本文關(guān)鍵詞： SPHK1 鼻咽癌 預(yù)后 FTY720 增強(qiáng)放療敏感性　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景和目的鞘脂類的代謝產(chǎn)物如神經(jīng)酰胺(Cer)、鞘氨醇(Sph)、1磷酸鞘氨醇(S1P)等,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,而鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase 1,SPHK1)是調(diào)節(jié)鞘脂類平衡的關(guān)鍵酶。研究表明SPHK1在多種實(shí)體瘤中高表達(dá),通過SPHK1/S1P途徑促進(jìn)腫瘤進(jìn)展、影響預(yù)后。FTY720(芬戈莫德)是鞘氨醇的類似物,具有很強(qiáng)的免疫抑制活性。最近研究發(fā)現(xiàn),FTY720可以抑制某些腫瘤細(xì)胞增殖,促進(jìn)凋亡。本實(shí)驗(yàn)探討SPHK1在鼻咽癌中的表達(dá)及其與患者分期分級及預(yù)后的關(guān)系,以及SPHK1作為鼻咽癌潛在治療靶點(diǎn)的可能性。研究方法運(yùn)用q RT-PCR,Western blot技術(shù)檢測SPHK1 m RNA和蛋白在新鮮鼻咽癌組織與鼻咽部炎癥組織中的表達(dá)情況;石蠟切片免疫組化檢測142鼻咽癌組織和10例鼻咽部炎癥組織中SPHK1的表達(dá),并進(jìn)行評分,運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)分析SPHK1表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,鼻咽癌細(xì)胞株CNE1和CNE2中轉(zhuǎn)染siRNA,運(yùn)用q RT-PCR,Western blot檢測siRNA轉(zhuǎn)染后SPHK1的表達(dá);運(yùn)用CCK-8法檢測干擾SPHK1對細(xì)胞增殖的影響及FTY720對細(xì)胞活性和放療敏感性的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測干擾SPHK1和FTY720對細(xì)胞周期及凋亡的影響;運(yùn)用SPHK1活性檢測ELISA試劑盒檢測FTY720對SPHK1酶活性的影響。研究結(jié)果qRT-PCR和Western blot檢測表明SPHK1在新鮮鼻咽癌組織中的表達(dá)高于炎癥組織。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)142例鼻咽癌中93例(65.5%)SPHK1高表達(dá),10例非腫瘤性組織中,SPHK1低表達(dá)或不表達(dá)。卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SPHK1高表達(dá)與臨床分期(P=0.001)、T分期(P=0.029),N分期(P=0.002)、局部復(fù)發(fā)(P=0.018)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.001)相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)SPHK1高表達(dá)鼻咽癌患者較低表達(dá)者生存時(shí)間短(P0.001)。多因素方差分析表明SPHK1是鼻咽癌患者獨(dú)立的預(yù)后因子(P0.05)。鼻咽癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染si RNA后,q RT-PCR和WB檢測轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中SPHK1 mRNA和蛋白表達(dá)均降低。鼻咽癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染si-SPHK1后抑制細(xì)胞增殖,阻滯細(xì)胞周期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡(均P0.05)。FTY720可以抑制SPHK1酶的活性,抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)凋亡,增強(qiáng)細(xì)胞對放療的敏感性。結(jié)論我們的研究結(jié)果表明SPHK1在鼻咽癌中高表達(dá),且SPHK1表達(dá)與患者臨床分期、局部復(fù)發(fā)和預(yù)后相關(guān)。干擾SPHK1抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖,阻滯細(xì)胞周期,促進(jìn)凋亡;FTY720可以抑制SPHK1酶的活性,抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)凋亡,增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞的放療敏感性。SPHK1有望成為一個(gè)鼻咽癌的預(yù)后分子標(biāo)志物和潛在治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background and objective the metabolites of sphingolipids such as ceramide Ceran and sphingosine 1 sphingosine phosphate S1P play an important role in the carcinogenesis and development of tumors. Sphingosine kinase-1 sphingosine kinase 1 (SPHK1) is the key enzyme to regulate the lipid balance of sphingosine. Studies have shown that SPHK1 is highly expressed in many solid tumors. SPHK1/S1P pathway promotes tumor progression and affects prognosis. FTY720 is a sphingosine analogue with strong immunosuppressive activity. FTY720 can inhibit the proliferation of some tumor cells and promote apoptosis. This study was designed to investigate the expression of SPHK1 in nasopharyngeal carcinoma and its relationship with stage, grade and prognosis. And the possibility of SPHK1 as a potential therapeutic target for nasopharyngeal carcinoma. Q RT-PCR was used in the study. Western blot technique was used to detect the expression of SPHK1 m RNA and protein in nasopharyngeal carcinoma and nasopharyngeal inflammation. The expression of SPHK1 in 142NPC tissues and 10 cases of nasopharyngeal inflammation was detected by immunohistochemical staining in paraffin sections. The relationship between the expression of SPHK1 and clinicopathological parameters and prognosis was analyzed by SPSS. In the cell experiment, siRNA was transfected into CNE1 and CNE2. The expression of SPHK1 after siRNA transfection was detected by Q RT-PCR blot. The effect of interfering SPHK1 on cell proliferation and the effect of FTY720 on cell activity and radiosensitivity were detected by CCK-8 assay. The effects of interfering SPHK1 and FTY720 on cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry. The effect of FTY720 on the activity of SPHK1 was detected by ELISA kit of SPHK1 activity. Results qRT-PCR and Western. Blot showed that the expression of SPHK1 in fresh nasopharyngeal carcinoma was higher than that in inflammatory tissue. The expression of SPHK1 was high. In 10 cases of non-tumor tissues, the expression of SPHK1 was low or not. Chi-square test showed that the high expression of SPHK1 and the clinical stage P0. 001T stage were P0. 029). N stage P0. 002). Local recurrence (P0. 018) and distant metastasis (P0. 001). Kaplan-Meier survival analysis and Log-rank test showed that the survival time of patients with high expression of SPHK1 was shorter than that of patients with low expression of SPHK1 (P0.001). Multivariate analysis of variance showed that SPHK1 was an independent prognostic factor in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC). After transfection of si RNA into nasopharyngeal carcinoma cells. The expression of SPHK1 mRNA and protein in transfected cells was decreased by Q RT-PCR and WB. The proliferation and cell cycle of nasopharyngeal carcinoma cells were inhibited by si-SPHK1 transfection. Promote apoptosis (P0.05. FTY720) can inhibit the activity of SPHK1 enzyme, inhibit the proliferation of nasopharyngeal carcinoma cells, promote apoptosis. Conclusion our results indicate that SPHK1 is highly expressed in nasopharyngeal carcinoma, and the expression of SPHK1 is related to the clinical stage of patients. Local recurrence is related to prognosis. Interfering with SPHK1 inhibits the proliferation of nasopharyngeal carcinoma cells, blocks cell cycle and promotes apoptosis. FTY720 can inhibit the activity of SPHK1 enzyme, inhibit the proliferation of nasopharyngeal carcinoma cells and promote apoptosis. Enhancing the radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma cells. SPHK1 is expected to be a prognostic molecular marker and a potential therapeutic target for nasopharyngeal carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.63

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6 馬，

本文編號：1477620