本文關(guān)鍵詞： 腫瘤 診斷模型 氧化應(yīng)激 microRNAs　出處：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的：腫瘤標(biāo)志物存在非特異性,單獨使用時作用有限。本研究的目的之一就是在前期所建立蛋白芯片的基礎(chǔ)上,構(gòu)建多參數(shù)診斷模型,并與傳統(tǒng)方法進(jìn)行對比研究。microRNAs是新興的生物標(biāo)志物,甚至可用于腫瘤的預(yù)后監(jiān)測和冶療,且它與氧化應(yīng)激均廣泛參與肝癌的發(fā)生和發(fā)展,然而關(guān)于它們之間相互作用的研究較少。本研究的目的之二就是探討氧化應(yīng)激對肝細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng),進(jìn)而篩選氧化應(yīng)激敏感性的microRNAs并預(yù)測其靶基因及其基因功能和信號通路,并初步探討氧化應(yīng)激調(diào)控microRNAs的分子機(jī)制。方法：(1)分別用傳統(tǒng)方法和蛋白芯片對入選的1723例惡性腫瘤患者、1798例良性疾病患者以及162例健康對照進(jìn)行檢測,接著用二元Logistic回歸建立多參數(shù)診斷模型,并與單個標(biāo)志物進(jìn)行對比評價。(2)利用過氧化氫干預(yù)建立細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,探討其對人肝細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng),包括細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡等。(3)用microRNAs芯片篩選氧化應(yīng)激敏感性的microRNAs,并對其靶基因及其主要參與的基因功能和信號通路進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測。(4)用qPCR法檢測H2O2作用前后microRNAs生物合成通路中關(guān)鍵分子(Drosha、DGCR8、Exportin、Dicer、AGO2和GW182)的mRNA水平變化。同時,以miR-885-5p為例,用qPCR法對芯片檢測結(jié)果進(jìn)行驗證。結(jié)果：(1)男女芯片多參數(shù)診斷模型的診斷效能均優(yōu)于單用以下生物標(biāo)志物：PGⅠ、PGⅡ、pro-GRP、NSE和CA125 (P0.05).而且,男芯模型還優(yōu)于單用CA199或f-PSA(P0.05),女芯模型還優(yōu)于單用CA724和β-HCG(P0.05).男女芯多參數(shù)診斷模型對總體疾病診斷的AUC分別為0.981(95% CI：0.975-0.987)和0.836(95% CI：0.798-0.874),而對總體腫瘤診斷的AUC分別為0.691(95% CI：0.666-0.717)和0.753(95% CI：0.73 1-0.775)。 (2)肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞活力和增殖均在50μM時即開始顯著下降(P0.05),而正常肝細(xì)胞系L-02在200μM才開始下降,均呈濃度依賴性。它們的細(xì)胞周期均在100μM左右即顯著阻滯在G2M期,且S期細(xì)胞也逐漸減少。經(jīng)800μMH202作用24 h后,L-02和HepG2的凋亡細(xì)胞比分別為17%和80%。此外,雖能觀察到低濃度H202(10-30 μM)對HepG2細(xì)胞的活力和增殖有促進(jìn)作用,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(3)與對照相比,高、低濃度H202干預(yù)HepG2細(xì)胞后,可分別篩選出131和16種差異microRNAs,高濃度組大都上調(diào),而低濃度組均下調(diào)。經(jīng)趨勢分析篩選到207個差異microRNAs,并發(fā)現(xiàn)三種顯著的趨勢模型(P0.05)。以上差異miRNAs的靶基因均主要參與轉(zhuǎn)錄及調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡和周期等相關(guān)功能。(4)高濃度H202(200μM)干預(yù)時,六種microRNAs生物合成關(guān)鍵基因的mRNA水平大都顯著下降(P0.05),有的呈濃度依賴性下降。而低濃度(≤200μM)時,大都無顯著差異。此外,qPCR法與microRNAs芯片在H202低濃度時檢測miR-885-5p的結(jié)果高度一致,均為下調(diào);而當(dāng)H202濃度升高到600 μM時,芯片結(jié)果顯示該microRNAs呈顯著下調(diào),而qPCR檢測結(jié)果卻變化不大。結(jié)論：(1)相較于生物標(biāo)志物的單獨使用,多參數(shù)診斷模型可提高診斷效能,具有較好的特異性和敏感性。(2)H202以濃度依賴性的特征發(fā)揮抑制細(xì)胞活力、介導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯并促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,最終導(dǎo)致細(xì)胞活力的下降。而在低濃度時,可能起到相反甚至有益于細(xì)胞活力的作用。(3)高濃度H202主要促進(jìn)]microRNAs的表達(dá),而低濃度時作用不顯著。經(jīng)預(yù)測,差異microRNAs的靶基因主要涉及轉(zhuǎn)錄及調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡和周期等相關(guān)功能或通路。(4)高濃度H202可以濃度依賴性的方式抑制microRNAs生物合成中六種關(guān)鍵分子的mRNA水平,而在較低濃度時大都無顯著影響,初步表明氧化應(yīng)激調(diào)控microRNAs存在其它的機(jī)制。
[Abstract]:Objective : To study the biological effects of oxidative stress on human hepatocellular carcinoma ( HCC ) . Results : ( 1 ) Compared with single - use CA199 or f - PSA ( P0.05 ) , the results showed that : ( 1 ) Compared with single - use CA199 or f - PSA ( P0.05 ) , the cell cycle was significantly higher than that of single - use CA199 or f - PSA ( P0.05 ) . Conclusion : ( 1 ) High concentration H202 can inhibit the expression of miR - 885 - 5p and decrease the concentration - dependent manner .

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.4

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本文編號：1473132