本文關(guān)鍵詞： B7-H4 單克隆抗體 胰腺癌 免疫組化　出處：《浙江大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景與目的： 胰腺癌是一種以起病隱匿、生長迅速并早期轉(zhuǎn)移為特征的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,是死亡率最高的惡性腫瘤之一,目前尚無有效的治療措施,其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢。由于胰腺組織的解剖位置關(guān)系,早期癥狀不明顯且缺乏有效的檢測手段,大多數(shù)患者就診時(shí)已為中晚期,預(yù)后差,5年生存率不足5%。早期發(fā)現(xiàn)與早期診斷是改善胰腺癌患者預(yù)后的有效措施之一。因此,尋找早期診斷、特異性強(qiáng)、靈敏度高的腫瘤分子標(biāo)記物對于改善胰腺癌患者的預(yù)后具有重要的臨床意義,同時(shí)也能為胰腺癌新型靶向治療技術(shù)提供依據(jù)。 B7-H4(也稱為B7S1或B7x)是新近發(fā)現(xiàn)的B7家族成員,能抑制T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞周期的進(jìn)行,從而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。B7-H4在腫瘤免疫應(yīng)答中起重要作用。B7-H4mRNA的在脾、肺、胸腺、胎盤、肝、腎等正常組織中均有表達(dá),然而,免疫組化顯示,B7-H4蛋白在正常外周組織中幾乎沒有陽性表達(dá),而在一些腫瘤組織中有豐富表達(dá),例如乳腺癌、卵巢癌、腎癌、前列腺癌和非小細(xì)胞肺癌,并與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)。鑒于目前尚無可用于多種方法檢測B7-H4表達(dá)的抗體出售,本研究以穩(wěn)定表達(dá)B7-H4的3T3-B7-H4細(xì)胞為免疫原,制備了能穩(wěn)定分泌特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,并對其進(jìn)行了生物學(xué)特性分析。同時(shí),應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測B7-H4在胰腺癌組織中的表達(dá),探討B(tài)7-H4的表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系,分析B7-H4在胰腺癌診療及預(yù)后判斷等方面的潛在價(jià)值。 方法： 1.以穩(wěn)定表達(dá)B7-H4胞外段的3T3-B7-H4細(xì)胞為免疫原,免疫Babl/C小鼠；應(yīng)用常規(guī)雜交瘤技術(shù)將免疫的小鼠脾細(xì)胞與Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合,使用間接ELISA方法篩選分泌抗B7-H4單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。并對所獲得的單克隆抗體進(jìn)行亞型鑒定,使用Western blotting、免疫沉淀等方法對單克隆抗體特異性進(jìn)行鑒定。 2.利用制備的小鼠抗B7-H4單克隆抗體,通過免疫組化(IHC)等方法分析B7-H4在胰腺癌組織中的表達(dá)特征,并評價(jià)其與臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果： 1.獲得1株亞型為IgM、輕鏈為κ型的針對B7-H4的鼠源單克隆抗體：特異性抗B7-H4的單抗3E8能用于免疫沉淀(IP)及IHC等方法檢測組織及細(xì)胞中的B7-H4表達(dá)。 2.免疫組化顯示：胰腺癌組織中B7-H4在胞漿和(或)胞膜彌漫表達(dá),表達(dá)量顯著高于正常胰腺組織(P0.05)。B7-H4在臨床腫瘤分級較高患者的胰腺癌組織及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的胰腺癌組織中表達(dá)顯著增強(qiáng)。 結(jié)論： 成功獲得了特異性抗B7-H4的單克隆抗體,B7-H4在胰腺癌組織中表達(dá)上調(diào),并與患者腫瘤分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
[Abstract]:Background and purpose: Pancreatic cancer is a kind of digestive system malignant tumor characterized by occult onset, rapid growth and early metastasis. Pancreatic cancer is one of the highest mortality malignant tumors. There is no effective treatment for pancreatic cancer. Due to the anatomical location of pancreatic tissue, the early symptoms are not obvious and lack of effective means of detection, most of the patients were in the middle and late stage, and the prognosis was poor. The 5-year survival rate is less than 5%. Early detection and early diagnosis is one of the effective measures to improve the prognosis of patients with pancreatic cancer. The highly sensitive tumor molecular markers have important clinical significance for improving the prognosis of pancreatic cancer patients, and can also provide the basis for the new targeted therapy of pancreatic cancer. B7-H4 (also known as B7S1 