本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤耐藥相關(guān)基因dync2h1表達(dá)調(diào)控研究　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景和目的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma,GBM)是顱內(nèi)最常見(jiàn)且惡性程度最高的原發(fā)性腫瘤,2005年Stupp報(bào)道GBM中位生存期為14.6個(gè)月,2年生存率26.5%,總體來(lái)說(shuō)預(yù)后不佳。腫瘤細(xì)胞對(duì)術(shù)后標(biāo)準(zhǔn)放化療的抵抗是導(dǎo)致預(yù)后不佳的主要原因之一。既往研究認(rèn)為O6-甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase, MGMT)作為一種DNA修復(fù)酶,能夠?qū)MZ等烷化劑造成的DNA分子中鳥(niǎo)嘌呤06位上增加的烷基轉(zhuǎn)移至MGMT酶自身第145位半胱氨酸殘基上,從而使得鳥(niǎo)嘌呤結(jié)構(gòu)復(fù)原,DNA分子結(jié)構(gòu)和功能修復(fù),保護(hù)GBM腫瘤細(xì)胞免受替莫唑胺(Temozolomide, TMZ)的損害。MGMT啟動(dòng)子甲基化后MGMT酶表達(dá)的沉默能使GBM患者預(yù)后更好,對(duì)TMZ敏感性更佳。但臨床上仍然有一些MGMT低表達(dá)或者不表達(dá)的腫瘤仍然具有很強(qiáng)的TMZ抵抗性,這提示我們除了MGMT酶這種耐藥機(jī)制外,仍然存在其他的耐TMZ機(jī)制。細(xì)胞質(zhì)動(dòng)力蛋白2重鏈1(Dynein-cytoplasmic 2-heavy chain 1, DYNC2H1,或被成為DHC2),主要參與有絲分裂時(shí)染色體的分離過(guò)程,胚胎時(shí)期神經(jīng)元的分化以及細(xì)胞內(nèi)小泡和各種膜結(jié)合細(xì)胞器的微管逆向運(yùn)輸。在前期研究中我們發(fā)現(xiàn)TMZ可以將U87細(xì)胞系的細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,誘導(dǎo)大量細(xì)胞死亡。但在TMZ刺激下仍然存在少量存活細(xì)胞,并且它們對(duì)TMZ的敏感性開(kāi)始下降,細(xì)胞形態(tài)也出現(xiàn)一些顯著性細(xì)胞形態(tài)改變可重復(fù)改變,如大核大胞體,細(xì)長(zhǎng)凸起以及細(xì)胞骨架的重排。我們認(rèn)為細(xì)胞骨架的重排可能是導(dǎo)致GBM細(xì)胞對(duì)TMZ敏感性下降的原因,這種細(xì)胞骨架的重排同時(shí)伴隨著一些與細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)的蛋白表達(dá)的上調(diào),其中DHC2引起了我們的重視。DHC2的表達(dá)可以被TMZ刺激所誘導(dǎo),并且這種誘導(dǎo)在TMZ刺激U87細(xì)胞后早期(1周)即開(kāi)始出現(xiàn)。當(dāng)細(xì)胞中DHC2表達(dá)量被TMZ刺激上調(diào)的同時(shí),細(xì)胞出現(xiàn)上述細(xì)胞形態(tài)改變以及細(xì)胞骨架的重排。通過(guò)干擾DHC2蛋白的表達(dá)或使用細(xì)胞松弛素D(Cytochalasin D, CCD)聯(lián)合TMZ破壞細(xì)胞骨架的重排確實(shí)能增加GBM細(xì)胞對(duì)TMZ的敏感性。這些研究結(jié)果提示我們可以通過(guò)使用以靶向DHC2通路上重要分子的TMZ增敏劑與TMZ聯(lián)合使用來(lái)增加GBM細(xì)胞對(duì)TMZ的敏感性,增強(qiáng)GBM療效。但是,TMZ是怎樣通過(guò)上調(diào)細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白DHC2的表達(dá)來(lái)增加GBM細(xì)胞對(duì)TMZ耐藥的的具體分子生物學(xué)機(jī)制尚不是十分清楚。