本文關鍵詞：PEI和超聲微泡靶向釋藥介導siRNA轉染對人子宮內(nèi)膜癌細胞PpIX積蓄的比較研究　出處：《暨南大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 內(nèi)膜癌裸鼠 原卟啉Ⅸ 5-氨基酮戊酸 siRNA 超聲微泡 聚乙烯亞胺

【摘要】：目的通過建立子宮內(nèi)膜癌動物模型,使用活體小動物成像系統(tǒng),分別檢測使用多聚陽離子聚乙烯亞胺和超聲微泡靶向技術介導si RNA轉染,聯(lián)合小劑量5-氨基酮戊酸后瘤體內(nèi)原卟啉Ⅸ蓄積所致的熒光強度,探討超聲微泡靶向技術代替轉染劑在子宮內(nèi)膜癌光動力學診斷的應用價值。方法1膠原酶消化法分離人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞(emdometrial stromal cell,ESC),并常規(guī)培養(yǎng)。2 MTT法檢測PEI對ESC的增殖毒性。3 N-甲基-N-硝基-N-亞硝基+雌激素組合法誘導ICR小鼠子宮內(nèi)膜原位腫瘤和培養(yǎng)擴增HEC-1-A細胞系后通過接種法構建裸鼠人子宮內(nèi)膜癌移植瘤模型。4活體小動物成像系統(tǒng)檢測系列濃度5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid,ALA)在子宮內(nèi)膜癌動物模型上的作用特點。5以多聚陽離子聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)和超聲輻照脂質(zhì)微泡或單獨或聯(lián)合介導荷瘤裸鼠亞鐵螯合酶(ferrochelatase,FECH)-si RNA轉染,敲減腫瘤組織的FECH,然后分別聯(lián)合瘤體局部注射小劑量ALA。6應用活體小動物成像系統(tǒng)檢測各處理組裸鼠的原卟啉Ⅸ(protoporphyrin,PpⅨ)熒光強度變化。7熒光顯微鏡檢測各處理組裸鼠的瘤體冰凍切片的原卟啉Ⅸ熒光強度變化。8熒光分光光度計半定量檢測各組處理后裸鼠的瘤體的原卟啉Ⅸ的含量變化。9病理檢測FECH-si RNA轉染后的各組裸鼠的非靶向器官。結果1體外實驗PEI對ESC的增殖有毒性作用,IC50為9.461±0.081μg/ml。2實驗9個月時ICR小鼠子宮內(nèi)膜發(fā)生復雜性增生,實驗18個月時子宮內(nèi)膜發(fā)生癌變。31只裸鼠細胞種植后一次全部成瘤,無死亡。3 ICR小鼠子宮內(nèi)膜原位腫瘤模型不適用于活體小動物成像系統(tǒng)熒光檢測。裸鼠人子宮內(nèi)膜癌移植瘤模型適用。4裸鼠單獨ALA給藥6.251mg/Kg劑量以上時才檢測到明顯熒光,但瘤體和周圍組織無區(qū)別;50mg/Kg以上劑量瘤體部位熒光才與周圍部位有明顯區(qū)別。5 si RNA轉染瘤體后,聯(lián)用1mg/Kg ALA,PpⅨ熒光明顯比單用1mg/Kg ALA增強(P0.05),轉染效率:PEI聯(lián)合超聲輻照超聲微泡PEI超聲輻照超聲微泡。6分別使用PEI、超聲輻照超聲微泡、si RNA后(均無轉染作用),各再聯(lián)用1mg/Kg ALA,裸鼠瘤體PpⅨ熒光未比單用1mg/Kg ALA增強(P0.05)。7熒光顯微鏡檢測結果與活體小動物成像系統(tǒng)檢測結果一致。轉染三組和單用1mg/Kg ALA組熒光強度差別明顯(P0.05)。無轉染三組裸鼠瘤體切片和單用1mg/Kg ALA組鏡下熒光強度無區(qū)別(P0.05)。8熒光分光光度計半定量檢測瘤體提取物PpⅨ含量,轉染三組和單用1mg/Kg ALA組差別明顯(P0.05)。9 FECH-si RNA轉染后的各組裸鼠的非靶向器官完整,未見出血、炎性細胞浸潤和水腫情況。結論1體外實驗PEI對正常人ESC有較大毒性作用,IC50為9.461±0.081μg/ml。2 N-甲基-N-硝基-N-亞硝基+雌激素組合誘導ICR小鼠子宮內(nèi)膜原位腫瘤是可行的,但喂養(yǎng)雌激素時間需大于9個月,大于文獻報道時間。3以PEI作為載體,介導FECH-si RNA轉染裸鼠子宮內(nèi)膜癌移植瘤的RNAi技術可下調(diào)FECH表達,增強外源性小量ALA應用時的PpⅨ紅色熒光強度。4超聲輻照脂質(zhì)微泡亦能介導FECH-si RNA轉染裸鼠子宮內(nèi)膜癌移植瘤并下調(diào)FECH的表達,增強外源性小量ALA應用時的PpⅨ紅色熒光強度。但作用不如PEI。5 PEI、超聲輻照脂質(zhì)微泡及si RNA目前常用劑量對體內(nèi)非靶向器官未發(fā)現(xiàn)損傷作用。6超聲輻照脂質(zhì)微泡可在一定程度上替代PEI作用,減少對正常細胞的毒性作用。
[Abstract]:Objective To establish an animal model of endometrial carcinoma , and to detect the fluorescence intensity of the nude mice by using polycationic polyethylene imine ( PEI ) and ultrasonic microbubble targeting technique . It is feasible to induce the in situ tumor of ICR mice with IC50 of 9.461 鹵 0.081 渭g / ml . 2 N - methyl - N - nitro - N - nitrite + estrogen combination can downregulate the expression of FECH and enhance the expression of FECH .

【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33

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本文編號：1373285