本文關鍵詞： 腦瘤 4EBP1 RNAi 細胞增殖　出處：《山東大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：mTOR (the mammalian target of rapamycin)信號通路作為細胞內(nèi)最重要的信號信號轉導途徑之一,在調(diào)節(jié)細胞的分裂、增殖等方面至關重要。其中,蛋白4EBP1和eIF4E是該信號轉導通路中的重要組成部分,己被證明在多種腫瘤細胞中表達,可作為多種腫瘤發(fā)生的分子標志以及腫瘤治療的靶標。有關4EBP1和eIF4E兩種蛋白在中國人常見的腦腫瘤中表達的研究比較少。因此,我們首先探討了4EBP1和eIF4E在腦膜瘤、星形細胞瘤、膽脂瘤和少突膠質(zhì)細胞瘤組織中的表達及其差異性。研究結果顯示,四種腦部腫瘤組織中均有4EBP1和eIF4E mRNA和蛋白的表達,同時也檢測到自噬標志蛋白LC-3和LAMP-2A的高表達。免疫組化結果表明,與正常腦組織相比,4EBP1和eIF4E兩種蛋白在四種腦部腫瘤組織中的表達量明顯增高,結合其他文獻和本實驗結果可以看出,4EBP1、eIF4E也可作為腦部腫瘤發(fā)生的分子標志之一。利用Hep-2細胞為實驗材料,采用RNAi方法敲低Hep-2細胞中4EBP1蛋白的表達量,然后檢測了4EBP1敲低對細胞增殖、細胞周期進程等的影響,結果顯示,在轉染有效4EBP1 siRNA敲低4EBP1的表達后,細胞內(nèi)p-4EBP1的含量也同步性地減少；轉染有效4EBP1 siRNA 48h-72h后,Hep-2細胞的增殖被明顯抑制,主要表現(xiàn)為DNA復制活性降低,S期以及S期以后的G2、M期的細胞數(shù)目減少；推測敲低細胞內(nèi)4EBP1表達引起p-4EBP1含量的同步性減少,導致了細胞內(nèi)游離的eIF4E降低,從而抑制了細胞增殖和細胞周期進程。利用敲低Hep-2細胞中4EBP1蛋白表達量聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-FU)處理的方法,研究了4EBP1下調(diào)與低劑量的5-FU對細胞增殖以及細胞周期改變是否有協(xié)同作用。初步的研究結果顯示,與單獨敲低或單獨5-FU處理相比,兩者聯(lián)合實驗可使S期細胞數(shù)占總細胞數(shù)的比例有更顯著的增加,說明二者聯(lián)用加重了細胞的S期阻滯,為將來繼續(xù)探討5-FU與自噬抑制相結合,通過抑制自噬使腫瘤細胞增強對抗腫瘤藥物的敏感性、開拓抗腫瘤研究新思路提供理論和實驗基礎。
[Abstract]:As one of the most important signal transduction pathways in cells, mTOR / the mammalian target of rapamycin signaling pathway plays an important role in regulating cell division and proliferation, among which protein 4EBP1 and eIF4E are important components of the signal transduction pathway. It has been proved that it can be expressed in many kinds of tumor cells and can be used as a molecular marker for many kinds of tumorigenesis and as a target for tumor treatment. There are few studies on the expression of 4EBP1 and eIF4E in common brain tumors in Chinese. We first investigated the expression and difference of 4EBP1 and eIF4E in meningioma, astrocytoma, cholesteatoma and oligodendrocytoma. Meanwhile, the high expression of autophagy marker protein LC-3 and LAMP-2A was also detected. The results of immunohistochemistry showed that the expression of eIF4E and 4EBP1 proteins were significantly higher in four kinds of brain tumors than in normal brain tissues. In combination with other literatures and the results of this study, we can see that 4EBP1eIF4E can also be used as one of the molecular markers of brain tumorigenesis. Using Hep-2 cells as experimental materials, the expression of 4EBP1 protein in Hep-2 cells was reduced by RNAi method. Then the effects of 4EBP1 knockout on cell proliferation and cell cycle progression were examined. The results showed that after transfection of 4EBP1 siRNA knockout 4EBP1, the content of p-4EBP1 decreased synchronously. The proliferation of Hep-2 cells was significantly inhibited after transfection of 4EBP1 siRNA 48h-72 h, mainly manifested by the decrease of DNA replication activity in S phase and the number of cells in G2M phase after S phase, suggesting that 4EBP1 expression in knockout cells caused the simultaneous decrease of p-4EBP1 content. It resulted in the decrease of intracellular free eIF4E, which inhibited cell proliferation and cell cycle progression. The method of low expression of 4EBP1 protein combined with 5-FU of 5-fluorouracil was used to reduce the expression of 4EBP1 protein in Hep-2 cells. The effects of 4EBP1 down-regulation and low-dose 5-FU on cell proliferation and cell cycle change were studied. The combination of the two methods can increase the proportion of S phase cells to the total number of cells significantly, which indicates that the combination of the two methods has aggravated the S phase arrest of the cells and further explored the combination of 5-FU and autophagy inhibition in the future. Inhibition of autophagy enhances the sensitivity of tumor cells to antitumor drugs and provides a theoretical and experimental basis for the development of a new approach to antitumor research.
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2

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本文編號：1511199