本文關(guān)鍵詞： 細(xì)胞免疫治療 前列腺癌 自然殺傷細(xì)胞　出處：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究去勢(shì)抵抗性前列腺癌伴骨轉(zhuǎn)移(metastatic castration resistant prostate cancer mCRPC)患者自體外周血自然殺傷(natural killer,NK)細(xì)胞經(jīng)體外大規(guī)模擴(kuò)增后的生物學(xué)特性,初步評(píng)估體內(nèi)自然殺傷細(xì)胞治療mCRPC的安全性及有效性。方法:(1)選擇2013年1月-2014年6月來我院接受治療的去勢(shì)抵抗性前列腺癌伴骨轉(zhuǎn)移患者8例,完成患者的術(shù)前相關(guān)檢查:外周血常規(guī)、肝腎功能、前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen PSA),淋巴細(xì)胞亞群、血清中細(xì)胞因子;臨床影像學(xué)評(píng)估(胸片、B超、X-CT、磁共振、骨掃描);采用Kamofsky評(píng)分評(píng)估患者生活質(zhì)量;數(shù)字疼痛強(qiáng)度量表(Numerical rating scale NRS)對(duì)每位患者的疼痛進(jìn)行疼痛評(píng)分。抽取患者外周血,每次50ml,共3-4次。(2)Ficoll密度梯度離心法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells PBMC),NK包被培養(yǎng)瓶為T75培養(yǎng)瓶,接種細(xì)胞用;培養(yǎng)到50 ml體積,變黃時(shí)由一個(gè)T75培養(yǎng)瓶擴(kuò)增到兩個(gè)T75培養(yǎng)瓶,變黃時(shí)轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)袋繼續(xù)培養(yǎng)。后續(xù)補(bǔ)液只需要加GT-T551+1000IU IL-2+10%自體血清。自體血清用完后,加自體血漿,全部用完后可以不加。CD137L(5ug/ml)因子包被培養(yǎng)瓶用;γ干擾素(1000U/ml)d0天加入,1000×,IL-15(2ug/L)補(bǔ)充到GT-T551,IL-1β(1000U/ml)、IL-7(1000U/ml)、IL-12(1000U/ml)、IL-18(1000U/ml)、IL-21(1000U/ml)因子在d1天加入。(3)對(duì)體外培養(yǎng)擴(kuò)增的NK細(xì)胞進(jìn)行顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況、流式細(xì)胞儀檢測(cè)NK細(xì)胞的純度,采用Calcein-AM分析NK細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞系PC-3的殺傷能力,體外鑒定NK細(xì)胞是否具有治療前列腺癌的潛能。細(xì)胞回輸之前經(jīng)過無菌、內(nèi)毒素、支原體等質(zhì)量檢驗(yàn)。(4)所有患者均接受自體自然殺傷細(xì)胞輸注治療,其中4例患者接受3次輸注治療,剩下4例患者接受4次輸注治療,完成前列腺癌患者NK細(xì)胞輸注術(shù)后相關(guān)檢查,對(duì)前列腺癌患者細(xì)胞輸注術(shù)后的生活質(zhì)量及疼痛再次進(jìn)行評(píng)分,判斷NK細(xì)胞對(duì)mCRPC治療的安全性和有效性。結(jié)果:(1)從抽取的50ml外周血中分離出NK細(xì)胞,進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增,NK細(xì)胞可以達(dá)到1000倍左右的擴(kuò)增效率,總細(xì)胞數(shù)量平均達(dá)到4.39×109,CD3-CD16/56+NK細(xì)胞的純度平均達(dá)到84.3%。(2)體外擴(kuò)增的NK細(xì)胞對(duì)PC-3及K562具有明顯的殺傷作用,在效靶比10:1時(shí),對(duì)PC-3及K562的殺傷作用分別為78%和82%。(3)NK細(xì)胞回輸完成后第三天檢測(cè),8例患者當(dāng)中有5例患者出現(xiàn)前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen,PSA)的下降,2例患者出現(xiàn)PSA的上升,1例患者PSA回輸前后均大于可檢測(cè)上限值(PSA㧐10000 ng/ml)。7例患者外周血出現(xiàn)CD3-CD56+NK細(xì)胞的比例升高,6例患者外周血出現(xiàn)CD8+T細(xì)胞的比例升高。(4)根據(jù)Kamofsky及NRS評(píng)分,所有患者的生活質(zhì)量均得到改善,骨痛均得到不同程度的緩解,所有患者在輸注過程中及輸注后均未發(fā)生不良反應(yīng)與毒副作用。結(jié)論:(1)本次研究中的自體NK細(xì)胞經(jīng)大規(guī)模擴(kuò)增后NK細(xì)胞可以達(dá)到1000倍左右的擴(kuò)增效率,總細(xì)胞數(shù)量平均達(dá)到4.39×109,CD3-CD16/56+NK細(xì)胞的純度平均達(dá)到84.3%。(2)自體自然殺傷細(xì)胞的治療具有很好的安全性及耐受性,其初步臨床治療效果較好,mCRPC患者運(yùn)用自然殺傷細(xì)胞進(jìn)行治療應(yīng)該具有較好的前景。(3)腫瘤患者輸注治療后,細(xì)胞因子IL2,IL12,IFN及TNF未見明顯上升,7例患者的CD3-CD16/CD56+NK細(xì)胞及6例患者的CD8+T細(xì)胞比例上升,在某種程度上可喚醒患者的細(xì)胞免疫應(yīng)答。(4)Gleason評(píng)分為9分的患者均未出現(xiàn)PSA的下降,Gleason評(píng)分低于9分的患者出現(xiàn)PSA的下降,提示Gleason評(píng)分越高的患者NK細(xì)胞治療效果越不佳。
[Abstract]:Objective : To study the biological characteristics of natural killer ( NK ) cells in patients with castration - resistant prostate cancer with metastatic prostate cancer in vitro and to evaluate the safety and efficacy of natural killer cells in vivo . Methods : ( 1 ) To evaluate the safety and efficacy of natural killer cells in patients with metastatic prostate cancer with bone metastases . Methods : ( 1 ) To evaluate the quality of life of patients with prostate specific antigen ( PSA ) , lymphocyte subsets and serum cytokines in our hospital from January 2013 to June 2014 . ( 2 ) Peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) were obtained from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) by Ficoll density gradient centrifugation . NK cells were cultured in a culture flask of T75 culture flask . ( 2 ) The percentage of CD3 - CD56 + NK cells in peripheral blood of 7 patients was improved and the percentage of CD3 - CD16 / CD56 + NK cells in all patients was higher than that before infusion . ( 4 ) There was no decrease in the percentage of CD3 - CD16 / CD56 + NK cells and 6 cases of patients .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：1485970