本文關鍵詞： 原發(fā)性肝癌 B7-H4 T淋巴細胞 細胞因子 自噬 免疫抑制　出處：《暨南大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景及目的:原發(fā)性肝癌是世界范圍內(nèi)腫瘤高發(fā)病率和死亡率的主要因素,對人類的生命健康造成嚴重的威脅。原發(fā)性肝癌的治療目前形成了手術切除為主,結合放化療、生物治療及輔助治療的綜合治療模式。近年來,腫瘤免疫治療也受到廣泛關注。人體的腫瘤免疫應答機制中,由T細胞介導的細胞免疫是極其重要的機制。T細胞的活化和增殖依賴雙重信號通路,T細胞受體通過結合抗原提呈細胞(antigen presenting cell,APC)遞呈MHC-抗原肽復合物活化幼稚T細胞,產(chǎn)生第一信號,而與T細胞受體結合的APC表面的多種共刺激分子參與提供共刺激信號即第二信號,第二信號若缺失或提供共抑制信號,將使T細胞克隆無能或使T細胞活化與功能受到抑制,導致免疫抑制和免疫逃逸。共刺激分子具有眾多成員,主要由B7家族,TNF家族和細胞因子家族三大家族構成。作為B7家族中新發(fā)現(xiàn)的成員,共刺激分子B7-H4對T細胞免疫具有顯著負性調(diào)節(jié)作用,更是當前免疫治療研究熱點。本實驗探討了在人原發(fā)性肝癌組織中,B7-H4表達上調(diào)的臨床意義及與免疫環(huán)境中CD4+,CD8+T細胞浸潤程度及功能性細胞因子TGF-β1和IFN-γ分泌的相關性,初步探討人肝癌組織中B7-H4表達上調(diào)誘導免疫抑制的機制;同時,采用Western Blot技術檢測人肝癌及癌旁組織中純化分離出CD8+T細胞中B7-H4,IFN-γ及自噬通路PI3K-AKT-m TOR-LC3I-LC3II中相關蛋白的表達情況。進一步探討人肝癌組織中B7-H4表達上調(diào)與T細胞異常自噬產(chǎn)生相關性及誘導免疫抑制相關機制。方法:第一部分實驗采用免疫熒光染色方法,檢測80例手術切除的肝癌和癌旁組織,20例正常肝組織標本中B7-H4的表達情況,肝癌組織中浸潤CD4+,CD8+T細胞及功能性細胞因子TGF-β1和IFN-γ的數(shù)量,Western Blot法檢測新鮮肝癌及癌旁組織中B7-H4、TGF-β1和IFN-γ蛋白的表達,分析B7-H4表達上調(diào)的臨床意義及與CD4+,CD8+T細胞浸潤程度及TGF-β1、IFN-γ分泌的相關性。第二部分實驗采用免疫磁珠分選的方法從同一來源的肝癌及癌旁組織中純化分離出CD8+T細胞,利用Western Blot技術檢測兩組細胞中B7-H4、IFN-γ蛋白的表達及自噬通路PI3K-AKT-m TOR-LC3I-LC3II中相關蛋白的表達情況,探討B(tài)7-H4表達上調(diào)與T細胞異常自噬產(chǎn)生及免疫抑制機制相關性。結果:(1)B7-H4在正常肝組織中幾乎不表達,在癌旁組織中呈弱陽性表達,陽性表達率為48.0%。在肝癌組織中B7-H4陽性著色主要定位于胞膜及胞漿中,陽性表達率為81%,顯著高于癌旁組織和正常肝組織(**P=0.000,***P=0.000)。同時,癌旁組織中B7-H4表達水平高于正常肝組織,差異具有統(tǒng)計學意義(*P=0.026)。肝癌組織中B7-H4表達水平與淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度及TNM分期呈正相關關系(P=0.010,P=0.023,P=0.007),尤其與淋巴結轉移及TNM分期顯著相關(P=0.010,P=0.007),而與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤細胞分化程度無相關性(P0.05)。(2)在80例人肝癌組織中,B7-H4陽性表達的病例有65例。其中,CD4+T細胞呈低度浸潤有45例,低度浸潤率達69.2%;CD8+T細胞呈低度浸潤有52例,低度浸潤率達80.0%。TGF-β1蛋白呈低度浸潤有44例,低度浸潤率達67.7%;IFN-γ蛋白呈低度浸潤有54例,低度浸潤率達83.1%。統(tǒng)計學分析表明,肝癌組織中B7-H4的表達水平與腫瘤內(nèi)CD4+,CD8+T淋巴細胞浸潤程度,功能性細胞因子TGF-β1和IFN-γ分泌均呈負相關(P=0.034,P=0.005,P=0.014,P=0.002),其中,B7-H4表達水平與CD8+T淋巴細胞浸潤程度及IFN-γ分泌呈顯著負相關(P=0.005,P=0.002)。(3)Western Blot技術檢測肝癌及癌旁組織中B7-H4、TGF-β1和IFN-γ蛋白表達水平結果表明,與癌旁組織相比,12例(80.0%)肝癌組織中B7-H4表達明顯上調(diào),而細胞因子TGF-β1和IFN-γ表達明顯下降,統(tǒng)計學分析顯示,人肝癌組織中B7-H4表達明顯高于癌旁組織,功能性細胞因子TGF-β1和IFN-γ表達明顯低于癌旁組織,B7-H4的表達水平與TGF-β1及IFN-γ分泌呈負相關。(4)Western Blot技術檢測肝癌及癌旁組織中純化分離出CD8+T細胞中B7-H4,IFN-γ蛋白及自噬通路PI3K-AKT-m TOR-LC3I-LC3II中相關蛋白的表達情況。結果表明,與癌旁組織相比,肝癌組織中B7-H4表達明顯上調(diào),而細胞因子IFN-γ表達明顯下降。與癌旁組織相比,肝癌組織CD8+T細胞中自噬通路PI3K/AKT/m TOR中P-AKT,P-m TOR表達上調(diào),同時LC3-I蛋白表達下降,自噬標志蛋白LC3-II蛋白表達顯著增加。提示了在肝癌組織中B7-H4表達上調(diào)促進CD8+T細胞發(fā)生異常自噬。結論:1、人原發(fā)性肝癌組織中B7-H4表達顯著高于癌旁組織和正常肝組織,肝癌組織中B7-H4表達水平與淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度及TNM分期呈正相關關系,而與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤細胞分化程度無相關性。結果表明B7-H4作為人原發(fā)性肝癌的腫瘤標志物具有敏感性及特異性。2、人原發(fā)性肝癌組織中B7-H4表達水平與腫瘤內(nèi)CD4+,CD8+T淋巴細胞浸潤程度,功能性細胞因子TGF-β1和IFN-γ分泌均呈負相關。結果提示肝癌組織中B7-H4表達上調(diào)抑制T淋巴細胞增殖及功能性細胞因子分泌,從而誘導免疫抑制。3、人原發(fā)性肝癌組織中B7-H4表達上調(diào),而抗腫瘤效應的IFN-γ表達下降,同時CD8+T細胞自噬信號通路PI3K/AKT/m TOR活化明顯,LC3II蛋白表達明顯上調(diào),CD8+T細胞發(fā)生異常自噬。進一步提示肝癌組織中B7-H4表達上調(diào)可能通過PI3K/AKT/m TOR信號通路促進CD8+T細胞發(fā)生異常自噬,從而抑制CD8+T的增殖及功能性細胞因子IFN-γ的分泌,介導免疫抑制。
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【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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1 徐寬楓;B7家族新成員PD-L1、PD-L2的研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2003年05期

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本文編號：1475313