發(fā)布時間：2017-12-25 21:10

  本文關(guān)鍵詞：鹽酸普魯卡因?qū)θ税籽L-60細(xì)胞ID4基因甲基化狀態(tài)及細(xì)胞增殖的影響　出處：《桂林醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:研究鹽酸普魯卡因?qū)θ思毙运柘蛋籽?AML)細(xì)胞株HL-60細(xì)胞DNA結(jié)合抑制因子4(ID4)基因甲基化狀態(tài)及細(xì)胞增殖的影響,探尋白血病基因治療的潛在靶點。方法:體外培養(yǎng)人AML細(xì)胞株HL-60細(xì)胞,使用不同濃度的鹽酸普魯卡因處理細(xì)胞,應(yīng)用CCK8法檢測鹽酸普魯卡因作用24h、48h、72h后HL-60細(xì)胞的增殖變化;采用甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)法測定鹽酸普魯卡因作用48h后HL-60細(xì)胞ID4基因甲基化程度的改變;實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢測鹽酸普魯卡因作用48h后細(xì)胞ID4基因mRNA表達(dá)水平的變化;免疫印跡(WB)法測定鹽酸普魯卡因作用48h后細(xì)胞ID4蛋白表達(dá)情況的變化。使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù),方差齊者比較采用獨立樣本t檢驗或單因素方差分析,方差不齊者采用非參數(shù)檢驗。結(jié)果:(1)CCK8法檢測結(jié)果顯示:不同濃度的鹽酸普魯卡因(2mmol/L、4mmol/L、6mmol/L)處理HL-60細(xì)胞24h后抑制率分別為8.39%、16.14%、20.74%;48h后抑制率分別為24.20%、41.41%、50.74%;72h后抑制率分別為39.03%、50.48%、65.27%。各實驗組細(xì)胞抑制率與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。相同作用時間下,抑制率隨藥物濃度增加而增大,各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);相同濃度下,抑制率隨作用時間的延長而增大,且在48h時抑制率增加的幅度最大,各作用時間組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)MS-HRM法檢測結(jié)果顯示:對照組HL-60細(xì)胞的ID4基因啟動子區(qū)域CPG島處于高甲基化狀態(tài),經(jīng)鹽酸普魯卡因作用48h后,ID4基因啟動子區(qū)域CPG島的甲基化程度降低,且在2-6mmol/L范圍內(nèi)隨藥物濃度增加而進(jìn)一步下降。(3)qPCR檢測結(jié)果顯示:經(jīng)不同濃度的鹽酸普魯卡因處理HL-60細(xì)胞48h后,細(xì)胞ID4基因mRNA的表達(dá)量較對照組明顯增加,在2-6mmol/L的范圍內(nèi)隨藥物濃度增加而不斷增加,且各組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(4)WB檢測結(jié)果顯示:未經(jīng)鹽酸普魯卡因處理的HL-60細(xì)胞ID4蛋白的相對表達(dá)水平為0.34,而經(jīng)不同濃度的鹽酸普魯卡因作用48h后細(xì)胞ID4蛋白的相對表達(dá)量分別為0.44、0.56、1.01,各濃度組與對照組之間及各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)鹽酸普魯卡因能夠抑制體外培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞增殖,且在2-6mmol/L范圍內(nèi)呈劑量依賴性,在24-72h范圍內(nèi)呈時間依賴性。(2)鹽酸普魯卡因可逆轉(zhuǎn)ID4基因啟動子區(qū)域CPG島的甲基化并恢復(fù)基因活性,從而上調(diào)ID4基因mRNA和蛋白的表達(dá),并在2-6mmol/L范圍內(nèi)呈劑量依賴性。(3)鹽酸普魯卡因的去甲基化作用可能是其抑制白血病HL-60細(xì)胞增殖的重要分子機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙瑜;靖_g;薄劍;王書紅;王全順;李紅華;于力;;Id4基因甲基化在惡性淋巴瘤中的檢測意義[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2008年02期

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本文編號：1334442