本文關(guān)鍵詞： AMPK DVL3 β-catenin 二甲雙胍 細胞生長 乳腺癌　出處：《南昌大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:AMPK(Adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase)即AMP依賴性蛋白激酶是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是調(diào)節(jié)能量代謝的關(guān)鍵分子,是機體中能源系統(tǒng)的主要監(jiān)管機構(gòu),在細胞或組織中可以通過調(diào)節(jié)下游信號分子DVL3和β-catenin蛋白調(diào)控細胞新陳代謝和保護其免受各種外界壓力的功能。AMPK激活劑能夠通過對腫瘤細胞的生長進行抑制進而達到治療疾病的效果。但是,對于AMPK如何活化和如何在癌癥中抑制癌細胞增殖的分子機制到目前仍然并不十分清楚。我們通過研究AMPK激活劑對乳腺癌細胞和組織的影響,以期闡明其作用的分子機制,為將來用于臨床治療提供可靠的理論依據(jù)。方法:收集并用Western Blot和免疫組化法分析40例乳腺癌患者組織中AMP依賴性蛋白激酶下游分子DVL3和β-catenin的蛋白質(zhì)表達水平與乳腺癌細胞病理特征,預后以及不同分子亞型之間的相關(guān)性。利用Western Blot法檢測了加載有DVL3質(zhì)�；蛘遱hRNA-DVL3的MCF-7、MDA-MB-231、T-47D乳腺癌細胞和MCF-10乳腺細胞的DVL3表達和細胞周期的變化。利用AMPK的激活劑二甲雙胍處理乳腺癌細胞通過體外劃痕實驗,Transwell法以及細胞克隆實驗檢測乳腺癌細胞的發(fā)展。構(gòu)建了乳腺癌移植瘤的模式小鼠結(jié)合HE染色和Western Blot法檢測了DVL3和β-catenin的表達水平。結(jié)果:乳腺癌組織中存在DVL3的過表達,并且與分型、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分期相關(guān),DVL3在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達明顯高于原發(fā)灶。DVL3過表達與異常表達跟乳腺癌的不良預后正相關(guān),并可作為影響乳腺癌預后的獨立危險因素。DVL3能夠與Wnt/β-catenin信號通路作用,顯著調(diào)節(jié)癌細胞的生長。AMPK激活劑有可能抑制乳腺癌細胞的生長,減少DVL3與Wnt/β-catenin信號的表達。進一步對轉(zhuǎn)染過表達或者抑制DVL3的乳腺癌細胞進行研究,發(fā)現(xiàn)DLV3參與了細胞的增殖,遷移和凋亡等過程。AMPK激活劑是通過減少DVL3的表達和降低β-catenin水平來抑制乳腺癌細胞的生長。免疫印跡和免疫組織化學顯示DVL3與β-catenin表達水平顯著相關(guān)。過表達DVL3導致β-catenin表達水平上升和乳腺癌細胞的過度生長,這證實通過Wnt/β-catenin通路激活的DVL3與乳腺癌的發(fā)展有關(guān)。為了闡明機制,我們在體內(nèi)和體外使用了AMPK活化劑確認對DVL3和β-catenin是否存在依賴關(guān)系。結(jié)論:DLV3不僅在乳腺癌中存在著過表達,而且是通過經(jīng)典的信號通路而發(fā)揮促進乳腺癌細胞增殖,遷移和侵襲的能力。AMPK激活劑二甲雙胍能夠抑制DVL3的表達水平,從而降低β-catenin,c-Myc和CyclinD1蛋白的表達,最終導致了乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲的明顯抑制。本研究結(jié)果證實,本論文的研究結(jié)果對于臨床有較高的應(yīng)用價值,同時能夠提倡使用二甲雙胍通過特定分子機制對乳腺癌進行治療。
[Abstract]:Objective: Adenosine 5 monophosphate-activated protein kinase). AMP dependent protein kinase is a serine / threonine protein kinase. It is the key molecule of regulating energy metabolism and the main regulatory body of energy system in the body. A function in cells or tissues that regulates cell metabolism and protects cells from various external pressures by regulating downstream signaling molecules DVL3 and 尾 -catenin proteins. AMPK activators can be activated by. To inhibit the growth of tumor cells to achieve the effect of disease treatment. The molecular mechanism of how AMPK is activated and how it inhibits the proliferation of cancer cells remains unclear. We study the effects of AMPK activators on breast cancer cells and tissues. In order to elucidate the molecular mechanism of its action. To provide a reliable theoretical basis for future clinical treatment. Methods: collect and use Western. The expression levels of DVL3 and 尾 -catenin downstream molecules of AMP dependent protein kinase and the pathological characteristics of breast cancer cells were analyzed by Blot and immunohistochemistry. Western Blot method was used to detect MCF-7 loaded with DVL3 plasmid or shRNA-DVL3. MDA-MB-231. The changes of DVL3 expression and cell cycle in T-47D breast cancer cells and MCF-10 breast cancer cells. The AMPK activator metformin was used to treat breast cancer cells by in vitro scratch assay. Transwell assay and cell cloning assay were used to detect the development of breast cancer cells. A model mouse model of breast cancer transplantation was constructed with HE staining and Western. The expression levels of DVL3 and 尾 -catenin were detected by Blot. Results: there was overexpression of DVL3 in breast cancer. The expression of DVL3 in lymph node metastasis was significantly higher than that in primary tumor. The abnormal expression of DVL3 was positively correlated with the poor prognosis of breast cancer. DVL3 may play an important role in Wnt / 尾 -catenin signaling pathway. Significantly regulate the growth of cancer cells. AMPK activator may inhibit the growth of breast cancer cells. Reduce the expression of DVL3 and WNT / 尾 -catenin signal. Further study on breast cancer cells transfected with DVL3 or inhibit the expression of DLV3, we found that DLV3 involved in cell proliferation. AMPK activator inhibits the growth of breast cancer cells by reducing the expression of DVL3 and the level of 尾 -catenin during migration and apoptosis. Western blot and immunohistochemistry showed DVL. 3There was a significant correlation between 尾 -catenin expression and 尾 -catenin expression. Overexpression of DVL3 resulted in the increase of 尾 -catenin expression and over-growth of breast cancer cells. This suggests that DVL3 activated through the Wnt- 尾 -catenin pathway is associated with the development of breast cancer, in order to elucidate the mechanism. We used AMPK activator in vivo and in vitro to confirm whether there is a dependence on DVL3 and 尾 -catenin. Conclusion: DLV3 is not only overexpressed in breast cancer. And it is through the classic signal pathway to promote the proliferation, migration and invasion of breast cancer cells. Metformin, an activator of AMPK, can inhibit the expression of DVL3. Thus, the expression of 尾 -cateninine c-Myc and CyclinD1 protein was decreased, and the proliferation, migration and invasion of breast cancer cells were significantly inhibited. The results of this study are of high clinical value and can promote the use of metformin in the treatment of breast cancer through specific molecular mechanisms.
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1474038