本文關(guān)鍵詞：啟膈散增加食管癌EC9706細(xì)胞對順鉑敏感性機制研究　出處：《河南中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的通過研究啟膈散含藥血清聯(lián)合順鉑對人食管癌細(xì)胞EC9706的增殖、凋亡、周期及相關(guān)基因miR-21 PDCD4 PTEN及蛋白表達(dá)的調(diào)控作用,初步探討啟膈散增加人食管癌EC9706細(xì)胞對順鉑敏感性機制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法制備啟膈散含藥血清,用不同濃度的含藥血清與同濃度的順鉑聯(lián)合作用于EC9706細(xì)胞48h,用MTT法篩選出最有效的含藥血清濃度(5%含藥血清)。分別用5%含藥血清與順鉑、5%對照血清與順鉑、5%含藥血清、5%對照血清作用于EC9706細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測其對EC9706細(xì)胞凋亡、周期的影響;應(yīng)用PCR檢測相關(guān)基因miR-21、PDCD4、PTEN表達(dá)情況;應(yīng)用Western-blot法檢測相關(guān)蛋白PDCD4、PTEN表達(dá)水平。結(jié)果1.10%、5%、2.5%含藥血清與順鉑聯(lián)合應(yīng)用時都有協(xié)同作用,其中5%含藥血清與順鉑協(xié)同增效作用最為顯著。2.EC9706細(xì)胞經(jīng)不同濃度藥物作用48h后,與對照組相比較,除5%含藥血清組外(P0.05),順鉑低濃度、高濃度組、含藥血清聯(lián)合高濃度順鉑、含藥血清聯(lián)合低濃度順鉑組,細(xì)胞凋亡率均升高,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與單獨5%含藥血清組比較,聯(lián)合低濃度順鉑組與高濃度順鉑組細(xì)胞的凋亡率也有升高(P0.05),分別于同濃度的順鉑組比較,含藥血清聯(lián)合低濃度順鉑組凋亡率升高(P0.05),聯(lián)合高濃度組沒有差異(P0.05)。3.EC9706細(xì)胞經(jīng)不同濃度藥物作用48h后,與對照血清比較,加入順鉑后S期的細(xì)胞比例均增加(P0.05),其中0.5μg/ml順鉑組升高最為顯著。含藥血清聯(lián)合高濃度順鉑比單獨使用同濃度順鉑S期比例增加,G2期降低(P0.05),有統(tǒng)計學(xué)意義;含藥血清聯(lián)合低濃度順鉑與單獨使用同濃度順鉑相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4.與5%對照血清組比較,其余各組miR-21相對定量都有升高(P0.05);無論高濃度順鉑組還是低濃度順鉑組,聯(lián)合含藥血清后,miR-21相對定量均比單用下降(P0.05)。表-5結(jié)果示:與5%對照血清組相比,除5%含藥血清PDCD4表達(dá)量下降外,其余各組表達(dá)量升高(P0.05);低濃度順鉑聯(lián)合血清組比其單獨使用PDCD4表達(dá)量升高(P0.05),高濃度順鉑聯(lián)合血清組比其單獨使用PDCD4表達(dá)量則下降(P0.05);與5%對照血清組相比,0.5μg/ml順鉑組與5%含藥血清組PTEN表達(dá)量降低,其余組均升高(P0.05),順鉑聯(lián)合血清兩組均比單獨順鉑兩組PTEN表達(dá)量高(P0.05)。5.與對照組相比,各組PDCD4蛋白表達(dá)量升高P0.05;高濃度順鉑聯(lián)合含藥血清組比單用高順鉑組PDCD4蛋白表達(dá)量升高(P0.05),低濃度順鉑的兩組變化不明顯(P0.05);兩個濃度順鉑聯(lián)合含藥血清時PTEN的表達(dá)量均高于單獨使用順鉑(P0.05)。結(jié)論1.啟膈散聯(lián)合順鉑應(yīng)用對人食管癌細(xì)胞株EC9706抑制有協(xié)同作用。2.啟膈散能過提高順鉑誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞株EC9706凋亡的作用和S期的阻滯率。3.啟膈散聯(lián)合順鉑可以下調(diào)miR-21表達(dá),上調(diào)靶基因PDCD4mRNA與PTEN mRNA及其蛋白的表達(dá)。啟膈散能夠增加EC9706對順鉑的敏感性,而且這一機制可能是通過miR-21與其介導(dǎo)調(diào)控的其下游的靶基因PDCD4mRNA與PTEN共同參與完成的。
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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