本文關鍵詞：miR-711通過CD44調控胃癌細胞EMT　出處：《南華大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:在課題組前期研究的基礎上,進一步研究miR-711對CD44的調控作用及其與胃癌細胞發(fā)生EMT的相關性,初步揭示miR-711對胃癌侵襲轉移的調節(jié)機制。方法:1)使用TargetScan靶基因預測數據庫檢索miR-711與CD44 3'UTR的結合位點,mi R-711 mimics與CD44 3'UTR質粒共轉染293T細胞,熒光素酶報告基因實驗檢測熒光素酶活性,驗證miR-711對CD44的靶向調控作用。2)通過脂質體轉染法將miR-711過表達(miR-711 mimics)、miR-711抑制表達(miR-711 inhibitors)、miRNA空質粒(miRNA-NC)分別轉染人胃癌細胞株MGC-803及SGC-7901,以miRNA空質粒轉染組作為陰性對照組,以空白轉染組作為空白對照組,轉染48小時后在熒光顯微鏡下觀察轉染效率,Western Blot實驗檢測各組CD44蛋白的表達量。3)通過脂質體轉染將CD44干擾質粒(沉默組)、CD44空質粒轉染人胃癌細胞株MGC-803及SGC-7901,以CD44空質粒作為陰性對照組,以空白轉染組作為空白對照組,轉染48小時后在熒光顯微鏡下觀察轉染效率,Western Blot實驗檢測各組CD44蛋白的表達量及EMT相關分子標志蛋白E-cadherin、Vimentin的表達量。結果:1)生物信息學分析結果顯示miR-711與CD44 3'UTR之間存在結合位點;熒光素酶報告基因實驗結果顯示,與對照組相比,miR-711 mimics與CD44 3'UTR熒光素酶報告質粒共轉染細胞后,相對熒光素酶活性減少,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2)人胃癌細胞株MGC-803、SGC-7901瞬時轉染miR-711過表達及抑制表達質粒后,Western Blot結果均顯示,與miR-711 inhibitors組、陰性對照組及空白對照組相比,miR-711 mimics組CD44蛋白表達量減少,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);與陰性對照組及空白對照組相比,miR-711inhibitors組CD44蛋白表達量增多,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);陰性對照組與空白對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。3)人胃癌細胞株MGC-803、SGC-7901瞬時轉染CD44干擾質粒后,Western Blot結果均顯示,與陰性組及空白組相比,沉默組CD44蛋白表達量減少,間質標志物Vimentin蛋白表達量減少,上皮標志物E-cadherin蛋白表達量增多,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),陰性組與空白組相比,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論:1、CD44為miR-711的靶基因之一;2、miR-711可通過下調CD44的表達抑制人胃癌細胞株MGC-803、SGC-7901發(fā)生EMT。
[Abstract]:Objective: Based on previous studies, further study the relationship between the role of miR-711 in regulation of CD44 and EMT in gastric cancer cells, revealed miR-711 regulating the invasion mechanism of metastasis of gastric cancer. Methods: 1) using the TargetScan target genes predicted binding sites of miR-711 and CD44 3'UTR database, MI R-711 mimics and CD44 3'UTR plasmids were transfected into 293T cells. Luciferase reporter assay of luciferase activity, verification of miR-711 targeted regulation of CD44.2) by liposome transfection over expression of miR-711 (miR-711 mimics), miR-711 (miR-711 inhibitors), inhibit the expression of miRNA empty plasmid (miRNA-NC) were transfected into human gastric cancer cell lines MGC-803 and SGC-7901, to miRNA empty plasmid group as negative control group, the blank transfection group as the control group, after 48 hours of transfection efficiency of transfection was observed under fluorescence microscopy, The expression of.3 protein was detected by CD44 Western Blot in each experiment) by liposome transfection of CD44 plasmid CD44 (silent group), empty plasmid were transfected into human gastric cancer cell lines MGC-803 and SGC-7901, with CD44 empty plasmid as a negative control group, the blank transfection group as the control group, after 48 hours of transfection efficiency of transfection was observed under fluorescence under the microscope, each symbol protein E-cadherin detection of CD44 protein expression and Western Blot experiment of EMT related molecules, the expression of Vimentin. Results: 1) analysis showed the presence of binding sites between miR-711 and CD44 3'UTR bioinformatics; luciferase reporter assay results showed that compared with the control group, miR-711 mimics and CD44 3'UTR luciferase reporter plasmid co transfection, luciferase activity decreased, the difference was statistically significant (P0.05).2) in human gastric cancer cell line MGC-803, SGC-7901 transfected miR-711 Overexpression and inhibition of the expression plasmid, Western Blot showed that, miR-711 and inhibitors group, compared with the negative control group and blank control group, miR-711 mimics group, CD44 protein expression decreased, the difference was statistically significant (P0.05); compared with the negative control group and blank control group, miR-711inhibitors group increased the protein expression of CD44, a statistically significant difference (P0.05); compared with the negative control group and blank control group, the difference was not statistically significant (P0.05).3) in human gastric cancer cell line MGC-803, SGC-7901 transient transfection of CD44 plasmid, Western Blot showed that, compared with the negative group and blank group, silent group CD44 protein expression decreased, mesenchymal marker Vimentin protein expression decreased epithelial marker expression of E-cadherin protein increased, the difference was statistically significant (P0.05), compared with the negative group and blank control group, the difference was not statistically significant (P0.05). Conclusion: 1 CD44 is one of the target genes of miR-711; 2, miR-711 can inhibit the human gastric cancer cell line MGC-803 by downregulating the expression of CD44, and SGC-7901 can occur EMT.

【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

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