本文關(guān)鍵詞：三維培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細(xì)胞侵襲、遷移的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《南華大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:建立膀胱癌T24細(xì)胞的三維(three-dimensional,3D)細(xì)胞培養(yǎng)模型;運(yùn)用膀胱癌T24細(xì)胞的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型研究細(xì)胞外微環(huán)境在膀胱癌細(xì)胞表型形成中的作用,以及研究3D細(xì)胞培養(yǎng)模型中T24細(xì)胞Eph A2、MMPs(MMP2和MMP9)以及黏附因子E-cadherin表達(dá)的變化,從而在3D細(xì)胞培養(yǎng)模型中探討膀胱癌T24細(xì)胞黏附、侵襲和遷移方面的分子機(jī)制。方法:先對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)的二維(two-dimensional,2D)細(xì)胞培養(yǎng),消化2D培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)狀況良好的T24細(xì)胞,用被RPMI1640培養(yǎng)基稀釋成不同比例的完全融化的Matrigel基質(zhì)膠重懸細(xì)胞,以及直接用融化的Matrigel膠重懸細(xì)胞或接種T24細(xì)胞于Matrigel膠表面進(jìn)行三維細(xì)胞培養(yǎng),探索并構(gòu)建膀胱癌T24細(xì)胞3D培養(yǎng)模型。構(gòu)建3D培養(yǎng)模型成功后用免疫印記實(shí)驗(yàn)檢測(cè)2D和3D兩種培養(yǎng)條件下Eph A2、MMPs(MMP2和MMP9)以及粘附因子E-cadherin蛋白的表達(dá)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩種不同培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細(xì)胞的侵襲力。結(jié)果:1.T24細(xì)胞不同條件下三維培養(yǎng)情況按不同的比例的培養(yǎng)基稀釋的Matrigel膠培養(yǎng)條件下無(wú)法建立T24細(xì)胞的三維細(xì)胞培養(yǎng)模型;細(xì)胞接種于Matrigel膠表面只有貼近Matrigel膠表面的細(xì)胞才能形成細(xì)胞的3D生長(zhǎng);用Matrigel膠重懸細(xì)胞的培養(yǎng)情況下,在培養(yǎng)過程中看見逐漸形成的無(wú)極性球狀細(xì)胞克隆,并且伴隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞團(tuán)表面逐漸長(zhǎng)出一些絲狀樣的偽足;運(yùn)用低溫下融化的Matrigel膠直接重懸膀胱癌T24細(xì)胞的培養(yǎng)方法能成功構(gòu)建T24細(xì)胞的3D培養(yǎng)模型。2、3D和2D條件下T24細(xì)胞Eph A2分子,MMPs(MMP2和MMP9)和E-cadherin蛋白的表達(dá)水平與侵襲力3D培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細(xì)胞中Eph A2,MMPs(MMP2和MMP9)和E-cadherin的表達(dá)上調(diào),與2D培養(yǎng)模型各蛋白表達(dá)量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3D培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細(xì)胞侵襲潛能較2D培養(yǎng)條件下增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、應(yīng)用再造細(xì)胞外基質(zhì)Matrigel膠可以構(gòu)建膀胱癌T24細(xì)胞的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型。2、膀胱癌T24細(xì)胞在3D細(xì)胞培養(yǎng)條件下可能通過上調(diào)Eph A2、基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs(MMP2和MMP9)以及E-cadherin的表達(dá)從而提高膀胱癌T24細(xì)胞黏附和侵襲的能力。
[Abstract]:鐩殑:寤虹珛鑶，

本文編號(hào)：1385944