本文關(guān)鍵詞： 食管鱗癌 細(xì)胞凋亡 侵襲轉(zhuǎn)移 Gli1 GANT61　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:食管癌是我國(guó)常見的消化道腫瘤之一,我國(guó)食管癌患者的發(fā)病率和死亡率均居世界首位,其病理類型以食管鱗狀細(xì)胞癌為主。目前食管癌的手術(shù)、放化療治療效果欠佳,患者生存預(yù)后不理想,其分子靶向領(lǐng)域的治療越來越得到人們的重視。Hedgehog(Hh)信號(hào)通路在多細(xì)胞生物胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。Hh信號(hào)通路的活化參與成體生物組織的干細(xì)胞調(diào)控、組織損傷修復(fù)和血管再生等多種生理機(jī)能。Gli基因作為Hh信號(hào)通路的最終執(zhí)行者,其異常持續(xù)的激活可以啟動(dòng)下游多種與腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。多項(xiàng)研究結(jié)果表明,Gli基因在多種人類惡性腫瘤中異常激活并參與到腫瘤的發(fā)生發(fā)展及惡性生物學(xué)特性之中。研究發(fā)現(xiàn)Gli1蛋白在食管鱗癌組織中異常增高表達(dá),與腫瘤的發(fā)生形成密切相關(guān),并且可作為評(píng)價(jià)患者生存預(yù)后的獨(dú)立因素。針對(duì)Hh信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子Gli的特異性抑制劑GANT61能夠誘導(dǎo)惡性間皮瘤、急性髓系白血病、橫紋肌肉瘤、胰腺癌等腫瘤細(xì)胞的凋亡,目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于GANT61對(duì)人類食管鱗癌作用的研究較為少見,本研究主要探討Gli抑制劑GANT61對(duì)人類食管鱗癌細(xì)胞OE21凋亡和侵襲能力的影響,探究食管鱗癌細(xì)胞的凋亡機(jī)制,尋找低毒高效的食管鱗癌分子靶向藥物。方法:采用MTS法檢測(cè)不同濃度(0、1.171、1.756、2.634、3.951、5.936、8.889、13.333、20、30μmol/L)GANT61處理72h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21的活力抑制作用,繪制細(xì)胞活力曲線。計(jì)算IC50。采用Western blot方法檢測(cè)10μmol/L GANT61處理24h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21中Gli1,Fas及cleaved caspase-3蛋白表達(dá)的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)10μmol/L GANT61處理24h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21細(xì)胞凋亡的影響。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)10μmol/L GANT61處理24h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21侵襲能力的影響。結(jié)果:1 MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,GANT61處理72h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21存在明顯細(xì)胞毒性作用,顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,隨藥物濃度的增加,細(xì)胞活力呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)。IC50=7.975μmol/L。2 Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,GANT61處理24h能夠明顯降低食管鱗癌細(xì)胞OE21中Gli1蛋白的表達(dá),Fas及cleaved caspase-3凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)量明顯升高。3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,GANT61處理食管鱗癌細(xì)胞OE21 24h后可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率明顯增加,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4 Tanswell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,GANT61處理食管鱗癌細(xì)胞OE21 24h后,細(xì)胞侵襲數(shù)目明顯減少,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:Gli1抑制劑GANT61對(duì)人類食管鱗癌細(xì)胞OE21具有明顯的細(xì)胞毒性作用,可以顯著抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活力,且呈明顯劑量依賴性,經(jīng)計(jì)算IC50=7.975μmol/L。Western blot結(jié)果表明GANT61能夠顯著抑制Gli1蛋白表達(dá),增加細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Fas及cleaved caspase-3的表達(dá)量,GANT61可能通過特異性抑制食管鱗癌細(xì)胞OE21中Gli1蛋白表達(dá)從而減弱其對(duì)細(xì)胞死亡受體Fas/Fas L凋亡途徑的抑制作用,誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞凋亡。GANT61能夠有效抑制食管鱗癌細(xì)胞OE21的侵襲轉(zhuǎn)移能力。本研究為食管鱗癌的分子靶向治療提供理論依據(jù)及新的思路。
[Abstract]:Objective: esophageal cancer is one of the common gastrointestinal tumors in China, Chinese patients with esophageal cancer incidence and mortality rate ranks first in the world, the pathological type of esophageal squamous cell carcinoma. The esophageal cancer surgery, radiotherapy chemotherapy effect is poor, the prognosis is not ideal, and to the field of treatment the molecular target of more attention has been paid to.Hedgehog (Hh) signaling a key role in the activation of.Hh signaling pathway in adult tissue stem cell regulation in the process of embryonic development of multicellular organisms in play, tissue repair and vascular regeneration and other physiological functions of Hh signaling pathway.Gli gene as the final executant of its duration the activation of transcription of downstream multiple tumor related genes. Several