發(fā)布時(shí)間：2017-12-26 18:37

  本文關(guān)鍵詞：大腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的放射效應(yīng)與大腸癌細(xì)胞相互影響的研究　出處：《蘇州大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的初步研究腫瘤細(xì)胞對(duì)大腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CCAFs)放射效應(yīng)的影響,以及輻照后大腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞對(duì)大腸癌細(xì)胞的影響。方法采用組織塊培養(yǎng)法,將組織塊周爬出的成纖維細(xì)胞消化,培養(yǎng)至3-4代,免疫熒光鑒定后,與大腸癌細(xì)胞共培養(yǎng)并分四組,依次為①非共培養(yǎng)0Gy組②共培養(yǎng)0Gy組③共培養(yǎng)4Gy組④非共培養(yǎng)4Gy組,處理各組后,檢測(cè)CCAFs的生長(zhǎng)、凋亡、自噬以及衰老等放射反應(yīng)。收集CCL-244/CCAFs共培養(yǎng)(CCAFs組)以及CCL-224/輻照CCAFs共培養(yǎng)(RCCAFs組)條件培養(yǎng)基,并以無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的CCL-224細(xì)胞作為空白組,檢測(cè)各組腫瘤細(xì)胞CCL-244的克隆、增殖、生長(zhǎng)、遷移能力。結(jié)果CCAFs和CNFs都表達(dá)成纖維細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin;CCAFs表現(xiàn)為α—SMA表達(dá)陽(yáng)性,而CNFs幾乎不表達(dá)α—SMA;無論共培養(yǎng)與否,輻照組CCAFs的生長(zhǎng)活力(OD值)均小于非輻照組(P0.05),而進(jìn)行4Gy輻照后,共培養(yǎng)4Gy組與非共培養(yǎng)4Gy組的生長(zhǎng)活力在第2、4天無明顯差別(P0.05),但在第6天時(shí),兩者OD值出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,表現(xiàn)為共培養(yǎng)4Gy組的OD值高于非共培養(yǎng)4Gy組,未輻照的CCAFs的生長(zhǎng)活力(OD值)是逐漸增加的,而接受輻射后,無論在共培養(yǎng)組還是非共培養(yǎng)組與否,CCAFs的生長(zhǎng)活力(OD值)幾乎沒有變化;與大腸癌細(xì)胞(HCT及CCL)共培養(yǎng)的CCAFs,經(jīng)4Gy輻照后,凋亡率明顯增加(P0.01),非培養(yǎng)4Gy組CCAFs的凋亡率高于與共培養(yǎng)4Gy組(P0.01);非共培養(yǎng)4Gy組CCAFs經(jīng)過輻照后,出現(xiàn)明顯的染色反應(yīng),細(xì)胞數(shù)目變少,但細(xì)胞體積變大,衰老染色深,而在與大腸癌細(xì)胞共培養(yǎng)的CCAFs經(jīng)過4Gy輻照,亦出現(xiàn)染色反應(yīng),但染色細(xì)胞數(shù)量少,相對(duì)染色較淺(p0.01),且未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;通過對(duì)自噬相關(guān)蛋白Atg-5、Atg-7和Beclin-1表達(dá)的Western blot檢測(cè),可見經(jīng)4Gy輻照后,各組CCAFs的自噬有關(guān)蛋白表達(dá)增加,輻照后,非共培養(yǎng)4Gy組的CAFs的自噬水平明顯高于共培養(yǎng)組。RCCAFs組的腫瘤細(xì)胞克隆增殖比為0.6589±0.009493,高于CCAFs組(0.6378±0.01365),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),兩組均明顯高于空白組(0.5200±0.006939),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);RCCAFs組反應(yīng)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)能力的吸光度值(OD值)在第3天和第5天分別為0.3502±0.1278和0.6571±0.1351,CCAFs組分別為0.3234±0.00986和0.7116±0.1259,均明顯高于空白組(0.2258±0.00536)和(0.4608±0.1382),差距具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),但在第3天RCCAFs組的OD值高于CCAFs組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),第5天RCCAFs組的OD值低于CCAFs組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007);RCCAFs組腫瘤細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)為0.4203±0.01308,低于CCAFs組(0.4491±0.01916),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),兩組均明顯高于空白組(0.3381±0.02580),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);RCCAFs組的遷移率在48h為(39.33±3.80)%,CCAFs組為(40.12±4.04)%,兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);均高于空白組(21.13±2.89)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論CCAFs對(duì)輻射并不具有超強(qiáng)耐受力,4Gy單次輻照即可對(duì)CCAFs產(chǎn)生生長(zhǎng)抑制、凋亡增加、明顯衰老和自噬等效應(yīng);大腸癌細(xì)胞對(duì)CCAFs具有一定放射保護(hù)作用。4Gy單次輻射并未影響CCAFs對(duì)大腸癌CCL-224促生長(zhǎng)、增殖與遷移能力。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of tumor cells on the radiation effects of colorectal cancer associated fibroblasts (CCAFs) and the effect of colorectal cancer related fibroblasts on colorectal cancer cells after irradiation. Methods using tissue culturing method, tissue fibroblasts digested into block weeks climbed out, cultured 3-4, immunofluorescence, and colorectal cancer cells were cultured and divided into four groups, followed by non 0Gy co culture group of co culture group 0Gy 4Gy co culture group and the non 4Gy co culture group after each treatment, the detection of CCAFs, growth, apoptosis, autophagy and aging radiation reaction. CCL-244/CCAFs co culture (group CCAFs) and CCL-224/ irradiated CCAFs co culture (RCCAFs group) conditioned medium were collected, and CCL-224 cells cultured in serum-free medium were used as blank group. The ability of