本文關鍵詞： 肝細胞癌 中期 液態(tài)活檢 循環(huán)腫瘤細胞 循環(huán)腫瘤DNA 腫瘤異質性　出處：《第二軍醫(yī)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：肝細胞癌(HCC)是人類常見的致命性惡性腫瘤之一,其瘤Qg異質性明顯,五年生存率低,缺乏有效的非手術治療手段和預后監(jiān)測手段。中期肝癌(BCLC B期)為肝癌臨床分期中異質性極為明顯的一類患者群體,其瘤Qg異質性和患者群體在治療、預后方面的差異極為明顯。在多個實體腫瘤中都可發(fā)現腫瘤異質性現象,導致腫瘤構成上的復雜、時間上的變化,影響患者的腫瘤分型、治療效果、耐藥改變以及預后情況等。然而,傳統(tǒng)的活檢取材難以代表腫瘤的整體特征。近年,液態(tài)活檢的概念被提出,并獲得較大發(fā)展,已可以實現在循環(huán)腫瘤DNA(cfDNA)和循環(huán)腫瘤細胞(CTC)層面進行高深度、高精準的測序研究,為液態(tài)活檢測序分析體現整體腫瘤變異特征打下基礎。鑒于中期肝癌的瘤Qg異質性和在治療、預后方面的明顯差異,我們設計研究對這兩個方面進行探討。第一部分:利用ctDNA-NGS技術評估中期肝癌癌內分子異質性的可行性研究目的:通過對瘤體較大的中期肝癌患者的多點組織樣品和血液樣品進行高深度的特定區(qū)域捕獲測序,評估肝癌腫瘤組織內部的基因變異異質性,探討液態(tài)活檢和傳統(tǒng)活檢取材在體現腫瘤突變特征方面的表現。方法:選擇腫瘤最大直徑超過5cm的中期肝癌患者5例,對腫瘤組織的主要腫瘤、周邊癌灶等進行多點取材,同時取材血漿和血細胞,利用特定區(qū)域捕獲測序方法進行高深度的測序。測序檢測不同樣本的體細胞變異,分析變異在不同樣品中的分布,并對變異基因進行相關通路的分析。結果:5例中期肝癌患者中,3例患者循環(huán)腫瘤細胞計數為2個,1例為1個,1例未抽取到;5例患者cfDNA樣品捕獲測序深度平均為5711×,體細胞突變位點的平均等位基因突變頻率(MAF)為28.34%(四分位數間距:6.89%-39.49%)。5例患者中,1例未檢出體細胞變異,此外4例分別檢測出3、4、6和12個體細胞變異,而在此4位患者的12個腫瘤組織樣品中,有50%(6/12)的樣品不能檢測出其患者的全部突變,然而,組織中檢測到的所有變異位點,都可在cfDNA中檢測到,體細胞變異檢出率達100%。體細胞突變在17個基因的外顯子區(qū)存在分布,皆導致編碼氨基酸序列的改變,其中分布有=2個體細胞變異的基因有TP53(3患者中檢出4個突變)、APC(2患者中檢出2個突變)和AXIN1(2患者中檢出2個突變)。結論:較之傳統(tǒng)活檢的單點組織取材,液體活檢取材,特別是循環(huán)腫瘤DNA作為檢材,更能體現腫瘤的整體突變特征。因此,液體活檢技術在評估腫瘤異質性,進行耐藥檢測和預測預后方面存在極大應用潛力。第二部分:通過Bolondi再分期模型探討中期肝癌癌間病理異質性對肝切除術后生存的影響目的:探討巴塞羅那(BCLC)中期肝癌再分期模型對肝切除術后總體生存的預測作用。方法:2008年至2010年東方肝膽外科醫(yī)院施行肝切除治療的343例中期肝癌患者。全組患者按Bolondi再分期模型分為四個亞期。末次隨訪時間為2014年2月,總體生存為終點事件。用Kaplan-Meier生存曲線和Log-rank檢驗比較各亞期患者間總體生存的差異,Cox風險模型分析總體生存的獨立危險因素。結果:全組病人分為B1亞期143例,B2亞期183例,B3亞期12例和B4亞期5例,其術后5年生存率分別為45.5%,30.4%,13.0%和0%,中位生存時間分別為55.1,35.1,14.4和4.7個月(P0.001)。術前白蛋白(ALB)≤35 g/L,血紅蛋白≤正常下限,手術切緣腫瘤侵犯,微血管侵犯(MVI)和腫瘤直徑5 cm是B1期和B2期患者肝切除術后總體生存的獨立風險因素。結論:再分期模型對中期肝癌病人肝切除術后生存具有良好的預測作用。B1和B2亞期肝癌病人肝切除后可獲得較好的遠期生存。
[Abstract]:Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common human fatal malignant tumor, the tumor Qg marked heterogeneity, the five year survival rate is low, the lack of effective means of non-surgical treatment and prognosis monitoring. (BCLC B) - liver cancer liver cancer clinical staging heterogeneity in extremely patient group significantly. The Qg tumor heterogeneity and patients in the treatment group, the difference of prognosis is extremely obvious. In a number of solid tumors are found tumor heterogeneity phenomenon, leading to tumor composition complex, change in time, affect the therapeutic effect in patients with tumor type, drug resistance, change and prognosis. However the traditional, biopsy is difficult to represent the overall characteristics of the tumor. In recent years, the concept of liquid biopsy is put forward, and obtained great development, already can be achieved in circulating tumor DNA (cfDNA) and circulating tumor cells (CTC) level in advanced degrees, sequencing of high precision, Lay the foundation for reflecting the overall variability of tumor biopsy liquid sequencing. In view of the interim liver Qg tumor heterogeneity and in treatment, significant differences in prognosis, we design and study of the two aspects. The first part: the mid-term evaluation of the feasibility study of hepatocellular carcinoma in the molecular heterogeneity to capture sequencing using ctDNA-NGS technique the specific area of tumor larger stage liver cancer patients of multiple tissue samples and blood samples were high in depth, to assess gene mutation heterogeneity within tumor tissue, to investigate the liquid biopsy and biopsy in traditional tumor mutation characteristics of performance. Methods: the patients with