本文關(guān)鍵詞：Neuropilin-1在胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS中的表達(dá)與作用　出處：《華北理工大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的通過(guò)脂質(zhì)體Lip-2000轉(zhuǎn)染神經(jīng)纖毛蛋白-1(NRP-1)的干擾RNA(siRNA),使人胃腺癌細(xì)胞株AGS中神經(jīng)纖毛蛋白-1的mRNA沉默,進(jìn)而觀察NRP-1對(duì)胃癌細(xì)胞株一系列生物學(xué)行為的影響,為研究一種以NRP-1為靶點(diǎn)的新型靶向藥物治療胃癌提供必要的理論依據(jù)。方法常規(guī)培養(yǎng)胃癌細(xì)胞株AGS,嚴(yán)格按照siRNA的使用說(shuō)明進(jìn)行操作,首先通過(guò)脂質(zhì)體Lip-2000轉(zhuǎn)染NRP-1的熒光干擾RNA至AGS細(xì)胞株中,48小時(shí)后在熒光顯微鏡下觀察AGS細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染效率達(dá)60%以上即可認(rèn)為轉(zhuǎn)染成功;通過(guò)脂質(zhì)體Lip-2000將不同的物質(zhì)轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞株AGS中,將胃癌細(xì)胞株分為三個(gè)不同組別,即轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染siRNA)、無(wú)意義序列組(轉(zhuǎn)染siRNA的無(wú)意義序列)和空白對(duì)照組(轉(zhuǎn)染緩沖劑PBS)。首先繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR分別檢測(cè)三組中NRP-1的mRNA的相對(duì)表達(dá)量;免疫細(xì)胞化學(xué)法分別檢測(cè)三組細(xì)胞中ki-67蛋白的表達(dá)情況;MTT分別測(cè)定三組的增殖情況;流式細(xì)胞儀分別測(cè)定三組的細(xì)胞周期;Transwell小室實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)三組的侵襲和遷徙能力。結(jié)果1 RT-PCR結(jié)果顯示:將NRP1-siRNA轉(zhuǎn)染入AGS細(xì)胞后(通過(guò)脂質(zhì)體),轉(zhuǎn)染組NRP-1 mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組顯著下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2根據(jù)免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行判定,轉(zhuǎn)染NRP1-si RNA組的胃癌AGS細(xì)胞組與對(duì)照組比較,ki-67蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 MTT法顯示:轉(zhuǎn)染組的胃癌AGS細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染組胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)周期出現(xiàn)抑制,停滯在Gl期,較對(duì)照組顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5小室遷徙實(shí)驗(yàn)表明:轉(zhuǎn)染組的胃癌AGS細(xì)胞遷徙能力顯著下降,與對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6小室侵襲實(shí)驗(yàn)表明:轉(zhuǎn)染組的胃癌AGS細(xì)胞侵襲能力顯著下降,與對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1應(yīng)用RNAi技術(shù),設(shè)計(jì)并合成針對(duì)NRP-1的si RNA,轉(zhuǎn)染后能有效的下調(diào)AGS細(xì)胞NRP-1 mRNA的表達(dá)。2胃癌AGS細(xì)胞經(jīng)NRP1-siRNA轉(zhuǎn)染后,ki-67蛋白的表達(dá)量顯著下降,細(xì)胞增殖能力明顯下降,細(xì)胞停滯于G1期。3胃癌AGS細(xì)胞經(jīng)NRP1-siRNA轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞的遷徙、侵襲能力顯著下降,惡性生物學(xué)行為受到抑制。4 NRP-1在胃癌細(xì)胞中影響細(xì)胞的一系列生物學(xué)行為,為NRP-1成為新的胃癌治療靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ),具有潛在的臨床應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1319216