本文關(guān)鍵詞：雌激素通過(guò)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶—鈣蛋白酶—局部黏著斑激酶通路抑制乳腺癌細(xì)胞失巢凋亡　出處：《貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的本研究旨在觀察17β-雌二醇(E2)對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞抗失巢凋亡能力的影響及鈣激活蛋白酶(CANP)-局部黏著斑激酶(FAK)通路在其中的介導(dǎo)作用,探討雌激素促進(jìn)乳腺癌惡性進(jìn)展的信號(hào)機(jī)制,為探尋乳腺癌的高效治療方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).實(shí)驗(yàn)方法以雌激素受體(ER)陽(yáng)性MCF-7乳腺癌細(xì)胞為研究模型(激素敏感性細(xì)胞MCF-10A,及激素非敏感性MDA-MB-231作為對(duì)照),聚甲基丙烯酸羥乙基酯(poly-Hema)涂層培養(yǎng)細(xì)胞誘導(dǎo)失巢凋亡,E2刺激及MEK和FAK抑制劑預(yù)處理細(xì)胞,通過(guò)蛋白印跡法觀察蛋白表達(dá)變化及ERK和FAK磷酸化情況,MTT法及臺(tái)盼藍(lán)染色/細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞存活力,Hoechst熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)E2增強(qiáng)MCF-7細(xì)胞抗失巢凋亡能力及ERK/FAK磷酸化。與細(xì)胞貼壁培養(yǎng)比較,poly-Hema懸浮培養(yǎng)可明顯降低MCF-7細(xì)胞的存活率;以E2處理懸浮培養(yǎng)細(xì)胞24 h,發(fā)現(xiàn)E2可明顯提高細(xì)胞存活率及減少細(xì)胞凋亡;E2還能提高細(xì)胞在細(xì)胞致死劑嘌呤霉素作用下的細(xì)胞存活力。此外,E2處理可增強(qiáng)模型細(xì)胞ERK和FAK的磷酸化。2)U0126及Calpeptin抑制E2誘導(dǎo)的ERK/FAK磷酸化及抗失巢凋亡效應(yīng)。以E2處理模型MCF-7細(xì)胞12 h,發(fā)現(xiàn)以MEK抑制劑U0126預(yù)處理細(xì)胞,則E2誘導(dǎo)的ERK和FAK磷酸化均受到顯著抑制,同時(shí)E2的抗失巢凋亡作用也明顯減弱;采用CANP抑制劑預(yù)處理模型細(xì)胞可明顯抑制ERK磷酸化及E2的抗失巢凋亡效應(yīng)。3)乳腺腫瘤細(xì)胞CANP活性明顯高于正常乳腺上皮細(xì)胞。MCF-7細(xì)胞在E2或表皮生長(zhǎng)因子(epithelial growth factor,EGF)的作用下,其胞內(nèi)CANP易于被激活,并可被CANP抑制劑阻斷;在MBDA-MB-231,CANP對(duì)EGF刺激也很敏感。相反,MCF-10A細(xì)胞內(nèi)CANP對(duì)E2或EGF刺激均不敏感。4)FAK抑制劑抑制E2誘導(dǎo)的ERK磷酸化及抗失巢凋亡效應(yīng)。采用FAK抑制劑(FAK inhibitor,FI)預(yù)處理模型細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)FI不僅可抑制FAK磷酸化,還可阻止ERK的磷酸化。FAK抑制劑可明顯減弱E2的抗凋亡作用,使細(xì)胞存活率明顯降低。結(jié)論1)雌激素能夠明顯提高乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抗失巢凋亡能力;2)雌激素的抗失巢凋亡效應(yīng)與激活胞內(nèi)ERK/CANP/FAK信號(hào)通路活動(dòng)有關(guān);3)乳腺癌細(xì)胞CANP活性增高及CANP/FAK與ERK之間的正反饋環(huán)路可能增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)雌激素刺激的反應(yīng)性。
【學(xué)位授予單位】：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 汪冉冉;劉東波;羅婷;;雌激素饑餓增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡[J];華西醫(yī)學(xué);2009年04期

2 黃自明,張林,袁惠玲,馮永東,陶德定,吳亞群;他莫昔芬誘導(dǎo)體內(nèi)外雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞凋亡的周期特異性研究[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2005年04期

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本文編號(hào)：1332284