hepatocellular carcinoma interim maximum tumor diameter of more than 5 of 5cm the main tumor cases, the tumor tissue, the surrounding tumors were multiple biopsy, and were sacrificed in plasma and blood cells capture sequencing method using a specific area High depth of sequencing. Somatic variation of different sample sequencing, variation analysis in different samples, and analyzed the related pathway on gene mutation. Results: 5 cases of mid HCC patients, 3 cases of circulating tumor cells in patients with count for 2, 1 cases 1, 1 cases were not selected to; 5 cases of patients with cfDNA sample capture sequencing depth averaged 5711 *, somatic mutations of the average allele mutation frequency (MAF) was 28.34% (four percentile interval: 6.89%-39.49%).5 patients, 1 cases were not detected in somatic cell variation, in addition to the 4 cases were detected by 3,4,6 and 12 individual cell variants, and in the 4 patients with 12 tumor tissue samples, 50% (6/12) samples cannot detect all mutations, the patients however, all mutations were detected in the tissue, can be detected in cfDNA, somaclonal variation detection rate of 100%. somatic mutations in 17 A gene exon region distribution, encoding the amino acid sequence of all lead to the change of the distribution of =2 gene TP53 mutation of individual cells (4 mutations were detected in 3 patients (2), APC mutation were detected in 2 patients (2) and AXIN1 mutations were detected in 2 patients). Conclusion: single compared with the traditional tissue biopsy, liquid biopsy, especially circulating tumor DNA as samples, the overall mutation characteristics can reflect the tumor. Therefore, liquid biopsy in evaluation of tumor heterogeneity, for drug resistance detection and prognosis have great application potential. The second part: through Bolondi model to discuss the stage the middle hepatic carcinoma pathological heterogeneity effect on survival after hepatectomy (BCLC) objective: To investigate the Barcelona stage liver cancer restaging model predictive effect on overall survival after hepatectomy. Methods: from 2008 to 2010, Oriental Hospital Department of Hepatobiliary Surgery The implementation of 343 cases of patients with hepatocellular carcinoma interim hepatic resection. All patients according to Bolondi staging model is divided into four sub periods. At the end of the follow-up time is February 2014, the overall survival end point by Kaplan-Meier. The survival curve and Log-rank test to compare each sub period between patients with overall survival difference, Cox risk model analysis of independent risk the factors of overall survival. Results: all patients were divided into B1 sub period 143 cases, B2 183 cases, 12 cases of stage B3 and B4 sub sub period in 5 cases, the postoperative 5 year survival rates were 45.5%, 30.4%, 13% and 0%, the median survival time was 4.7 months and 55.1,35.1,14.4 (P0.001). Preoperative albumin (ALB) less than 35 g/L, less than the lower limit of normal hemoglobin, surgical margin of tumor invasion, vascular invasion (MVI) and tumor diameter of 5 cm is an independent risk factor for the overall survival of patients with liver B1 and B2 after surgery. Conclusion: the model of interim restaging patients with hepatocellular carcinoma Survival after hepatectomy has a good predictive effect for.B1 and B2 subphase liver cancer patients with better long-term survival after hepatectomy.

【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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