本文關(guān)鍵詞：TACC3表達(dá)對(duì)膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞系遷移和侵襲的影響　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:檢測(cè)轉(zhuǎn)錄相關(guān)酸性卷曲蛋白3(TACC3)在膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞系中的表達(dá)情況,同時(shí)探討下調(diào)TACC3表達(dá)水平通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的發(fā)生對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞遷移和侵襲的影響。方法:采用Western blot方法檢測(cè)膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞系和膀胱上皮永生化細(xì)胞SV-HUC-1細(xì)胞系TACC3蛋白的表達(dá)情況;通過體外構(gòu)建shRNA表達(dá)載體并通過qPCR篩選有效靶點(diǎn),用TACC3-shRNA相關(guān)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細(xì)胞系來(lái)下調(diào)TACC3水平;采用Western Blot和熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證干擾效果,同時(shí)檢測(cè)TACC3和EMT相關(guān)mRNA和蛋白的表達(dá)水平,細(xì)胞劃痕試驗(yàn)計(jì)算細(xì)胞24h修復(fù)率,Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲情況。結(jié)果:在膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞系及膀胱上皮永生化細(xì)胞SV-HUC-1細(xì)胞系兩組細(xì)胞系中,Western Blot結(jié)果表明TACC3蛋白相對(duì)灰度值分別為:0.22±0.02、0.99±0.05。膀胱癌T24細(xì)胞系中TACC3蛋白的表達(dá)量明顯高于膀胱上皮永生化細(xì)胞SV-HUC-1細(xì)胞系,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。體外構(gòu)建4個(gè)TACC3-shRNA干擾質(zhì)粒,qPCR檢測(cè)并篩選TACC3的mRNA表達(dá),獲得了對(duì)TACC3干擾效率達(dá)到90.5%的pYr-LVX-TACC3-shRNA質(zhì)粒;下調(diào)TACC3水平后,熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)TACC3和EMT相關(guān)(E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9)的mRNA變化情況,結(jié)果示:EMT相關(guān)指標(biāo)(E-cadherin、Vimentin、Twist、Snail、MMP-9)的相對(duì)mRNA表達(dá)量分別為1.11±0.13、0.26±0.04、0.38±0.06、1.11±0.04、0.41±0.03,相應(yīng)地采用WB方法驗(yàn)證以上Maker的表達(dá)變化情況,我們所得到的驗(yàn)證結(jié)論就是TACC3和EMT相關(guān)(E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9)蛋白的相對(duì)灰度值分別為1.08±0.06、0.17±0.04、0.07±0.01、0.14±0.01、0.35±0.13。細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)膀胱T24細(xì)胞24h修復(fù)率,結(jié)果示TACC3-shRNA可抑制T24細(xì)胞的遷移達(dá)(25.50±0.9609)%(24h);Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)膀胱T24細(xì)胞的侵襲程度變化,結(jié)果示光鏡下平均視野下control組、NC組及shRNA組的平均侵襲細(xì)胞數(shù)分別為326.8±14.09、311.3±8.664及143.3±10.62,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:TACC3在膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞系中高表達(dá),體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)通過誘導(dǎo)膀胱癌T24細(xì)胞的EMT的發(fā)生,導(dǎo)入構(gòu)建的干擾效率為90.5%的pYr-LVX-TACC3-shRNA質(zhì)粒,下調(diào)TACC3的表達(dá)后,膀胱癌T24細(xì)胞的遷移和侵襲能力下降。提示TACC3可能通過調(diào)節(jié)EMT的發(fā)生來(lái)抑制膀胱癌的遷移和侵襲能力,這在膀胱尿路上皮癌中發(fā)揮不可或缺的內(nèi)在作用。并有可能成為膀胱癌基因靶向治療的重要指標(biāo),同時(shí)為膀胱癌的新療法提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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1 范瓊;鮑偉;楊婷婷;劉小奕;吳丹;;Twist、E-cadherin、N-cadherin在宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

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本文編號(hào)：1325858