本文關(guān)鍵詞： 肝細(xì)胞癌 AMACR Galectin-4 復(fù)發(fā) 標(biāo)志物　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：肝細(xì)胞癌(以下簡(jiǎn)稱肝癌)是世界上最為常見的惡性腫瘤之一,每年約有667000個(gè)新發(fā)病例,并且在中國(guó)是第二大導(dǎo)致死亡的癌癥。肝細(xì)胞癌的高死亡率主要是與其高的術(shù)后復(fù)發(fā)率有關(guān),約有75%的患者術(shù)后會(huì)出現(xiàn)肝內(nèi)或肝外的轉(zhuǎn)移。近年來(lái),隨著影像學(xué)的發(fā)展,肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的早期診斷率有所提高,但其昂貴的檢查費(fèi)用,仍不適合作為常規(guī)的頻繁檢測(cè)項(xiàng)目。因此尋找能判斷肝癌早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)標(biāo)志物,預(yù)測(cè)肝癌復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)變得迫在眉睫。AMACR和galectin-4這兩種蛋白已經(jīng)被證實(shí)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相聯(lián)系,我們前期的蛋白質(zhì)組學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白與肝癌早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān),但是查閱相關(guān)文獻(xiàn)并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其有關(guān)的臨床報(bào)道,并且它們對(duì)肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制也不得而知。目的:1、檢測(cè)AMACR和galectin-4蛋白在肝癌組織中的表達(dá),結(jié)合臨床病理等資料,評(píng)價(jià)其作為預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的分子標(biāo)志物的能力;2、評(píng)價(jià)AMACR和galectin-4兩種蛋白聯(lián)合作為肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的臨床診斷能力;3、通過(guò)在體和體外實(shí)驗(yàn)闡明AMACR和galectin-4蛋白影響肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。方法:1、分別選取術(shù)后早期復(fù)發(fā),晚期復(fù)發(fā)及未復(fù)發(fā)病例行Q-PCR檢測(cè)各組肝癌組織中AMACR m RNA水平。取158例肝癌組織構(gòu)建組織芯片,免疫組化檢測(cè)AMACR蛋白表達(dá)水平,分析各臨床病理參數(shù)與AMACR蛋白表達(dá)量關(guān)系,評(píng)價(jià)AMACR蛋白作為判斷肝細(xì)胞癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的潛能。2、分別選取術(shù)后早期復(fù)發(fā),晚期復(fù)發(fā)及未復(fù)發(fā)病例行Q-PCR、WB檢測(cè)各組galectin-4的m RNA和蛋白水平。取201例肝癌患組織構(gòu)建組織芯片,免疫組化檢測(cè)galectin-4蛋白表達(dá)水平,分析比較臨床病理參數(shù)與galectin-4的表達(dá)量的關(guān)系。3、ELESA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌患者血清中AMACR和galectin-4的含量,利用Logistic回歸分析繪制受試者工作特征曲線,并計(jì)算最佳診斷臨界值及其相對(duì)應(yīng)的敏感度和特異度,評(píng)價(jià)該聯(lián)合標(biāo)志物的診斷價(jià)值。4、利用pc DNA3.1質(zhì)粒載體分別構(gòu)建穩(wěn)定高表達(dá)AMACR、galectin-4肝癌細(xì)胞株以及沉默表達(dá)AMACR、galectin-4的肝癌細(xì)胞株,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各細(xì)胞株轉(zhuǎn)移和侵襲能力;裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)AMACR和galectin-4蛋白在體內(nèi)對(duì)腫瘤的影響;定量蛋白質(zhì)組實(shí)驗(yàn)對(duì)高表達(dá)和敲除galectin-4的穩(wěn)定細(xì)胞株進(jìn)行比較定量分析,展現(xiàn)由galectin-4引起的肝癌細(xì)胞的蛋白質(zhì)組表達(dá)差異譜,進(jìn)一步探討galectin-4對(duì)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲作用機(jī)制的影響;結(jié)果:1、Q-PCR結(jié)果顯示AMACR在早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的肝細(xì)胞癌中在m RNA水平上表達(dá)明顯下降(P=0.004);組織芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AMACR蛋白低表達(dá)與AFP血清水平(P=0.012),腫瘤數(shù)目(P=0.005),區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.042),腫瘤包膜(P=0.026)以及門靜脈癌栓(P=0.049)相關(guān)。