真核生物基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的基本環(huán)節(jié)包括了染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的重塑、轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄延伸的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后加工的調(diào)控以及mRNA水平的調(diào)控和細(xì)胞質(zhì)定位的調(diào)控,每一個(gè)環(huán)節(jié)都受到了嚴(yán)密地控制,這種調(diào)控并不是由單一因素來(lái)起作用,而是由多種影響因素參與,并且相互影響,形成了一個(gè)巨大復(fù)雜但是高度有序的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。在這其中,轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控是真核生物基因激活的前提,也是最重要的第一步。其本質(zhì)就是DNA-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用。以生物素-鏈親和素系統(tǒng)、磁珠分離技術(shù)為基礎(chǔ)的DNA pull down技術(shù)就是在轉(zhuǎn)錄起始水平上研究基因表達(dá)調(diào)控,特別是啟動(dòng)子表達(dá)調(diào)控最合適的方式。本研究通過(guò)DNA pull down實(shí)驗(yàn),利用生物素-鏈親和素技術(shù)和磁珠分離技術(shù),成功篩選出與U87細(xì)胞dync2hl啟動(dòng)子區(qū)域相互作用的蛋白,經(jīng)過(guò)進(jìn)一步質(zhì)譜鑒定和生物信息學(xué)分析來(lái)確定調(diào)控DHC2表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子,并通過(guò)后續(xù)功能試驗(yàn)初步驗(yàn)證篩選轉(zhuǎn)錄因子對(duì)dync2hl表達(dá)調(diào)控的真實(shí)情況以及對(duì)U87細(xì)胞TMZ敏感性的影響,旨在為GBM治療提供候選靶點(diǎn)。研究?jī)?nèi)容和方法1.胞核提取物以及末端帶biotin標(biāo)記的dync2h1啟動(dòng)子探針的制備持續(xù)應(yīng)用200uM TMZ使用液刺激U87細(xì)胞,誘導(dǎo)其出現(xiàn)TMZ刺激后特征性細(xì)胞形態(tài)改變后,采用蛋白核質(zhì)分離提取法提取并超濾置換為合適Buffer的胞核提取物。同樣采用蛋白核質(zhì)分離提取法提取含有0.125%DMSO的全培液培養(yǎng)的U87細(xì)胞,并超濾置換為合適Buffer的胞核提取物作為對(duì)照組。采用Western blot蛋白印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證核質(zhì)分離效果。通過(guò)互聯(lián)網(wǎng)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)查找dync2hl啟動(dòng)子區(qū)域,設(shè)計(jì)5'端帶生物素biotin的引物,將起始密碼子ATG上游1688bp序列利用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)全部擴(kuò)增,作為dync2hl啟動(dòng)子區(qū)域探針。2.篩選dync2hl啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合蛋白采用生物素-鏈親和素和磁珠篩選技術(shù)將兩組胞核提取物分別與帶Biotin標(biāo)記的dync2hl啟動(dòng)子區(qū)域探針混勻后室溫孵育,進(jìn)行DNA pull down實(shí)驗(yàn),采用不同鹽離子濃度分別洗脫蛋白。收集蛋白洗脫液進(jìn)行質(zhì)譜兼容凝膠硝酸銀銀染色,找出差異條帶,使用干凈的刀片切下銀染凝膠中肉眼觀察有差異的條帶,進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析,獲得所有差異條帶蛋白的肽指紋圖譜(Peptide Mass Fingerpriming, PMF),利用Mascot Distiller數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.matrixscience.com, MatrixSicence Ltd., London, UK)進(jìn)行肽指紋搜索,鑒定相關(guān)蛋白。