本文關(guān)鍵詞：Glypican-3適配子對肝癌診斷價值的研究　出處：《南昌大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景與目的:肝癌的篩查性診斷主要依賴甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)及影像學(xué)檢查,但效果不理想。30%~40%肝癌患者血清AFP呈陰性,小肝癌多為AFP陰性肝癌,且影像學(xué)診斷具有一定的困難。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)在肝癌組織呈特異性高表達(dá),并可釋放入血作為肝癌標(biāo)志物,對肝癌的篩查性診斷可能具有良好的應(yīng)用價值。目前一般采用免疫學(xué)方法測定血清GPC3水平,因其檢測敏感性差而難以臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用。適配子是生物分子的人工核酸配體,具有與靶標(biāo)高特異性、高親和力結(jié)合的特點,用于疾病診斷具有良好的應(yīng)用前景。本課題組在前期研究中通過指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)成功篩選出一批GPC3適配子,并建立了基于熒光分析的適配子診斷應(yīng)用技術(shù)。本研究將在前期工作基礎(chǔ)上進一步評價這些適配子在肝癌診斷中的價值,以期為肝癌的診斷開辟新途徑。方法:1.血清標(biāo)本及臨床資料收集:收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013~2014年就診的原發(fā)性肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者及參加健康體檢的正常人血清標(biāo)本,-80℃保存?zhèn)溆谩Ｊ占ㄐ詣e、年齡、肝功能、血清腫瘤標(biāo)志物、影像學(xué)檢查、病理檢查等臨床資料。2.GPC3適配子對肝癌診斷價值的初篩分析:人工合成20個GPC3適配子,將它們分別與肝癌、肝硬化血清標(biāo)本各48例孵育,測定孵育前后的熒光值,通過受試者工作特征(Receiver operator characteristic,ROC)曲線評價單項熒光指標(biāo)和多項熒光指標(biāo)Logistic回歸建模對肝癌的診斷價值,優(yōu)選2個對肝癌診斷價值最佳的適配子進行后續(xù)研究。3.GPC3適配子診斷肝癌的實驗條件優(yōu)化:以不同的適配子用量和核酸染料用量組合成6種實驗條件,在各種條件下將優(yōu)選出的2個GPC3適配子分別與肝癌、肝硬化血清標(biāo)本各32例孵育,測定孵育前后的熒光值,ROC曲線評價各條件下適配子對肝癌診斷的價值,以診斷價值最大者為最佳實驗條件。4.適配子對肝癌診斷價值的評價:在最佳實驗條件下,用優(yōu)選出的2個適配子分別與小樣本肝癌、肝硬化血清標(biāo)本(各80例)孵育,測定孵育前后的熒光值,roc曲線分析單指標(biāo)及多指標(biāo)logistic回歸分析建模對肝癌的診斷價值。將單指標(biāo)roc曲線下面積(areaunderroccurve,auroc)達(dá)到0.8、多指標(biāo)達(dá)0.9以上的適配子擴大樣本量及樣本類型進行分析(肝癌、肝硬化、肝炎和正常血清標(biāo)本例數(shù)各100例以上)。roc曲線分析單項熒光指標(biāo)、多項熒光指標(biāo)logistic回歸建模、適配子聯(lián)合聯(lián)合建模對肝癌的診斷價值,并計算適配子對肝癌的診斷效率(敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、預(yù)測值和似然比)。5.血清gpc3的elisa檢測及診斷價值評價:以商業(yè)化的人gpc3的酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)檢測試劑盒同步檢測肝癌、肝硬化各80例血清標(biāo)本中的gpc3濃度,評價其對肝癌診斷價值。6.血清腫瘤標(biāo)志物對肝癌的診斷價值:收集各標(biāo)本的血清afp、cea、ca125和ca19-9檢測結(jié)果,roc曲線評價標(biāo)志物單項和聯(lián)合分析對肝癌的診斷價值。結(jié)果:1.gpc3適配子對肝癌診斷價值的初篩結(jié)果及適配子檢測肝癌的最優(yōu)條件:20個適配子中,9個適配子單項熒光指標(biāo)診斷肝癌的最大auroc達(dá)0.8以上;16個適配子多項熒光指標(biāo)聯(lián)合分析診斷肝癌的auroc達(dá)0.9以上,其中ap-gpc3-13、ap-gpc3-27兩個適配子的auroc分別為0.999與0.995,為優(yōu)選適配子。兩個優(yōu)選適配子ap-gpc3-13、ap-gpc3-27在適配子及核酸染料用量分別在0.3pmol、2.5μl及0.5pmol、2.5μl條件下診斷肝癌的價值最大,為最佳條件。2.gpc3適配子對肝癌的診斷價值:小樣本血清標(biāo)本(肝癌、肝硬化各80例)分析上述2個優(yōu)選適配子對肝癌診斷價值,最佳單指標(biāo)auroc分別為0.852及0.884,優(yōu)于afp;多指標(biāo)聯(lián)合分析auroc均為0.9以上,明顯優(yōu)于afp。擴大樣本(肝癌、肝硬化、肝炎和正常血清分別為144、158、126、100例,肝硬化、慢性肝炎與正常合并為非肝癌組)評價2個適配子對肝癌的診斷價值,最佳單指標(biāo)診斷肝癌與非肝癌的AUROC為0.75左右,多指標(biāo)聯(lián)合檢測為0.9左右。2個適配子聯(lián)合分析診斷肝癌與非肝癌的AUROC、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度均達(dá)0.9以上,優(yōu)于單一適配子。在55例小肝癌(≤3cm)中,兩個適配子的檢測陽性率分別為63.6%和49.1%,高于AFP(43.6%);兩者聯(lián)合分析陽性率進一步提高,達(dá)74.5%。在68例AFP陰性肝癌,兩個適配子的檢測陽性率分別為70.6%和69.1%,兩者聯(lián)合分析達(dá)83.8%。3.ELISA檢測血清GPC3對肝癌的診斷價值:肝癌組的血清GPC3水平為1.22±3.07ng/m L,肝硬化組的血清GPC3水平為1.36±3.35ng/m L,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,診斷肝癌的AUROC為0.575。4.腫瘤標(biāo)志物對肝癌的診斷價值:在4組血清標(biāo)本中,只有AFP對肝癌具有一定的診斷價值,診斷肝癌與非肝癌的AUROC為0.761,其他腫瘤標(biāo)志物(CEA、CA125、CA199)無明顯診斷價值,4種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合診斷肝癌的AUROC無明顯增加。結(jié)論:1.GPC3適配子對肝癌具有良好的診斷價值,明顯優(yōu)于血清GPC3和AFP檢測對肝癌的診斷價值。2.GPC3適配子對小肝癌和AFP陰性肝癌也有良好的診斷價值。3.適配子聯(lián)合檢測分析能進一步提高其對包括小肝癌和AFP陰性肝癌在內(nèi)的肝癌診斷價值。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1323018