158例肝癌術(shù)后生存率單因素分析發(fā)現(xiàn):術(shù)中腹水、腫瘤大小、腫瘤包膜完整度、腫瘤分化程度、門靜脈癌栓以及AMACR蛋白表達(dá)量與術(shù)后生存時(shí)間相關(guān);多因素分析顯示,AMACR蛋白可以作為預(yù)后的獨(dú)立判斷因素(P=0.031)。Kaplan-Meier分析結(jié)果示:低表達(dá)AMACR蛋白的患者其中位生存期較高表達(dá)組短(log-rank,P0.001)。2、Q-PCR和WB結(jié)果顯示galectin-4在早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組的肝細(xì)胞癌中m RNA水平及蛋白水平表達(dá)都有明顯的下降。組織芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)galectin-4蛋白低表達(dá)與腫瘤大小(P=0.036),組織的低分化(P=0.011),微血管侵犯(P=0.004)以及TNM處于更晚期(P=0.015)相關(guān)。201例肝癌術(shù)后生存率單因素分析發(fā)現(xiàn):腫瘤大小、腫瘤包膜完整度、腫瘤分化程度、門靜脈癌栓,TMN分期以及galectin-4蛋白表達(dá)量與術(shù)后生存時(shí)間相關(guān);多因素分析顯示galectin-4是判斷肝細(xì)胞癌術(shù)后總生存期(P=0.002)的獨(dú)立因素。Kaplan-Meier分析結(jié)果表明galectin-4低表達(dá)患者較高表達(dá)患者具有更高的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率(log-rank,P0.001)及更短的總生存期(log-rank,P0.001)。3、在早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的肝癌患者中,血清AMACR及galectin-4含量要明顯高于晚期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者(P0.05)。以165.5 pg/ml作為AMACR診斷早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移肝癌的臨界值其靈敏度和特異度分別為0.407及1。同樣,將3367.5 pg/m L作為galectin-4診斷早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移肝癌的臨界值其靈敏度和特異度分別為0.852及0.524。兩種蛋白的曲線下面積分別是0.703(P=0.025)和0.712(P=0.019)。將兩者結(jié)合繪制ROC曲線得到其曲線下面積為0.799(P0.000),診斷價(jià)值明顯提升。4、Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),下調(diào)galectin-4蛋白表達(dá)量能顯著增加肝癌細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移和侵襲能力;下調(diào)AMACR蛋白的表達(dá)量在體外對(duì)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力沒(méi)有明顯影響。裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)示:低表達(dá)galectin-4蛋白的肝細(xì)胞癌其腫瘤生長(zhǎng)速度較高表達(dá)galectin-4蛋白的肝細(xì)胞癌明顯增快(P=0.0496)。而AMAR蛋白對(duì)皮下腫瘤生長(zhǎng)的影響不明顯。蛋白質(zhì)組學(xué)分析顯示:改變肝癌細(xì)胞株中g(shù)alectin-4蛋白表達(dá)量能引起127種蛋白表達(dá)譜產(chǎn)生較大差異,其多數(shù)蛋白參與肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄翻譯以及脂肪酸、氨基酸代謝等生物學(xué)過(guò)程。結(jié)論:1、AMACR和galectin-4蛋白肝癌組織中的低表達(dá)可能與術(shù)后早期復(fù)發(fā)相關(guān),可以作為肝細(xì)胞癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)后標(biāo)志物;2、聯(lián)合檢測(cè)AMACR和galectin-4血清水平能明顯提高肝細(xì)胞癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷能力;3、galectin-4蛋白可能影響肝癌細(xì)胞氨基酸及脂肪酸代謝等生物學(xué)過(guò)程,其表達(dá)量的下降會(huì)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1509761