research results show that the Gli gene in various human malignant tumors and to participate in the abnormal activation of tumor occurrence Development and malignant biological characteristics. The study found that abnormal Gli1 protein expression in esophageal squamous cell carcinoma, and closely related to tumor formation, and can be used as an independent prognostic factor evaluation. A specific inhibitor of GANT61 signaling pathway in Hh transcription factor Gli can induce malignant mesothelioma, acute myeloid leukemia, rhabdomyosarcoma. Apoptosis of pancreatic cancer cells, the current domestic and international research on the effect of GANT61 on human esophageal squamous cell carcinoma is rare, this study aims to investigate the effects of Gli inhibitor GANT61 on human esophageal carcinoma cells OE21 apoptosis and invasion, apoptosis mechanism of esophageal squamous cell carcinoma, squamous cell carcinoma of the esophagus for molecular target of high efficiency and low toxicity to the drug. MTS was used to detect different concentrations (0,1.171,1.756,2.634,3.951,5.936,8.889,13.333,20,30 mol/L) GANT61 72h in esophageal squamous cell carcinoma Inhibition of OE21 cell activity, cell viability curve drawing by Western IC50.. The calculation method for the detection of blot 10 mol/L GANT61 24h of Gli1 OE21 in esophageal squamous cell carcinoma, the expressions of Fas and cleaved caspase-3 protein. Flow cytometry was used to detect 10 mol/L GANT61 treatment effect of 24h on apoptosis of OE21 cells in esophageal squamous cell carcinoma cell line.Transwell invasion assay 10 mol/L GANT61 treatment effect of 24h on the invasion of esophageal squamous cell carcinoma cell line OE21. Results: 1 MTS experimental results show that GANT61 72h has obvious cytotoxic effect on esophageal squamous cell carcinoma OE21 cells, inhibit the growth of tumor cell viability, with the increase in drug concentration, cell viability decreased from.IC50=7.975 mol/L.2 Western blot results showed that compared with the control group, GANT61 24h treatment can significantly reduce the expression of Gli1 protein in esophageal squamous cell carcinoma cell line OE21, Fas The expression of cleaved caspase-3 and apoptosis related protein were significantly increased..3 flow cytometry results showed that GANT61 can lead to cell apoptosis was significantly increased after treatment of esophageal squamous cell carcinoma OE21 24h, compared with the control group had significant difference (P0.01).4 Tanswell invasion experiment results showed that GANT61 treatment of esophageal squamous cell carcinoma cell line OE21 after 24h. The invasion cell number was significantly reduced, compared with the control group the difference was statistically significant (P0.01). Conclusion: the Gli1 inhibitor GANT61 has obvious cytotoxic effect on human esophageal squamous cell carcinoma OE21 cells can significantly inhibit tumor cell growth activity, and a significant dose dependence, the calculation of IC50=7.975 mol/L.Western blot results show that GANT61 can significantly inhibit the expression of Gli1 protein and increasing the expression of apoptosis related protein Fas and cleaved Caspase-3, GANT61 may inhibit the esophageal cell by specific In order to weaken the inhibition of cell death receptor Fas/Fas L apoptosis protein Gli1 expression in cancer cells OE21 induced apoptosis of esophageal squamous cell carcinoma,.GANT61 can effectively inhibit the invasion and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma cell line OE21. This study provides a theoretical basis and new ideas for the molecular target of esophageal squamous cell carcinoma to the treatment.

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：1465198