本文關(guān)鍵詞：中藥單體小檗堿克服慢性粒細(xì)胞白血病對(duì)伊馬替尼的耐藥性及其機(jī)制研究　出處：《暨南大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：慢性粒細(xì)胞白血病(Chronic Myelogenous leukemia,CML)是一種以粒系增生為主的造血干細(xì)胞惡性增殖性疾病。該病中9號(hào)染色體與22號(hào)染色體發(fā)生了易位,形成費(fèi)城染色體(Ph)。費(fèi)城染色體編碼融合蛋白BCR-ABL,可以調(diào)節(jié)細(xì)胞體內(nèi)多條信號(hào)通路,特別是激活酪氨酸激酶信號(hào)通路可以增加白血病細(xì)胞的惡性行為。伊馬替尼(Imatinib.ST1571)可以競爭性的結(jié)合ABL上的ATP結(jié)合位點(diǎn),是第一個(gè)用于CML治療的酪氨酸激酶抑制劑,對(duì)于CML的治療具有革命性的意義。然而,隨著疾病的發(fā)展,一些患者中出現(xiàn)了對(duì)伊馬替尼耐藥的現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn)伊馬替尼治療的耐藥性主要是因?yàn)锽CR-ABL融合蛋白的ABL激酶位點(diǎn)區(qū)域發(fā)生了突變,進(jìn)而使Imatinib不能與之結(jié)合。而非BCR-ABL改變的耐藥約占20%。在這些BCR-ABL蛋白激酶區(qū)域突變中,T315I突變引起耐藥占到了15%~20%。小檗堿(berberine)為黃連、黃柏等多種植物中所含的一種生物堿,具有抗菌消炎,止瀉,誘導(dǎo)凋亡和抗癌的效果。近年也發(fā)現(xiàn)其具有抗白血病活性�；诒菊n題前期研究,發(fā)現(xiàn)小檗堿具有克服CML的耐藥性的作業(yè),但確切的機(jī)制還不清楚。本課題首先探究小檗堿對(duì)CML細(xì)胞的抑制效應(yīng),用不同濃度的小檗堿處理對(duì)Imatinib敏感的人類CML細(xì)胞(K562、BaF3-P210)和耐藥性細(xì)胞株(BaF3-P210-T315I和SFO2細(xì)胞),并與Imatinib對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,小檗堿在5μM濃度處理24h時(shí),不僅可以抑制敏感K562和BaF3-P210細(xì)胞活力,也顯著抑制耐藥的BaF3-P210-T315I和SFO2細(xì)胞細(xì)胞活力。伊馬替尼和小檗堿聯(lián)合作用于敏感K562、BaF3-P210和耐藥的BaF3-P210-T315I,實(shí)驗(yàn)顯示,小檗堿可以增加K562、BaF3-P210對(duì)伊馬替尼敏感性和克服BaF3-P210-T315I細(xì)胞對(duì)伊馬替尼的耐藥性性。同時(shí)還檢測了小檗堿對(duì)耐藥細(xì)胞細(xì)胞集落能力(colony)的影響,結(jié)果顯示,小檗堿可以有效抑制耐藥株BaF3-P210-T315I細(xì)胞的集落形成,而Imatinib不能顯著抑制BaF3-P210-T315I細(xì)胞的集落形成;小檗堿也可以有效抑制BaF3-P210細(xì)胞的集落形成。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),小檗堿顯著降低BaF3-P210-T315I和BaF3-P210細(xì)胞系中的BCR-ABL蛋白水平,而對(duì)BCR-ABL的mRNA水平無顯著改變,因而可以認(rèn)為小檗堿降解BCR-ABL融合蛋白。最后,為了探索小檗堿降解BCR-ABL蛋白的機(jī)制,我們檢測了小檗堿處理細(xì)胞中的自噬現(xiàn)象和泛素化水平。結(jié)果顯示,小檗堿處理后細(xì)胞中沒有發(fā)生自噬現(xiàn)象,而在小檗堿處理BaF3-P210細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)小檗堿可以增加細(xì)胞的泛素化水平。進(jìn)而采用針對(duì)BCR-ABL免疫沉淀(IP),使用泛素抗體Western blot檢測發(fā)現(xiàn)BCR-ABL蛋白發(fā)生了泛素化。采用Studio 4.1軟件對(duì)小檗堿與BCR-ABL蛋白進(jìn)行分子對(duì)接模擬,結(jié)果顯示BCR-ABL共有3部位(SH2區(qū)域、蛋白激酶區(qū)域和F-肌動(dòng)蛋白連接區(qū)域)可以與小檗堿蛋白分子對(duì)接,并在對(duì)接處序列發(fā)現(xiàn)賴氨酸,提示泛素化位點(diǎn)的存在。因此,小檗堿通過泛素化的機(jī)制降解BCR-ABL蛋白進(jìn)而克服CML的耐藥性。小檗堿有可能作為耐藥CML的潛在靶向治療藥物。同時(shí),也為中藥現(xiàn)代化提供可能的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.72

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1328311