死性癌癥,發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),全球每年有750,000例新發(fā)病例。目前手術(shù)切除是針對(duì)早期肝癌最行之有效的治療手段。但因肝癌起病隱匿,大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屆晚期,喪失手術(shù)治療時(shí)機(jī)。傳統(tǒng)化療藥物如阿霉素、順鉑等,雖有強(qiáng)勁抗癌效果,但因副作用大、腫瘤靶向性差等原因從而限制了其在肝癌治療中的應(yīng)用價(jià)值。肝癌患者結(jié)局如此凄涼的主要原因還在于我們對(duì)其發(fā)病的分子機(jī)制仍知之甚少,無(wú)法實(shí)施靶向治療。因此,探索肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子事件,闡明其具體機(jī)制并開(kāi)發(fā)有效治療方式是一項(xiàng)十分緊迫的課題。HCC是血管富集的實(shí)體瘤,活躍的血管生成能力和頻發(fā)的轉(zhuǎn)移是肝癌發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中的兩大特征,因此抑制肝癌的血管生成和轉(zhuǎn)移的發(fā)生有望阻斷肝癌的進(jìn)展,成為肝癌治療的突破口。MicroRNAs (miRNAs)是一組保守的非編碼小RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)miRNA表達(dá)水平的改變參與多種腫瘤發(fā)生的重要生物學(xué)過(guò)程。我們前期應(yīng)用表達(dá)譜芯片篩選了肝癌細(xì)胞細(xì)胞株與原代正常肝細(xì)胞差異性表達(dá)的miRNA,其中miR-497在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)低于原代正常肝細(xì)胞。本研究擬進(jìn)一步驗(yàn)證miR-497的差異性表達(dá)并系統(tǒng)研究其在肝癌血管生成和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的功能及作用靶點(diǎn)。 方法運(yùn)用SYBR Green qRT-PCR方法鑒定36對(duì)肝癌和癌旁組織中miR-497的表達(dá)情況,并比較8株肝癌細(xì)胞株和2株正常肝細(xì)胞株中miR-497的表達(dá)差異。通過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞募集實(shí)驗(yàn)、小管生成實(shí)驗(yàn)、transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平探索miR-497的異常表達(dá)在肝癌血管生成和轉(zhuǎn)移中的作用。利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)網(wǎng)站如miRBase、miRNA.ORG、 PicTar、TargetScan等數(shù)據(jù)庫(kù),預(yù)測(cè)miR-497的靶基因,從中篩選與血管生成及轉(zhuǎn)移相關(guān)的靶基因。繼而采用SYBR Green qRT-PCR、Western Blot、ELISA以及Luciferase精確靶點(diǎn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證miR-497對(duì)預(yù)測(cè)靶基因的作用靶點(diǎn),闡明其作用機(jī)制。最后,我們利用肝癌裸鼠皮下移植瘤模型和尾靜脈注射肝癌細(xì)胞構(gòu)建轉(zhuǎn)移瘤模型的方法,驗(yàn)證miR-497在裸鼠體內(nèi)對(duì)肝癌生長(zhǎng)、血管生成和轉(zhuǎn)移的作用。 結(jié)果miR-497在肝癌組織中的表達(dá)水平明顯低于癌旁正常組織,與此一致,miR-497在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)也普遍低于正常肝細(xì)胞株。上調(diào)肝癌細(xì)胞中miR-497的表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的募集能力和促小管形成能力,并能抑制肝癌細(xì)胞自身的遷移侵襲能力。miR-497可直接作用于血管內(nèi)皮因子VEGFA和星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因AE6-1的3’-UTR序列從而發(fā)揮抑制肝癌血管生成和轉(zhuǎn)移的能力。慢病毒介導(dǎo)的miR-497可明顯降低肝癌細(xì)胞的裸鼠皮下成瘤能力、瘤內(nèi)血管生成能力和血液中肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。 結(jié)論我們的研究闡明了miR-497通過(guò)直接抑制靶基因VEGFA和AEG-1從而抑制肝癌的血管生成和轉(zhuǎn)移能力,揭示了miR-497在肝癌發(fā)生中的部分作用和分子機(jī)制,為miR-497及其靶基因作為肝癌治療的新的分子靶點(diǎn)奠定了理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

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