or B7x) is a newly discovered member of the B7 family, which can inhibit T cell proliferation, cytokine production and cell cycle progression. Thus, inhibiting T cell mediated immune response. B7-H4 plays an important role in tumor immune response. B7-H4 mRNA is expressed in spleen, lung, thymus, placenta, liver, kidney and other normal tissues. However, immunohistochemical staining showed that there was almost no positive expression of B7-H4 protein in normal peripheral tissues, but abundant expression in some tumor tissues, such as breast cancer, ovarian cancer and renal carcinoma. Prostate cancer and non-small cell lung cancer (NSCLC) are closely related to tumor progression. In this study, a hybridoma cell line was prepared by using 3T3-B7-H4 cells stably expressing B7-H4 as immunogen. At the same time, the expression of B7-H4 in pancreatic carcinoma was detected by immunohistochemical staining. To investigate the relationship between the expression of B7-H4 and the clinicopathological features of pancreatic cancer, and to analyze the potential value of B7-H4 in the diagnosis, treatment and prognosis of pancreatic cancer. Methods: 1. Babl/C mice were immunized with 3T3-B7-H4 cells which expressed the extracellular domain of B7-H4 stably. The immunized mouse spleen cells were fused with Sp2/0 mouse myeloma cells by conventional hybridoma technique. The hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies against B7-H4 were screened by indirect ELISA method and the subtypes of the obtained monoclonal antibodies were identified. The specificity of monoclonal antibody was identified by Western blotting and immunoprecipitation. 2. The expression of B7-H4 in pancreatic cancer tissues was analyzed by immunohistochemical method with monoclonal antibody against B7-H4. And to evaluate its relationship with clinicopathological features. Results: 1. A subtype of IgM was obtained. Murine monoclonal antibody against B7-H4 with 魏 type light chain: specific monoclonal antibody 3E8 against B7-H4 can be used for immunoprecipitation (IP). And IHC were used to detect the expression of B7-H 4 in tissues and cells. 2.Immunohistochemistry showed that B7-H4 was diffusely expressed in cytoplasm and / or membrane of pancreatic carcinoma. The expression of P0.05N. B7-H4 in normal pancreatic tissue was significantly higher than that in normal pancreatic tissue. The expression level of B7-H4 was significantly higher in pancreatic cancer tissues with higher clinical tumor grade and in pancreatic cancer tissues with lymph node metastasis. Conclusion: A specific monoclonal antibody against B7-H4 was successfully obtained. The expression of B7-H4 was up-regulated in pancreatic cancer tissues and was closely related to tumor grade and lymph node metastasis.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王永麗;梁建芳;鄭繪霞;肖虹;程彩霞;李寧;;卵巢上皮性腫瘤中B7-H4表達(dá)及臨床意義[J];長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

