本文關鍵詞： 細胞免疫治療 前列腺癌 自然殺傷細胞　出處：《蘇州大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:研究去勢抵抗性前列腺癌伴骨轉移(metastatic castration resistant prostate cancer mCRPC)患者自體外周血自然殺傷(natural killer,NK)細胞經(jīng)體外大規(guī)模擴增后的生物學特性,初步評估體內(nèi)自然殺傷細胞治療mCRPC的安全性及有效性。方法:(1)選擇2013年1月-2014年6月來我院接受治療的去勢抵抗性前列腺癌伴骨轉移患者8例,完成患者的術前相關檢查:外周血常規(guī)、肝腎功能、前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen PSA),淋巴細胞亞群、血清中細胞因子;臨床影像學評估(胸片、B超、X-CT、磁共振、骨掃描);采用Kamofsky評分評估患者生活質量;數(shù)字疼痛強度量表(Numerical rating scale NRS)對每位患者的疼痛進行疼痛評分。抽取患者外周血,每次50ml,共3-4次。(2)Ficoll密度梯度離心法獲得外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cells PBMC),NK包被培養(yǎng)瓶為T75培養(yǎng)瓶,接種細胞用;培養(yǎng)到50 ml體積,變黃時由一個T75培養(yǎng)瓶擴增到兩個T75培養(yǎng)瓶,變黃時轉移到培養(yǎng)袋繼續(xù)培養(yǎng)。后續(xù)補液只需要加GT-T551+1000IU IL-2+10%自體血清。自體血清用完后,加自體血漿,全部用完后可以不加。CD137L(5ug/ml)因子包被培養(yǎng)瓶用;γ干擾素(1000U/ml)d0天加入,1000×,IL-15(2ug/L)補充到GT-T551,IL-1β(1000U/ml)、IL-7(1000U/ml)、IL-12(1000U/ml)、IL-18(1000U/ml)、IL-21(1000U/ml)因子在d1天加入。(3)對體外培養(yǎng)擴增的NK細胞進行顯微鏡觀察細胞生長情況、流式細胞儀檢測NK細胞的純度,采用Calcein-AM分析NK細胞對前列腺癌細胞系PC-3的殺傷能力,體外鑒定NK細胞是否具有治療前列腺癌的潛能。細胞回輸之前經(jīng)過無菌、內(nèi)毒素、支原體等質量檢驗。(4)所有患者均接受自體自然殺傷細胞輸注治療,其中4例患者接受3次輸注治療,剩下4例患者接受4次輸注治療,完成前列腺癌患者NK細胞輸注術后相關檢查,對前列腺癌患者細胞輸注術后的生活質量及疼痛再次進行評分,判斷NK細胞對mCRPC治療的安全性和有效性。結果:(1)從抽取的50ml外周血中分離出NK細胞,進行體外培養(yǎng)擴增,NK細胞可以達到1000倍左右的擴增效率,總細胞數(shù)量平均達到4.39×109,CD3-CD16/56+NK細胞的純度平均達到84.3%。(2)體外擴增的NK細胞對PC-3及K562具有明顯的殺傷作用,在效靶比10:1時,對PC-3及K562的殺傷作用分別為78%和82%。(3)NK細胞回輸完成后第三天檢測,8例患者當中有5例患者出現(xiàn)前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen,PSA)的下降,2例患者出現(xiàn)PSA的上升,1例患者PSA回輸前后均大于可檢測上限值(PSA㧐10000 ng/ml)。7例患者外周血出現(xiàn)CD3-CD56+NK細胞的比例升高,6例患者外周血出現(xiàn)CD8+T細胞的比例升高。(4)根據(jù)Kamofsky及NRS評分,所有患者的生活質量均得到改善,骨痛均得到不同程度的緩解,所有患者在輸注過程中及輸注后均未發(fā)生不良反應與毒副作用。結論:(1)本次研究中的自體NK細胞經(jīng)大規(guī)模擴增后NK細胞可以達到1000倍左右的擴增效率,總細胞數(shù)量平均達到4.39×109,CD3-CD16/56+NK細胞的純度平均達到84.3%。(2)自體自然殺傷細胞的治療具有很好的安全性及耐受性,其初步臨床治療效果較好,mCRPC患者運用自然殺傷細胞進行治療應該具有較好的前景。(3)腫瘤患者輸注治療后,細胞因子IL2,IL12,IFN及TNF未見明顯上升,7例患者的CD3-CD16/CD56+NK細胞及6例患者的CD8+T細胞比例上升,在某種程度上可喚醒患者的細胞免疫應答。(4)Gleason評分為9分的患者均未出現(xiàn)PSA的下降,Gleason評分低于9分的患者出現(xiàn)PSA的下降,提示Gleason評分越高的患者NK細胞治療效果越不佳。
[Abstract]:Objective : To study the biological characteristics of natural killer ( NK ) cells in patients with castration - resistant prostate cancer with metastatic prostate cancer in vitro and to evaluate the safety and efficacy of natural killer cells in vivo . Methods : ( 1 ) To evaluate the safety and efficacy of natural killer cells in patients with metastatic prostate cancer with bone metastases . Methods : ( 1 ) To evaluate the quality of life of patients with prostate specific antigen ( PSA ) , lymphocyte subsets and serum cytokines in our hospital from January 2013 to June 2014 . ( 2 ) Peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) were obtained from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) by Ficoll density gradient centrifugation . NK cells were cultured in a culture flask of T75 culture flask . ( 2 ) The percentage of CD3 - CD56 + NK cells in peripheral blood of 7 patients was improved and the percentage of CD3 - CD16 / CD56 + NK cells in all patients was higher than that before infusion . ( 4 ) There was no decrease in the percentage of CD3 - CD16 / CD56 + NK cells and 6 cases of patients .

【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25

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