本文關(guān)鍵詞： RNPC 腎癌 生物學(xué)功能 抑癌基因　出處：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的 RNPC1在人體腫瘤中可能是抑癌基因也可能是促癌基因,其在腎癌細(xì)胞中的角色尚不明朗。研究RNPC1對腎癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,以探索RNPC1的表達(dá)與腎癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。方法將腎癌細(xì)胞CAKI-1和CAKI-2分別構(gòu)建RNPC1基因高表達(dá)(RNPC1組)、短發(fā)夾RNA干擾RNPC1基因表達(dá)(shRNPC1組),另設(shè)空白對照組以及陰性對照組。采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot檢測RNPC1 mRNA及蛋白在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。運(yùn)用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù),建立穩(wěn)定表達(dá)的RNPC1高表達(dá),干擾的腎癌細(xì)胞系。檢測RNPC1穩(wěn)轉(zhuǎn)的腎癌細(xì)胞系中mRNA及蛋白的表達(dá)情況。通過CCK-8細(xì)胞增殖實驗、克隆實驗、劃痕實驗、遷移侵襲實驗,檢測RNPC1對腎癌細(xì)胞增值,遷移,侵襲能力的影響。運(yùn)用Western blot檢測RNPC1穩(wěn)轉(zhuǎn)的腎癌細(xì)胞系中EMT通路蛋白表達(dá)水平的變化,探究RNPC1對腎癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響的分子機(jī)制。結(jié)果 Western blot和qRT-PCR結(jié)果表明,與空白對照組比較,RNPC1組的RNPC1水平明顯上調(diào)(P0.05),與陰性對照組比較,shRNPC1組的RNPC1水平明顯下調(diào)(P0.05)。RNPC1組細(xì)胞A450值和克隆計數(shù)較空白對照組明顯降低;shRNPC1組細(xì)胞A450值和克隆計數(shù)較陰性對照組明顯升高(P0.05)。劃痕實驗結(jié)果表明shRNPC1組細(xì)胞遷移距離[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(352.50±24.60)μm]較陰性對照組[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(237.25±12.89)μm]增大(P0.05);RNPC1組細(xì)胞遷移距離[CAKI-1:(132.52±35.13)μm,CAKI-2:(126.50±19.24)μm]較空白對照組[CAKI-1:(281.65±19.71)μm,CAKI-2:(300.00±22.28)μm]減小(P0.05)。細(xì)胞的遷移和侵襲實驗表明,shRNPC1組遷移和侵襲的細(xì)胞數(shù)較陰性對照組明顯增多(P0.05);遷移和侵襲的細(xì)胞數(shù)少于空白對照組(P0.05)。結(jié)論 RNPC1基因高表達(dá)能抑制腎癌細(xì)胞CAKI-1和CAKI-2的細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力,可以為臨床治療腎癌提供新的作用靶點。
[Abstract]:Objective RNPC1 may be a tumor suppressor gene or a tumor promoter gene in human tumors, and its role in renal cell carcinoma is not clear. To study the effect of RNPC1 on the biological function of renal cell carcinoma, To explore the relationship between the expression of RNPC1 and the occurrence and development of renal cell carcinoma. Methods the high expression of RNPC1 gene was constructed in renal cancer cells CAKI-1 and CAKI-2 respectively. The short hairpin RNA interfered with the expression of RNPC1 gene in shRNPC1 group, and a blank control group and a negative control group were set up. The expression of RNPC1 mRNA and protein in renal cell carcinoma cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot, and lentivirus transfection technique was used to detect the expression of RNPC1 mRNA and protein in RCC cells. The expression of mRNA and protein in the stable RNPC1 transformed renal cell line was detected. The expression of mRNA and protein was detected by CCK-8 cell proliferation assay, clone assay, scratch assay, migration and invasion assay. To detect the effect of RNPC1 on the proliferation, migration and invasion of renal cancer cells, Western blot was used to detect the expression level of EMT pathway protein in the stable RNPC1 cell line. To explore the molecular mechanism of the effect of RNPC1 on the biological function of renal carcinoma cells. Results Western blot and qRT-PCR showed that, Compared with the blank control group, the RNPC1 level of the RNPC1 group increased significantly, and the RNPC1 level of the shRNPC1 group significantly decreased the A450 value and clone count of the shRNPC1 group compared with the blank control group. The cell A450 value and clone count in the shRNPC1 group were significantly lower than those in the blank control group. The cell migration distance of shRNPC1 group [CAKI-1:(303.98 鹵12.31 渭 m] was 352.50 鹵24.60 渭 m, compared with that of negative control group [CAKI-1:(303.98 鹵12.31 渭 m, 237.25 鹵12.89 渭 m]. The cell migration distance of RNPC1 group [CAKI-1:(132.52 鹵35.13] 渭 m [126.50 鹵19.24 渭 m] was lower than that of the blank control group [CAKI-1:(281.65 鹵19.71 渭 m CAKI-2U 30.00 鹵PC22.28 渭 m]. The cell migration and invasion of RNPC1 group was lower than that of control group [CAKI-1:(281.65 鹵19.71 渭 m CAKI-2 + 300.00 鹵PC22.28 渭 m]. The cell migration and invasion of RNPC1 group showed that the cell migration distance of RNPC1 group [CAKI-1:(132.52 鹵35.13] 渭 m was 126.50 鹵19.24 渭 m] less than that of the control group [CAKI-1:(281.65 鹵19.71 渭 m]. The number of cells in migration and invasion was significantly higher than that in negative control group, and the number of cells in migration and invasion was less than that in control group. Conclusion the high expression of RNPC1 gene can inhibit the proliferation of CAKI-1 and CAKI-2 cells in renal cancer cells. The ability of migration and invasion can provide a new target for clinical treatment of renal cell carcinoma.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部;南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科;南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院乳腺外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81602336,81001329)
【分類號】：R737.11

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本文編號：1506653