本文關(guān)鍵詞：新型喜樹堿類似物FL118對順鉑耐藥非小細(xì)胞肺癌抑制作用的研究　出處：《青島大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:通過觀察新型喜樹堿類似物FL118對順鉑耐藥非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞系的增殖、遷移和順鉑耐藥的抑制作用,探討FL118對抗耐順鉑腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制,為FL118臨床治療順鉑耐藥肺癌提供理論支持。方法:常規(guī)培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和其順鉑耐藥細(xì)胞A549/DDP,通過MTT法檢測A549/DDP的耐藥指數(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測耐藥蛋白P-gp、ERCC1的表達(dá),從而驗(yàn)證A549/DDP細(xì)胞的順鉑耐藥性。實(shí)驗(yàn)分組:A549組,A549/DDP組,A549順鉑處理組,A549/DDP順鉑處理組,A549+FL118處理組,A549/DDP+FL118處理組。MTT法檢測各組細(xì)胞存活率;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移與侵襲能力;實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot方法分別檢測耐藥相關(guān)蛋白P-gp、ERCC1、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)免疫標(biāo)志E-cadherin、Vimentin以及Survivin的m RNA和蛋白的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化。結(jié)果:1.與A549細(xì)胞相比,A549/DDP細(xì)胞形態(tài)呈長梭形、排列呈旋渦狀或放射狀,類似纖維細(xì)胞;MTT檢測A549/DDP耐藥指數(shù)為76.9(p0.05),免疫細(xì)胞化學(xué)顯示A549/DDP細(xì)胞中耐藥蛋白P-gp、ERCC1表達(dá)顯著增高,同時(shí)上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)減弱,間質(zhì)標(biāo)志物vimentin表達(dá)增強(qiáng),證實(shí)A549/DDP的順鉑耐藥性,而且具有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化特性。2.MTT方法發(fā)現(xiàn)FL118對A549/DDP細(xì)胞的生長有明顯抑制作用,且抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間和濃度依賴性,100n M FL118作用48h后對A549/DDP細(xì)胞抑制作用顯著強(qiáng)于A549細(xì)胞(p0.05)。3.劃痕實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)FL118作用后肺癌細(xì)胞的遷移能力下降(p0.05),Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FL118明顯抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲能力(p0.05)。4.免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)及Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,耐藥細(xì)胞A549/DDP Survivin蛋白表達(dá)較A549顯著,FL118作用后,耐藥細(xì)胞中Survivin表達(dá)降低,并且耐藥蛋白P-gp、ERCC1表達(dá)也明顯降低;E-cadherin表達(dá)增強(qiáng),Vimentin表達(dá)下降。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,FL118可抑制Survivin基因表達(dá),但對耐藥相關(guān)基因MDR1/P-gp、ERCC1無抑制作用,而E-cadherin、Vimentin m RNA的表達(dá)與蛋白表達(dá)結(jié)果相一致。6.流式細(xì)胞術(shù)檢測FL118作用后,A549及A549/DDP細(xì)胞均阻滯在S期(P0.05)。結(jié)論:FL118通過靶向抑制Survivin的表達(dá),使順鉑耐藥A549/DDP細(xì)胞周期被阻滯在S期,抑制耐藥細(xì)胞的生長,且其抑制作用呈濃度-時(shí)間依賴性;FL118不僅明顯抑制順鉑耐藥細(xì)胞的運(yùn)動侵襲能力,而且可以通過下調(diào)耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)增強(qiáng)耐藥細(xì)胞對FL118的敏感性,進(jìn)一步明確了FL118較強(qiáng)的對抗耐藥和侵襲性腫瘤作用。同時(shí),FL118可以逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化表型,提示FL118對抗耐藥性腫瘤作用機(jī)制新的思路。本研究為FL118抗癌機(jī)制的研究提供新思考,也為FL118臨床治療順鉑耐藥性肺癌提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1328632