采用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相關(guān)分子生物學(xué)功能的生物信息學(xué)分析,為下一步功能驗(yàn)證試驗(yàn)提供前期研究基礎(chǔ)和理論依據(jù)。轉(zhuǎn)錄因子之間往往不是單一作用,而是多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子依靠之間蛋白質(zhì)相互作用形成復(fù)合物后,協(xié)同調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄起始,所以我們同時(shí)采用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行對(duì)差異條帶蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用分析。3.檢驗(yàn)TMZ刺激下各蛋白基因表達(dá)情況采用Trizol法分別提取U87-TMZ刺激組和DMSO對(duì)照組細(xì)胞的總RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR來(lái)檢測(cè)所有啟動(dòng)子結(jié)合蛋白表達(dá)趨勢(shì)的變化、自身表達(dá)量的情況以及與DHC2表達(dá)趨勢(shì)變化的異同。將相關(guān)表達(dá)量明顯不符合轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞內(nèi)執(zhí)行激活基因轉(zhuǎn)錄任務(wù)的表達(dá)水平量的蛋白排除。4.干擾目標(biāo)蛋白后檢測(cè)dync2h1表達(dá)情況經(jīng)過(guò)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步質(zhì)譜鑒定和生物信息學(xué)分析鎖定目標(biāo)蛋白,通過(guò)寡核苷酸(Small interference RNA, siRNA)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染干擾目標(biāo)蛋白,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Quantitative PCR Detecting System reaction, qPCR)檢測(cè)siRNA干擾效率,明確干擾效率符合下一步實(shí)驗(yàn)要求后,通過(guò)qPCR檢測(cè)DHC2表達(dá)趨勢(shì)變化。5.干擾目標(biāo)蛋白后檢測(cè)細(xì)胞增殖變化和對(duì)TMZ敏感性變化表達(dá)通過(guò)寡核苷酸(Small interference RNA, siRNA)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染干擾目標(biāo)蛋白,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Quantitative PCR Detecting System reaction, qPCR)檢測(cè)siRNA干擾效率,明確干擾效率符合下一步實(shí)驗(yàn)要求后,采用CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TMZ刺激組、DMSO對(duì)照組、NC-DMSO組和NC-TMZ組,分別在基線、24h、48h、72h、4d、5d、6d等時(shí)間節(jié)點(diǎn)干擾后的細(xì)胞增殖變化,明確干擾目標(biāo)蛋白后對(duì)U87細(xì)胞TMZ敏感性的變化結(jié)果1.成功制備胞核提取物以及末端帶biotin標(biāo)記的dync2h2啟動(dòng)子探針。使用含有200uM TMZ使用液的全培養(yǎng)基刺激U87細(xì)胞1周后成功誘導(dǎo)出細(xì)胞典型形態(tài)改變,并持續(xù)維持200uM的TMZ劑量直至2周,U87-TMZ細(xì)胞模型制備成功,設(shè)置以含有0.125% DMSO的全培養(yǎng)基培養(yǎng)的U87細(xì)胞作為對(duì)照組。將核質(zhì)分離并置換buffer后的U87-TMZ組和對(duì)照組細(xì)胞胞核與胞漿提取物定量濃度,定量各組蛋白濃度分別為：TMZ組核提取液2.1ug/ul, TMZ組胞漿提取液4.8 ug/ul;對(duì)照組核提取液1.7ug/ul,對(duì)照組胞漿提取液3.2 ug/ul 。