2 ;Construction of B7x Gene Overexpression Lentiviral-based Vector[J];Chemical Research in Chinese Universities;2011年04期

3 劉剛;腫瘤休眠研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);2003年03期

4 朱俊鋒;周黎黎;耿英華;張鳳;楊艷麗;夏瑞祥;;淋巴瘤組織中B7-H4的表達(dá)及其臨床意義[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年10期

5 胡建慧;陳忠;毛飛;;血清sB7-H4檢測在胃癌診斷中的價(jià)值[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2013年21期

6 Lian-Jie Mo;Hong-Xing Ye;Ying Mao;Yu Yao;Jian-Min Zhang;;B7-H4 expression is elevated in human U251 glioma stem-like cells and is inducible in monocytes cultured with U251 stem-like cell conditioned medium[J];Chinese Journal of Cancer;2013年12期

7 孫多祥;周穎;胡衛(wèi)平;;上皮性卵巢癌生物學(xué)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];癌癥進(jìn)展;2013年06期

8 李春仙;陳潔;彭嵐;;sB7-H4蛋白和CA125聯(lián)檢在卵巢癌患者中的應(yīng)用價(jià)值[J];放射免疫學(xué)雜志;2013年05期

9 王東;王健;陳國俊;;血清誘捕受體3的水平與膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年12期

10 張俊愛;曾今誠;王萬黨;趙祖國;王志勇;徐軍發(fā);;人B7-H4慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年03期

相關(guān)會議論文 前1條

1 王永麗;梁建芳;鄭繪霞;肖虹;程彩霞;李寧;;卵巢上皮性腫瘤中B7-H4表達(dá)及臨床意義[A];2009年“臨床診斷和治療新進(jìn)展研究”暨“全國腫瘤病理診斷交流”研討會論文集[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 蔣敬庭;協(xié)同刺激分子B7-H4在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];蘇州大學(xué);2011年

2 管國芳;聯(lián)合應(yīng)用NDV HN基因、CAV VP3基因及IL-18基因?qū)戆┘?xì)胞的殺傷作用及其體內(nèi)抑瘤效應(yīng)研究[D];吉林大學(xué);2006年

3 陳成;負(fù)性協(xié)同刺激分子B7-H4在肺癌免疫逃逸中的作用及其機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2012年

4 錢韻;B7-H4的異常表達(dá)在胰腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];浙江大學(xué);2013年

5 呂晶晶;結(jié)直腸癌中EHD2、PDLIM7表達(dá)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 孫曉敬;弓形蟲感染的血清流行病學(xué)調(diào)查及部分抗原的免疫學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2013年

7 茆勇;負(fù)性共刺激分子B7-H1、B7-H3、B7-H4在結(jié)直腸癌演變過程中的表達(dá)規(guī)律及臨床意義[D];蘇州大學(xué);2013年

8 周建波;VTCN1基因在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中作用及機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2014年

9 王振欣;Tim-3在胃癌免疫細(xì)胞上表達(dá)的臨床意義和生物學(xué)功能的初步研究[D];蘇州大學(xué);2014年

10 張彥;卵巢癌相關(guān)分子標(biāo)志物的初步鑒定及新型靶向抗體的制備[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 廖林虹;B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌的表達(dá)和臨床病理意義[D];南昌大學(xué);2011年

2 王雪松;人結(jié)腸癌組織中B7-H4的表達(dá)及其臨床意義[D];華中科技大學(xué);2011年

3 胡文蔚;胃癌組織中黏附分子整合素CD11c的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系[D];蘇州大學(xué);2011年

4 石紅兵;CD8~+T細(xì)胞在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];蘇州大學(xué);2011年

5 徐慧;人B7-H4基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建與鼠抗人B7-H4單克隆抗體的制備[D];蘇州大學(xué);2011年

6 劉杰;共刺激分子B7-H3和B7-H4在乳腺癌和結(jié)直腸癌中表達(dá)的研究[D];山東大學(xué);2006年

7 朱文華;rhB7-H4IgV腫瘤疫苗的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 王永麗;卵巢腫瘤中CA125、OPN、YKL-40和B7-H4的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

9 房鵬;鼠抗人B7-H4單克隆抗體的制備及可溶性B7-H4酶聯(lián)檢測試劑盒的研制[D];蘇州大學(xué);2012年

10 王輝;B7-H4分子在腸癌細(xì)胞和間質(zhì)浸潤淋巴細(xì)胞表達(dá)的臨床意義和作用研究[D];蘇州大學(xué);2012年

，

本文編號：1464546