β-catenin在不同骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)TE85細(xì)胞遷移、侵襲及成骨分化的影響
本文關(guān)鍵詞:β-catenin在不同骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)TE85細(xì)胞遷移、侵襲及成骨分化的影響 出處:《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文
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【摘要】:目的檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路中關(guān)鍵因子β-catenin在不同骨肉瘤細(xì)胞143B、MG63、TE85中的表達(dá)情況,并以TE85細(xì)胞為目的細(xì)胞進(jìn)行研究,檢測(cè)過表達(dá)β-catenin對(duì)TE85細(xì)胞遷移、侵襲和成骨分化的影響。方法(1). RT-PCR、Western Blot分別檢測(cè)不同骨肉瘤143B、MG63、 TE85田胞中β-catenin mRNA及蛋白的表達(dá)情況;(2).通過重組腺病毒(Adβ-catenin)介導(dǎo)的方法在骨肉瘤TE85細(xì)胞中過表達(dá)β-catenin,劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)過表達(dá)β-catenin對(duì)TE85細(xì)胞遷移和侵襲的影響;(3).通過重組腺病毒(Adβ-catenin和AdBMP9)介導(dǎo)的方法在骨肉瘤TE85細(xì)胞中單獨(dú)和聯(lián)合過表達(dá)β-catenin及BMP9, RT-PCR檢測(cè)TE85細(xì)胞P-catenin及BMP9 mRNA的表達(dá)情況,熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性。(4).TE85細(xì)胞經(jīng)Adβ-catenin和AdBMP9誘導(dǎo)后,通過RT-PCR檢測(cè)骨鈣蛋白(Osteocalcin, OC)和骨橋蛋白(Osteopontin, OPN)以及骨保護(hù)素(Osteoprotegerin, OPG)基因mRNA的表達(dá),并利用Western Blot檢測(cè)OC及OPN的蛋白表達(dá)水平;堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性變化檢測(cè)早期成骨指標(biāo),茜素紅染色檢測(cè)晚期成骨指標(biāo)鈣鹽沉積情況。結(jié)果(1).上述3種細(xì)胞中,TE85細(xì)胞β-catenin mRNA及蛋白的表達(dá)相對(duì)較低;(2).感染Adβ-catenin的TE85細(xì)胞遷移率和侵襲能力明顯低于對(duì)照組(P0.05);(3). Adβ-catenin與AdBMP9能顯著增加TE85細(xì)胞外源性表達(dá)β-catenin與BMP9(P0.05), Adβ-catenin能明顯增強(qiáng)β-catenin/Tcf4的相對(duì)活性(P0.05);(4). Adβ-catenin與AdBMP9單獨(dú)誘導(dǎo)TE85細(xì)胞ALP活性增加程度有限,對(duì)OPG mRNA及OC、OPN的mRNA和蛋白表達(dá)以及鈣鹽沉積無明顯作用,而聯(lián)合誘導(dǎo)后上述早、晚期各項(xiàng)相關(guān)成骨指標(biāo)與對(duì)照組比較均顯著增強(qiáng)(P0.05)。結(jié)論β-catenin在TE85細(xì)胞中的內(nèi)源性表達(dá)相對(duì)較低,過表達(dá)β-catenin能抑制TE85細(xì)胞的遷移、侵襲能力,過表達(dá)β-catenin不能單獨(dú)誘導(dǎo)TE85細(xì)胞成骨分化,而聯(lián)合BMP9誘導(dǎo)后,成骨分化作用明顯增強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R738
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本文編號(hào):1329983
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