本文關(guān)鍵詞： E3泛素連接酶DTL 乳腺癌 細(xì)胞周期 細(xì)胞增殖　出處：《浙江大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：乳腺癌是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅女性健康,最常見(jiàn)并且致死率很高的腫瘤。盡管乳腺癌的治療療效不斷提高,但仍有相當(dāng)一部分患者復(fù)發(fā)或?qū)ΤＲ?guī)治療耐藥。進(jìn)一步篩選和發(fā)現(xiàn)乳腺癌治療的新靶標(biāo),可能為乳腺癌的診治提供新的思路。我們對(duì)乳腺癌細(xì)胞系基因表達(dá)譜芯片結(jié)果進(jìn)行分析后,篩選出與乳腺癌生長(zhǎng)相關(guān)的一個(gè)E3泛素連接酶DTL (denticleless E3 ubiquitin protein ligase),并對(duì)其在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)和功能進(jìn)行了初步研究。為了探究DTL在乳腺癌細(xì)胞中可能發(fā)揮的調(diào)控作用,我們首先通過(guò)熒光定量PCR (Q-PCR)和Western Blot的方法確定了DTL在幾種乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)其在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)較正常細(xì)胞高。用免疫熒光與激光共聚焦顯微鏡觀察了DTL細(xì)胞亞定位情況,DTL定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。然后我們利用RNA干擾技術(shù)在MCF-7, MDA-MB-231中下調(diào)DTL的表達(dá),通過(guò)MTT比色法和Brdu標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,發(fā)現(xiàn)干擾DTL可以明顯抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7,MDA-MB-231的增殖。因此我們推測(cè)DTL可能是通過(guò)影響細(xì)胞周期來(lái)發(fā)揮其調(diào)控作用的。接著我們?cè)贛CF-7, MDA-MB-231這兩種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA-DTL后利用流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞周期的變化,發(fā)現(xiàn)干擾DTL后使得乳腺癌細(xì)胞周期G1期比例減少,G2/M期細(xì)胞比例增多。接著,我們通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)了幾種常見(jiàn)的細(xì)胞周期蛋白、蛋白激酶以及蛋白激酶抑制因子的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在MCF-7中干擾DTL后可顯著促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21 mRNA的表達(dá), Western Blot提示干擾DTL后P21的蛋白水平也增加。說(shuō)明DTL對(duì)細(xì)胞周期的作用可能通過(guò)調(diào)節(jié)P21的表達(dá)來(lái)發(fā)揮作用,但具體如何發(fā)揮作用,是否通過(guò)泛素相關(guān)的途徑還是其他機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。但在MDA-MB-231中siRNA-DTL后P21的mRNA和蛋白質(zhì)水平?jīng)]有變化,可能在不同的細(xì)胞中DTL的作用機(jī)制不同,有待于后續(xù)進(jìn)一步驗(yàn)證。綜上,在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)DTL在各種乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá),干擾DTL可以抑制乳腺癌細(xì)胞增殖,使細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。DTL可能通過(guò)抑制P21的表達(dá),促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖,有可能作為乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Breast cancer is a worldwide threat to women's health, the most common and with a high mortality rate, despite the increasing therapeutic efficacy of breast cancer. However, a considerable number of patients still recur or are resistant to conventional therapy. New targets for breast cancer therapy are further screened and identified. It may provide a new idea for the diagnosis and treatment of breast cancer. We analyze the results of gene expression microarray of breast cancer cell line. An E3-ubiquitin ligase DTL denticleless E3 ubiquitin protein associated with breast cancer growth was screened. In order to explore the possible regulatory role of DTL in breast cancer cells, the expression and function of DTL in breast cancer cells were studied. We first determined the expression of DTL in several breast cancer cell lines by fluorescence quantitative PCR Q-PCR and Western Blot. It was found that its expression in breast cancer cells was higher than that in normal cells. The sublocalization of DTL cells was observed by immunofluorescence and confocal laser microscopy. DTL was located in cytoplasm and nucleus. Then we down-regulated the expression of DTL in MCF-7 and MDA-MB-231 by RNA interference technique. The proliferation of breast cancer cells was detected by MTT colorimetry and Brdu labeling. It was found that interfering with DTL could significantly inhibit MCF-7 of breast cancer cells. The proliferation of MDA-MB-231. Therefore, we speculate that DTL may play a regulatory role by affecting cell cycle. We then work in MCF-7. The changes of cell cycle were observed by flow cytometry after transfection of siRNA-DTL into MDA-MB-231 cells. It was found that interfering with DTL reduced the proportion of G _ 2 / M phase cells in breast cancer cell cycle. Then, we detected several common cell cycle proteins by RT-qPCR. The expression of protein kinase and protein kinase inhibitor showed that interfering with DTL in MCF-7 could significantly promote the expression of cyclin kinase inhibitor P21 mRNA. Western Blot suggested that the protein level of P21 increased after interfering with DTL, suggesting that the effect of DTL on cell cycle might be mediated by regulating the expression of P21. But how it works. Whether the mechanism is related to ubiquitin or not remains to be further studied, but the mRNA and protein levels of P21 do not change after siRNA-DTL in MDA-MB-231. It is possible that the mechanism of DTL in different cells is different, which needs to be further verified. In summary, we found that DTL is highly expressed in various breast cancer cells in this study. Interfering with DTL can inhibit the proliferation of breast cancer cells and arrest the cell cycle in G _ 2 / M phase. DTL may promote the proliferation of MCF-7 cells by inhibiting the expression of P21. It may be a potential therapeutic target for breast cancer.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國(guó)華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國(guó);郭向陽(yáng);張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊(cè));2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會(huì)健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 劉愛(ài)國(guó);胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會(huì)第四次代表大會(huì)暨乳腺癌、肺癌專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立會(huì)議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽(yáng);王兆鉞;阮長(zhǎng)耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國(guó)婦女報(bào);2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個(gè)時(shí)期不一樣[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

9 王樂(lè)　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測(cè)及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙酰化酶抑制劑對(duì)乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 單系金;Mfn2磷酸化修飾對(duì)其調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖功能的重要性的研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 徐晶;缺氧對(duì)乳腺癌細(xì)胞miR-210表達(dá)及侵襲能力的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 李麗;Mfn2對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7侵襲遷移能力的影響及機(jī)制探究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 楊洋;醌氧化還原酶及其抑制劑在乳腺癌增殖與遷移中的作用研究[D];延邊大學(xué);2015年

6 張秀娟;免疫組化與熒光原位雜交檢測(cè)乳腺癌Her-2表達(dá)的對(duì)比研究及17號(hào)染色多體對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

7 韓晶;納米脂質(zhì)體多西他賽抑制乳腺癌細(xì)胞增殖降低骨髓毒性的機(jī)制[D];安徽大學(xué);2015年

8 鐘顯峰;乳腺癌的分子亞型與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

9 張碩穩(wěn);MTDH、IκB、NF-κB P65在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 謝少利;RNAi阻低UBE3A后對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號(hào)：1471847