發(fā)布時(shí)間：2018-02-09 09:02

  本文關(guān)鍵詞： TET1 腎癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞侵襲　出處：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：腎癌,又稱腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma, RCC),是一種泌尿系統(tǒng)特有的惡性腫瘤,發(fā)病率次于膀胱癌,在泌尿系腫瘤中占據(jù)第二位。由于其不具備特異的臨床病癥狀,使得早期診斷和治療具有一定的難度。目前,RCC病例中有30%-50%屬于偶然發(fā)現(xiàn)的無(wú)癥狀患者,而且,約30%的患者在診斷時(shí)已經(jīng)或?qū)l(fā)生轉(zhuǎn)移病變。研究發(fā)現(xiàn),早期侵襲轉(zhuǎn)移是造成腫瘤預(yù)后不良的主要原因,而且,發(fā)現(xiàn)基因甲基化與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TET1 (Ten Eleven Translocation 1)是體內(nèi)一種高效催化DNA胞嘧啶的加氧酶,具有明顯的去甲基化作用,在多種腫瘤組織,如肝細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌中低表達(dá)。目前,關(guān)于TET1在RCC發(fā)病機(jī)制中作用尚不明確。因此,探討TET1在RCC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用,對(duì)RCC的診斷、治療具有極其重要的意義。第一部分TET1在腎癌組織中的表達(dá)目的：檢測(cè)TET1在腎癌組織、癌旁組織的表達(dá)差異。方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)檢測(cè)82例腎癌患者的癌組織和癌旁組織TET1 mRNA的表達(dá)水平,同時(shí)采用免疫組化(Immunohi stochemi stry)和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot, WB)對(duì)癌組織和癌旁組織中的TET1蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比、分析。結(jié)果：qRT-PCR結(jié)果顯示腎癌組織中TET1 mRNA的表達(dá)水平明顯低于癌旁組織(p0.05)。免疫組化與蛋白質(zhì)印跡法的結(jié)果顯示,腎癌組織中TET1蛋白表達(dá)平明顯低于癌旁組織(p0.05)。結(jié)論：TET1 mRNA及蛋白表達(dá)水平在腎癌組織中均顯著下調(diào),表明TET1可能直接或間接的參與腎癌的發(fā)生與發(fā)展。第二部分 腎癌TET1低表達(dá)在臨床中的意義目的：對(duì)比TET1在腎癌組織和癌旁組織的表達(dá)水平,并分析腎癌病理分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TET1表達(dá)與腎癌患者預(yù)后的關(guān)系。方法：對(duì)性別、年齡、分期、分級(jí)等臨床病理參數(shù)、TET1表達(dá)與術(shù)后生存進(jìn)行相關(guān)性分析,采用Kaplan-Meier法對(duì)腎癌患者進(jìn)行生存分析,以log rank比較生存率。p0.05或p0.01時(shí)認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：生存分析結(jié)果顯示,TET1表達(dá)越低,生存期越短。單因素及多因素分析表明,腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TET1低表達(dá)導(dǎo)致的DNA高度甲基化與腎癌的預(yù)后有關(guān)。結(jié)論：TET1的表達(dá)水平與腎癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。第三部分TET1對(duì)腎癌細(xì)胞功能及腫瘤進(jìn)展的影響目的：通過(guò)細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn),研究分析TET1表達(dá)與腎癌細(xì)胞功能及腫瘤進(jìn)展的關(guān)系。方法：首先使用蛋白質(zhì)印跡法(WB)測(cè)定腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN和人胚腎細(xì)胞系293T中的表達(dá)水平,然后采用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法測(cè)定腎癌細(xì)胞ACHN和293T細(xì)胞的增殖能力,Transwell小室檢測(cè)腎癌細(xì)胞ACHN和293T的侵襲能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果：與293T細(xì)胞相比,TET1在腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN的表達(dá)顯著降低(p0.05)。CCK-8和Transwell小室檢測(cè)結(jié)果顯示,TET1低表達(dá)的腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN的增殖能力和侵襲能力均顯著高于TET1高表達(dá)的293T。結(jié)論：TET1在腎癌細(xì)胞系中低表達(dá),提示TET1可能參與腎癌的發(fā)生和發(fā)展。第四部分TET1過(guò)表達(dá)對(duì)腎癌細(xì)胞凋亡和侵襲能力的影響和可能的分子機(jī)制目的：研究分析TET1過(guò)表達(dá)對(duì)腎癌細(xì)胞凋亡和侵襲能力的影響及可能的分子機(jī)制。方法：首先轉(zhuǎn)染TET1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒于腎癌細(xì)胞ACHN,采用蛋白質(zhì)印跡法(WB)檢測(cè)TET1在過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和對(duì)照質(zhì)粒的腎癌細(xì)胞ACHN的表達(dá)水平,然后使用Annexin V和PI染色的方法通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種細(xì)胞的凋亡情況；Transwell法分析兩種細(xì)胞的侵襲能力,對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較分析。WB法檢測(cè)過(guò)表達(dá)TET1對(duì)Wnt信號(hào)信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果：蛋白質(zhì)印跡法顯示腎癌細(xì)胞ACHN成功表達(dá)了TET1蛋白,成功過(guò)表達(dá)TET1蛋白的腎癌細(xì)胞ACHN凋亡率增加,侵襲能力降低,Wnt相關(guān)蛋白β-catenin和C-myc等蛋白顯著下調(diào)。結(jié)論：TET1蛋白過(guò)表達(dá)能有效促進(jìn)腎癌細(xì)胞的凋亡,抑制腎癌細(xì)胞侵襲,可能與Wnt信號(hào)通路的下調(diào)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1497566