本文關(guān)鍵詞： RhoGDI2 膀胱癌 信號(hào)通路 生物信息學(xué)　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:分析RhoGDI2基因?qū)Π螂装┺D(zhuǎn)移、預(yù)后的影響,探索研究其參與調(diào)控的下游通路。方法:1.制作膀胱癌組織芯片,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)組織芯片中RhoGDI2蛋白表達(dá)情況,分析其與膀胱癌病理、預(yù)后的相關(guān)性。2.從美國(guó)癌組基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù)下載膀胱癌全基因組表達(dá)譜數(shù)據(jù)集合及患者臨床信息資料,分析RhoGDI2基因的表達(dá)與膀胱癌患者臨床病理、預(yù)后的相關(guān)性,再運(yùn)用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)膀胱癌全基因表達(dá)譜及DAVID(The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery,DAVID)在線工具富集RhoGDI2相關(guān)下游信號(hào)通路。3.利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建立RhoGDI2正負(fù)表達(dá)細(xì)胞系,Western blotting驗(yàn)證所富集RhoGDI2下游通路可能性。4.Western blotting驗(yàn)證臨床18例膀胱癌組織中RhoGDI2表達(dá)與富集信號(hào)通路的節(jié)點(diǎn)蛋白相關(guān)性。總共檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)有16個(gè):RhoGDI2、Cdc42、Rac123、Phosphor-Rac1/cdc42(ser71)、RhoA、Rho B、RhoC、Raf1、Ras、Rock2、MEK1/2、Erk1、Vav2、Vav3、MLC2、P-MLC2(s19)。結(jié)果:1.膀胱癌組織芯片分析結(jié)果:AJCC pTNM分期中T2~T3分期、T1-2~T3-4期、病理分級(jí)、轉(zhuǎn)移與RhoGDI2的表達(dá)存在顯著負(fù)相關(guān)(P0.05),預(yù)后則與RhoGDI2的表達(dá)存在顯著正相關(guān)(RhoGDI2高表達(dá)組中位生存時(shí)間5年生存率均明顯長(zhǎng)于/高于低表達(dá)組,P0.05)。2.tcga數(shù)據(jù)分析結(jié)果:rhogdi2的表達(dá)在ajccptnm分期的t2-t3期、臨床分期的ii~iii期與分期呈負(fù)相關(guān),在t3~t4期與分期顯著正相關(guān)(p0.05),與病理分級(jí)呈明顯負(fù)相關(guān)(p0.05),與肌層侵潤(rùn)、轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)(p0.05)。預(yù)后則與rhogdi2的表達(dá)存在顯著正相關(guān)(rhogdi2高表達(dá)組中位生存時(shí)間、中位無(wú)瘤生存時(shí)間、3年生存率、5年生存率、3年無(wú)瘤生存率、5年無(wú)瘤生存率均明顯長(zhǎng)于/高于低表達(dá)組,p0.05)。從tcga數(shù)據(jù)庫(kù)膀胱癌全基因表達(dá)譜中篩查出與rhogdi2相關(guān)差異表達(dá)基因5960個(gè)。納入david在線工具后富集出與rhogdi2相關(guān)信號(hào)通路共105條,其中涉及cdc42、rhoa、rac的有9條,其所含基因與rhogdi2的表達(dá)正向相關(guān)。另外,涉及ras基因的通路有18條,其所含基因與rhogdi2基因的表達(dá)存在負(fù)向關(guān)系。3.體外細(xì)胞westernblotting驗(yàn)證rhogdi2調(diào)控通路,rhogdi2、cdc42、rac123、rhoa、ras、mlc2在t24-rhogdi2細(xì)胞中顯著高于對(duì)照組,而在t24-rhogdi2-rnai中明顯低于對(duì)照組(p0.05)。rock2、erk1、vav2、vav3僅在t24-rhogdi2-rnai細(xì)胞系中表達(dá)顯著降低(p0.05),mek1/2、p-mlc2則僅在t24-rhogdi2組中明顯降低(p0.05)。rhoc在t24-rhogdi2-rnai和t24-rhogdi2中表達(dá)都顯著高于對(duì)照組(p0.05),phosphor-rac1/cdc42(ser71)、rhob、raf1則在5種細(xì)胞系中無(wú)明顯表達(dá)。4.膀胱癌組織標(biāo)本westernblotting驗(yàn)證rhogdi2調(diào)控通路:(1)癌組中,cdc42、rac123、rhoa、ras、erk1、vav2、mlc2和rhogdi2的表達(dá)在spearmon相關(guān)分析中都呈顯著正相關(guān)(p0.05),而mek1/2、p-mlc2的表達(dá)情況則與上述指標(biāo)相反,rock2與rhogdi2不存在明顯相關(guān)性(p0.05)。(2)正常組中各相關(guān)指標(biāo)在rhogdi2高低表達(dá)組間也無(wú)明顯差異(p0.05)。(3)rhogdi2、rhoa在癌組的表達(dá)顯著低于正常組(p0.05),rock2、ras、mek1/2、Erk1、Vav2、MLC2、P-MlC2則是癌組的表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05)。Rac123、Cdc42在癌組和正常組中表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。(4)RhoGDI2低表達(dá)組中癌組RhoGDI2、Cdc42、Rac123、RhoA的表達(dá)明顯低于正常組(P0.05),而MEK1/2則明顯高于(P0.05)。RhoGDI2高表達(dá)組中癌組Cdc42、Ras的表達(dá)相對(duì)于正常組表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05),在癌組中Rock2、Erk1、Vav2、MLC2、P-MLC2無(wú)論在RhOGDI2高表達(dá)還是低表達(dá)組均相對(duì)于正常組表達(dá)上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:1.RhoGDI2是膀胱癌病理分期、臨床分期、病理分級(jí)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)因素。2.Rho GDI2基因可通過(guò)調(diào)節(jié)RhoGTP酶間接對(duì)其下游信號(hào)通路:Vav-RhoA-ROCK-MLC和Ras-MEK-Erk起到主要的調(diào)節(jié)作用,最終發(fā)揮抑制膀胱癌發(fā)展及改善預(yù)后的生物學(xué)效應(yīng),所以該基因及其下游通路或可成為膀胱癌靶向治療的新型靶向位點(diǎn)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of RhoGDI2 gene on the metastasis and prognosis of bladder cancer . The results showed that the expression of rhogdi2 was significantly correlated with stage ( P < 0.05 ) . The results showed that the expression of rhogdi2 was significantly correlated with stage ( P < 0.05 ) . The survival time , survival time , 3 - year survival rate , 5 - year survival rate , 3 - year tumor - free survival rate and 5 - year tumor - free survival rate of rhogdi2 were significantly longer than that of low - expression group ( p < 0.05 ) . 3 . The expression of rhogdi2 , cdc42 , rac123 , rhoa , ras and mlc2 was significantly lower in t24 - rhogdi2 - rnai than in the control group ( p . 05 ) . ( 4 ) The expression of RhoGDI2 , Cdc42 , Rac123 and RhoA in the cancer group was significantly higher than that in the normal group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1470543