本文關(guān)鍵詞：抗甲狀腺髓樣癌人源單鏈抗體的篩選及在荷瘤裸鼠模型中的放射免疫顯像研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:從大容量甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)人源單鏈抗體(single chain variable fragments,scFv)庫中篩選出特異性抗MTC單鏈抗體,131I標(biāo)記,研究荷瘤裸鼠131I-scFv放射免疫顯像(radioimmunoimaging,RII)特點(diǎn)。方法:對抗甲狀腺髓樣癌細(xì)胞單鏈抗體庫展開了5輪循環(huán)富集,篩選出的陽性克隆感染E.coli HB 2151;誘導(dǎo)該抗體可溶性表達(dá)并純化抗體;SDS-PAGE和Western blot檢測抗體表達(dá)和相對分子質(zhì)量;ELISA檢測可溶性scFv的特異性和免疫活性;四甲基偶氮唑鹽比色分析法分別測定設(shè)置每組的吸光度(OD值),計(jì)算細(xì)胞抑制率。氯胺T法對可溶性scFv行131I標(biāo)記并進(jìn)行純化,三氯醋酸沉淀法測定標(biāo)記率,標(biāo)記抗體的放射化學(xué)純度、室溫及血清穩(wěn)定性由紙層析法測定。建荷MTC細(xì)胞(TT細(xì)胞)裸鼠,注射131I-sc Fv,分析131I-sc Fv在裸鼠體內(nèi)分布情況,并于注射藥物12、24、48、72 h行SPECT正位靜態(tài)顯像,當(dāng)腫瘤組織顯像符合要求時(shí)行SPECT/CT融合圖像。結(jié)果:經(jīng)5輪篩選,特異抗體明顯富集。SDS-PAGE、Western blot結(jié)果顯示MTC特異性抗體分子量為28 kD左右。ELISA結(jié)果顯示,TT細(xì)胞(人甲狀腺髓樣癌細(xì)胞)組的OD值(0.41±0.12)較SW 480細(xì)胞(人結(jié)腸癌細(xì)胞)組(0.20±0.03)、TEC細(xì)胞(人甲狀腺上皮細(xì)胞)組(0.13±0.01)、PBS空白對照組(0.07±0.01)明顯增加(P=0.000)。MTT法結(jié)果顯示,TT細(xì)胞組和SW 480細(xì)胞組在scFv濃度為0.1、1、10μmol/L時(shí),兩組細(xì)胞株間抑制率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在scFv濃度為10μmol/L時(shí),對TT細(xì)胞有最高的抑制率(0.59±0.15)%�？贵w標(biāo)記率為(78.60±0.08)%,放化純度為(87.10±0.78)%,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的放化純度均在90%以上。荷瘤裸鼠體內(nèi)研究結(jié)果顯示,131I-scFv的放射性瘤/血、瘤/肌肉比值在48 h時(shí)為最高。RII顯示,48 h時(shí)腫瘤組織與全身組織顯像對比最為清楚,此時(shí)融合圖像較清楚顯示腫瘤部位的放射性濃聚情況。結(jié)論:利用噬菌體抗體庫技術(shù)成功獲得了抗MTC人源單鏈抗體,標(biāo)記后該抗體生物活性較高,荷瘤裸鼠行RII結(jié)果較好。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R-332;R736.1

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 胡小麗;王政杰;龐華;;人源甲狀腺髓樣癌噬菌體抗體庫的構(gòu)建及初步鑒定[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

2 李淑杰;羅弋;龐華;李少林;;~(131)I標(biāo)記抗Peroxiredoxin I肺腺癌噬菌體抗體在荷瘤裸鼠體內(nèi)的分布及其對腫瘤生長的抑制作用[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年10期

3 吳淑燕;王響英;楊剛;李蘇安;黃瑞;;小鼠髓系樹突狀細(xì)胞的體外擴(kuò)增和超微結(jié)構(gòu)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年05期

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本文編號：1314166