cloning, proliferation, growth and migration of tumor cells in each group was detected. The results of CCAFs and CNFs expression of fibroblast marker Vimentin; CCAFs showed a - SMA positive expression, and there was almost no expression of CNFs alpha - SMA; both co culture or not, the viability of the irradiation group CCAFs (OD) were less than that of non irradiated group (P0.05), and after 4Gy irradiation, 4Gy co culture the co culture group and non growth activity 4Gy group had no significant difference in the second, fourth day (P0.05), but on the sixth day, there was a significant difference between the two values, performance for the OD value of 4Gy group was higher than that of non 4Gy co culture group co culture, the growth vigor of unirradiated CCAFs (OD) is gradually increasing, and accept after irradiation, both in the co cultured group and non coculture group or not, the growth activity of CCAFs (OD) almost no change; and colorectal cancer cells (HCT and CCL) were cultured by CCAFs after 4Gy irradiation, the apoptosis rate was obviously increased (P0.01), non training group 4Gy CCAFs the apoptosis rate was higher than that of co culture with 4Gy Group (P0.01); co culture group 4Gy CCAFs after irradiation, appear obvious staining reaction, cell number reduced, but the cell volume change, aging dyeing depth, while in coculture with colon cancer cells CCAFs after 4Gy irradiation, there were staining reaction, but staining small numbers of cells, the staining was relatively shallow (P0.01), and no significant morphological changes; the autophagy related protein Atg-5, Atg-7 and Beclin-1 expression of Western blot detection, visible 4Gy irradiation, the expression levels of CCAFs protein increased autophagy, autophagy after irradiation, non co culture group 4Gy CAFs was significantly higher than that in the co culture group. RCCAFs group of tumor cell clone proliferation ratio was 0.6589 + 0.009493, higher than that of group CCAFs (0.6378 + 0.01365), but the difference was not statistically significant (P0.05), the two groups were significantly higher than the control group (0.5200 + 0.006939), the difference was statistically significant (P0.01); RCCAFs group was absorbance of tumor cell growth ability (the value of OD) were 0.3502 + 0.1278 and 0.6571 + 0.1351 in third days and fifth days, CCAFs group were 0.3234 + 0.00986 and 0.7116 + 0.1259, was significantly higher than the control group (0.2258 + 0.00536) and (0.4608 + 0.1382), with significant difference (P0.01), but in third days the OD value of RCCAFs group was higher than that of the CCAFs group had no significant difference (P0.05), the OD value of fifth days RCCAFs group than in the CCAFs group had significant difference (P=0.007); RCCAFs group of tumor cell proliferation index (PI) was 0.4203 + 0.01308, lower than that of group CCAFs (0.4491 + 0.01916), the difference was not statistically significant (P0.05, two) Group was significantly higher than the control group (0.3381 + 0.02580), the difference was statistically significant (P0.05); migration rate of RCCAFs group at 48h (39.33 + 3.80)%, group CCAFs (40.12 + 4.04)%, there was no significant difference between the two groups (P0.05); higher than the control group (21.13 + 2.89%), the difference was statistically significant (P0.01). Conclusion CCAFs does not have strong tolerance to radiation. 4Gy can increase growth inhibition, increase apoptosis, senescence and autophagy effect on CCAFs by single irradiation. Colorectal cancer cells have a certain radioprotective effect on CCAFs. Single radiation of 4Gy did not affect the growth, proliferation and migration of CCAFs on colorectal cancer CCL-224.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34

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10 陳s

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