本文關鍵詞：三維培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細胞侵襲、遷移的實驗研究　出處：《南華大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:建立膀胱癌T24細胞的三維(three-dimensional,3D)細胞培養(yǎng)模型;運用膀胱癌T24細胞的3D細胞培養(yǎng)模型研究細胞外微環(huán)境在膀胱癌細胞表型形成中的作用,以及研究3D細胞培養(yǎng)模型中T24細胞Eph A2、MMPs(MMP2和MMP9)以及黏附因子E-cadherin表達的變化,從而在3D細胞培養(yǎng)模型中探討膀胱癌T24細胞黏附、侵襲和遷移方面的分子機制。方法:先對膀胱癌T24細胞進行常規(guī)的二維(two-dimensional,2D)細胞培養(yǎng),消化2D培養(yǎng)條件下生長狀況良好的T24細胞,用被RPMI1640培養(yǎng)基稀釋成不同比例的完全融化的Matrigel基質膠重懸細胞,以及直接用融化的Matrigel膠重懸細胞或接種T24細胞于Matrigel膠表面進行三維細胞培養(yǎng),探索并構建膀胱癌T24細胞3D培養(yǎng)模型。構建3D培養(yǎng)模型成功后用免疫印記實驗檢測2D和3D兩種培養(yǎng)條件下Eph A2、MMPs(MMP2和MMP9)以及粘附因子E-cadherin蛋白的表達。Transwell侵襲實驗檢測兩種不同培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細胞的侵襲力。結果:1.T24細胞不同條件下三維培養(yǎng)情況按不同的比例的培養(yǎng)基稀釋的Matrigel膠培養(yǎng)條件下無法建立T24細胞的三維細胞培養(yǎng)模型;細胞接種于Matrigel膠表面只有貼近Matrigel膠表面的細胞才能形成細胞的3D生長;用Matrigel膠重懸細胞的培養(yǎng)情況下,在培養(yǎng)過程中看見逐漸形成的無極性球狀細胞克隆,并且伴隨著培養(yǎng)時間的延長細胞團表面逐漸長出一些絲狀樣的偽足;運用低溫下融化的Matrigel膠直接重懸膀胱癌T24細胞的培養(yǎng)方法能成功構建T24細胞的3D培養(yǎng)模型。2、3D和2D條件下T24細胞Eph A2分子,MMPs(MMP2和MMP9)和E-cadherin蛋白的表達水平與侵襲力3D培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細胞中Eph A2,MMPs(MMP2和MMP9)和E-cadherin的表達上調,與2D培養(yǎng)模型各蛋白表達量比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3D培養(yǎng)條件下膀胱癌T24細胞侵襲潛能較2D培養(yǎng)條件下增強,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1、應用再造細胞外基質Matrigel膠可以構建膀胱癌T24細胞的3D細胞培養(yǎng)模型。2、膀胱癌T24細胞在3D細胞培養(yǎng)條件下可能通過上調Eph A2、基質金屬蛋白酶MMPs(MMP2和MMP9)以及E-cadherin的表達從而提高膀胱癌T24細胞黏附和侵襲的能力。
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本文編號：1385944