本文關(guān)鍵詞：重金屬銻通過上調(diào)CtBP2表達(dá)促進(jìn)前列腺癌進(jìn)展機(jī)制　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 銻 金屬效應(yīng)元件 CtBP2 c-Myc

【摘要】：目的明確低劑量重金屬銻暴露后,對前列腺癌進(jìn)展產(chǎn)生的影響,并初步探討其作用機(jī)制。方法采用MTT方法篩選銻暴露PC3細(xì)胞的亞致死劑量,并明確在該劑量下銻對PC3細(xì)胞增殖效應(yīng)的影響;明確銻暴露影響細(xì)胞增殖最顯著劑量后,用該劑量銻處理PC3細(xì)胞,分別通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)以及磷脂酰絲氨酸外翻法分析,研究銻暴露對細(xì)胞遷移能力、侵襲能力及凋亡能力的作用;采用基因轉(zhuǎn)錄組測序的方法,研究低劑量銻暴露PC3細(xì)胞后,基因異常表達(dá)情況;根據(jù)基因測序結(jié)果,分別采用RT-qPCR及Western Blot方法,研究低劑量銻暴露對CtBP2以及下游蛋白轉(zhuǎn)錄翻譯水平的影響;通過比對CtBP2轉(zhuǎn)錄起始上游DNA序列,查詢金屬效應(yīng)元件(MRE)結(jié)構(gòu),構(gòu)建MRE表達(dá)質(zhì)粒后轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,予以低劑量銻暴露后,進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),證明MRE結(jié)構(gòu)與低劑量銻暴露的關(guān)系;建立銻暴露裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃?明確低劑量銻對裸鼠及皮下腫瘤生長的影響,并記錄裸鼠體重及皮下種植瘤體積變化,繪制生長曲線,采用Western Blot方法檢測其腫瘤組織中CtBP2以及下游蛋白表達(dá)水平。結(jié)果低劑量銻暴露可促進(jìn)PC3細(xì)胞增殖,并發(fā)現(xiàn)在銻暴露劑量為8uM時(shí),其促進(jìn)增殖效應(yīng)最為顯著(P0.05);以8uM銻暴露PC3細(xì)胞后,細(xì)胞遷移以及侵襲能力均顯著增加(P0.05),但并不能增加其抗凋亡能力;根據(jù)基因轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,低劑量銻暴露PC3細(xì)胞后,多種基因出現(xiàn)顯著的差異性表達(dá),其中包括CtBP2表達(dá)水平顯著增加(P0.05);根據(jù)RT-qPCR方法驗(yàn)證,低劑量銻暴露后PC3細(xì)胞中CtBP2 mRNA顯著增加,結(jié)合Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,CtBP2以及下游c-Myc、HSPC111蛋白表達(dá)水平顯著增高(P0.05);通過比對CtBP2 DNA序列,證明其轉(zhuǎn)錄起始上游具有金屬效應(yīng)元件(MRE)結(jié)構(gòu),因此CtBP2為MRE調(diào)控的效應(yīng)基因;成功構(gòu)建金屬效應(yīng)元件表達(dá)質(zhì)粒后,雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)結(jié)果證明,低劑量銻可以與該結(jié)構(gòu)發(fā)生相互作用,進(jìn)一步促進(jìn)下游CtBP2表達(dá)增加;建立低劑量銻暴露裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃?對照組與10mg/kg/d組裸鼠皮下種植瘤體積分別為(1344.9±882.8)mm3以及(2612.4±777.5)mm3,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),結(jié)果證實(shí)低劑量銻可顯著促進(jìn)裸鼠種植瘤生長;而通過Western Blot實(shí)驗(yàn)證明在低劑量銻暴露后的裸鼠腫瘤組織中,CtBP2以及下游c-Myc、HSPC111蛋白表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。結(jié)論低劑量銻暴露可顯著影響前列腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為,促進(jìn)前列腺癌進(jìn)展。該作用機(jī)制是低劑量銻與金屬效應(yīng)元件(MRE)相互作用上調(diào)CtBP2表達(dá),并通過調(diào)節(jié)CtBP2-c-Myc信號通路,發(fā)揮其促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。
[Abstract]:Objective to make clear the low dose of heavy metal antimony exposure after impact on the progression of prostate cancer, and to explore its mechanism. Methods MTT method for screening antimony exposure of PC3 cells to sublethal dose, and clarify the influence in the dose effect of antimony on the proliferation of PC3 cells; clear cell proliferation is the most significant effect of antimony exposure dose, with the dose of antimony PC3 cells were treated respectively by cell scratch test, Transwell test and analysis of phosphatidylserine method of antimony exposure on cell migration, invasion and apoptosis ability; using the base method for transcriptome sequencing, the study of low dose of antimony exposed PC3 cells, abnormal expression of genes according to the situation; the sequencing results, using RT-qPCR and Western Blot respectively, the study of low dose exposure to CtBP2 and the downstream effects of antimony protein transcription and translation level of CtBP2 transcription by ratio; Only the upstream DNA sequence query metal response element (MRE) structure, construction of MRE expression plasmid was transfected into HEK293T cells to low dose of antimony after exposure by dual luciferase reporter assay, prove the relationship between MRE structure and low dose exposure to antimony; antimony exposure to establish nude mice model, a clear effect of low dose of antimony growth and in nude mice subcutaneous tumor in nude mice, and record the weight and subcutaneous tumor volume changes, growth curve, the expression of CtBP2 and its downstream protein level in tumor tissue by Western Blot method. The results of low dose exposure to antimony can promote the proliferation of PC3 cells, and found that the antimony exposure dose was 8uM, the proliferation effect of the significant (P0.05); 8uM antimony exposed PC3 cells, cell migration and invasion were significantly increased (P0.05), but did not increase the ability of anti apoptosis; according to gene transcriptome sequencing results, Low dose of antimony exposed PC3 cells, a variety of gene differential expression significantly, including the expression level of CtBP2 increased significantly (P0.05); according to the method of RT-qPCR CtBP2 verification, PC3 cells mRNA increased significantly after exposure to low doses of antimony, combined with the Western Blot results suggest that CtBP2 and c-Myc downstream, the expression level of HSPC111 protein increased significantly (P0.05); by comparing the CtBP2 DNA sequence, prove its upstream transcription start with metal response element (MRE) structure, so the effect of CtBP2 MRE gene; metal element expression plasmid was constructed successfully after the dual luciferase reporter assay results show that low dose of antimony can interact with the structure, to further promote the downstream the expression of CtBP2 increased; establishment of low dose exposure to antimony nude mice model, the control group and 10mg/kg/d group in nude mice tumor is integral (1344.9 + 882.8) mm 3 and (2612.4 + 777.5) mm3, with statistical difference (P0.05). The results confirmed that low dose of antimony can significantly promote the growth of nude mice; and demonstrated in the tumor tissue of mice after exposure to low doses of antimony by Western Blot experiment, CtBP2 and downstream c-Myc, HSPC111 protein expression increased significantly (P0.05). Low dose exposure to antimony can significantly affect the biological behavior of prostate cancer cells, promote the progression of prostate cancer. The mechanism of low-dose and antimony metal response element (MRE) interactions upregulate the expression of CtBP2, and by regulating the CtBP2-c-Myc signaling pathway, play its role in tumor progression.

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25

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本文編號：1401712