本文關鍵詞：抗甲狀腺髓樣癌人源單鏈抗體的篩選及在荷瘤裸鼠模型中的放射免疫顯像研究　出處：《重慶醫(yī)科大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:從大容量甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)人源單鏈抗體(single chain variable fragments,scFv)庫中篩選出特異性抗MTC單鏈抗體,131I標記,研究荷瘤裸鼠131I-scFv放射免疫顯像(radioimmunoimaging,RII)特點。方法:對抗甲狀腺髓樣癌細胞單鏈抗體庫展開了5輪循環(huán)富集,篩選出的陽性克隆感染E.coli HB 2151;誘導該抗體可溶性表達并純化抗體;SDS-PAGE和Western blot檢測抗體表達和相對分子質(zhì)量;ELISA檢測可溶性scFv的特異性和免疫活性;四甲基偶氮唑鹽比色分析法分別測定設置每組的吸光度(OD值),計算細胞抑制率。氯胺T法對可溶性scFv行131I標記并進行純化,三氯醋酸沉淀法測定標記率,標記抗體的放射化學純度、室溫及血清穩(wěn)定性由紙層析法測定。建荷MTC細胞(TT細胞)裸鼠,注射131I-sc Fv,分析131I-sc Fv在裸鼠體內(nèi)分布情況,并于注射藥物12、24、48、72 h行SPECT正位靜態(tài)顯像,當腫瘤組織顯像符合要求時行SPECT/CT融合圖像。結果:經(jīng)5輪篩選,特異抗體明顯富集。SDS-PAGE、Western blot結果顯示MTC特異性抗體分子量為28 kD左右。ELISA結果顯示,TT細胞(人甲狀腺髓樣癌細胞)組的OD值(0.41±0.12)較SW 480細胞(人結腸癌細胞)組(0.20±0.03)、TEC細胞(人甲狀腺上皮細胞)組(0.13±0.01)、PBS空白對照組(0.07±0.01)明顯增加(P=0.000)。MTT法結果顯示,TT細胞組和SW 480細胞組在scFv濃度為0.1、1、10μmol/L時,兩組細胞株間抑制率有統(tǒng)計學意義,在scFv濃度為10μmol/L時,對TT細胞有最高的抑制率(0.59±0.15)%�？贵w標記率為(78.60±0.08)%,放化純度為(87.10±0.78)%,各個時間點的放化純度均在90%以上。荷瘤裸鼠體內(nèi)研究結果顯示,131I-scFv的放射性瘤/血、瘤/肌肉比值在48 h時為最高。RII顯示,48 h時腫瘤組織與全身組織顯像對比最為清楚,此時融合圖像較清楚顯示腫瘤部位的放射性濃聚情況。結論:利用噬菌體抗體庫技術成功獲得了抗MTC人源單鏈抗體,標記后該抗體生物活性較高,荷瘤裸鼠行RII結果較好。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R-332;R736.1

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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3 吳淑燕;王響英;楊剛;李蘇安;黃瑞;;小鼠髓系樹突狀細胞的體外擴增和超微結構[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年05期

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本文編號：1314166