行Westernblot蛋白印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證核質(zhì)分離效果,確認(rèn)胞核提取液中胞漿蛋白的污染(GAPDH,146KD)以及胞漿提取液中胞核蛋白的污染(H3組蛋白,15KD)均在可以接受范圍。行兼容質(zhì)譜硝酸銀染色,結(jié)果可見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組胞漿和胞核提取物主要條帶均明顯不同,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間同樣也具有差異。核質(zhì)分離效果適合下一步實(shí)驗(yàn)條件。采用酚氯仿法提取U87細(xì)胞基因組DNA作為PCR模板,行1%瓊脂糖凝膠電泳PCR產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)一略大于10kb特異性條帶,無(wú)拖尾降解。實(shí)驗(yàn)采用全基因組DNA提取方法效果良好,所提取的DNA模板可進(jìn)一步用于擴(kuò)增帶biotin標(biāo)記的dync2hl啟動(dòng)子序列的PCR反應(yīng)。PCR擴(kuò)增dync2h1啟動(dòng)子序列區(qū)域完畢后,行1%瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)在marker 1600bp位置有一條特異性條帶,與預(yù)期一致。PCR擴(kuò)增的dync2h1啟動(dòng)子探針適合下一步實(shí)驗(yàn)條件。2.成功篩選dync2h1啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合蛋白。DN A pull down實(shí)驗(yàn)后,分別用不同鹽濃度洗脫液洗脫結(jié)合在磁珠啟動(dòng)子探針混合物上的蛋白,行12%SDS-PAGE凝膠電泳后,進(jìn)行質(zhì)譜兼容硝酸銀染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在低鹽濃度洗脫液(0.25mol/L)洗脫蛋白中,TMZ-U87組和DMSO作用的對(duì)照組之間可見(jiàn)13條差異條帶。在高鹽濃度(1mol/L)洗脫蛋白中,TMZ-U87組和DMSO作用的對(duì)照組之間可見(jiàn)6條差異條帶。4條條帶存在重合,一共存在17條差異蛋白,其中,大于180KD有2條;75KD-135KD之間有2條；63KD-75KD之間有1條；48KD-63KD之間有3條;35KD-48KD之間有3條；25KD-35KD之間有1條；17KD-25KD之間有3條；11KD-17KD之間有2條。使用事先用酒精洗干凈的刀片仔細(xì)將所有具有差異的條帶挖出,進(jìn)行質(zhì)譜分析。在獲得差異蛋白的胎指紋圖譜后,利用Mascot數(shù)據(jù)庫(kù)查詢獲得蛋白信息,分析其中肽段與蛋白的匹配序列,將評(píng)分較低的蛋白排除后,一共獲得11個(gè)蛋白,分別是HSPA8、PKM2、HNRNPK、ANXA2P2、ANXA2、HNRNPA2B1、 TPI1、PRDX1、PPIAL4B、PPIA、LGALS1。3.生物信息學(xué)分析鎖定HNRNPK、HNRNPA2B1、PKM2可能是dync2hl表達(dá)調(diào)控蛋白。行qPCR在TMZ刺激下檢測(cè)各蛋白基因以及dync2hl表達(dá)情況,結(jié)果提示：HSPA8、PRDX1、TPI1在TMZ刺激組和對(duì)照組均表達(dá)量過(guò)低(2-△Ct, X±s, PRDX1-TMZ:18.31±0.87;PRDX1-DMSO:17.95±0.71;HSPA8-TMZ:19.52±0.18; HSPA8-DMS0:28.39±0.67; TPI1-TMZ:15.17±0.37; TPI1-DMS0:14.90±0.91),不符合轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞內(nèi)執(zhí)行激活基因轉(zhuǎn)錄任務(wù)的表達(dá)水平量,予以排除。HNRNPK在TMZ刺激下(TMZ刺激組：0.1309±0.0174,DMSO對(duì)照組：0.0626±0.0377,p=0.046)表達(dá)輕微上調(diào);HNRNPA2B1在TMZ刺激下(TMZ刺激組：0.0372±0.0007,DMSO對(duì)照組：0.0597±0.0170,p=0.084)表達(dá)未見(jiàn)明顯差異；PKM2在TMZ刺激下(TMZ刺激組0.0013±0.00002,DMSO對(duì)照組0.0025±0.00006,p0.001)表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相關(guān)功能的生物信息學(xué)分析,查找具有DNA結(jié)合能力,并且既往文獻(xiàn)報(bào)道參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程的蛋白,我們將目標(biāo)鎖定在異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K, HNRNPK),異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A2/B1 (Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A2/B1,HNRNPA2B1),丙酮酸激酶同工酶M1/M2 (Pyruvate kinase isozymes M1/M2, PKM2,又稱(chēng)為PKM)這3種蛋白中。STRING數(shù)據(jù)庫(kù)提示HNRNPK、HNRNPA2B1、 PKM2這三種蛋白之間存在明確的相互作用。4.干擾HNRNPK后,dync2h1 mRNA水平明顯下降,干擾PKM2則呈現(xiàn)相反的趨勢(shì),而干擾HNRNPA2B1后dync2h1 mRNA水平無(wú)明顯變化。行qPCR在TMZ刺激下檢測(cè)各蛋白基因以及dync2h1表達(dá)情況,結(jié)果提示：干擾HNRNPK蛋白后,dync2h1表達(dá)量明顯下降(2-△ct,X±s,干擾組：0.002642±0.000367,NC組：0.004644±0.000143,P0.001),呈隨著HNRNPK蛋白的下調(diào)而下調(diào)的正向調(diào)控趨勢(shì)。干擾PKM2蛋白后,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上兩組dync2h1表達(dá)量顯著上升(2-△ct,X±s,干擾組：0.004657±0.000607,NC組：0.002637±0.000414,P=0.009),存在dync2hl表達(dá)量隨著PKM2蛋白的下調(diào)而上調(diào)的負(fù)向趨勢(shì)。干擾HNRNPA2B1 (2-△Ct, X±s,干擾組：0.003234±0.001297,NC組：0.003342±0.001368,P0.05),在統(tǒng)計(jì)學(xué)上兩組間dync2hl表達(dá)量未見(jiàn)明顯差異。因此我們推測(cè)HNRNPK 、 PKM2是在dync2h1啟動(dòng)子水平轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起主要作用的轉(zhuǎn)錄因子。5.干擾HNRNPK或PKM2均可降低U87細(xì)胞增殖,并增強(qiáng)U87細(xì)胞對(duì)TMZ敏感性。干擾HNRNPK后檢測(cè)細(xì)胞7天增殖情況,24小時(shí)以后直至第6天,干擾組細(xì)胞增殖明顯緩慢于NC對(duì)照組(p值均0.001),說(shuō)明干擾HNRNPK后能降低U87細(xì)胞的增殖。同時(shí),在干擾后24小時(shí)直至第6天,HNRNPK干擾組U87細(xì)胞在TMZ刺激下增殖明顯緩慢于NC-TMZ組(p值均0.001),說(shuō)明干擾HNRNPK后U87細(xì)胞對(duì)TMZ敏感性較NC組細(xì)胞對(duì)TMZ的敏感性增強(qiáng),U87細(xì)胞容易被TMZ誘導(dǎo)死亡。采用PKM2-siRNA 2#干擾PKM2后,從24小時(shí)以后直至第6天,干擾組細(xì)胞增殖明顯較NC對(duì)照組減慢(p值均0.001),說(shuō)明干擾PKM2降低了U87細(xì)胞的增殖能力。至刺激第6天,PKM2干擾組U87細(xì)胞在TMZ刺激下存活細(xì)胞數(shù)明顯少于NC-TMZ組(p值0.001),說(shuō)明干擾PKM2后U87細(xì)胞對(duì)TMZ敏感性較NC組細(xì)胞對(duì)TMZ的敏感性增強(qiáng),U87細(xì)胞變得易被TMZ誘導(dǎo)死亡。干擾效率較PKM2-siRNA 2#相對(duì)弱的PKM2-siRNA 1#干擾U87細(xì)胞后,出現(xiàn)與PKM2-siRNA 2#類(lèi)似的作用,干擾組細(xì)胞增殖較NC組稍減緩,但減緩程度稍輕(從24小時(shí)開(kāi)始至第5天,p值均0.001),在TMZ刺激后至刺激的第5天,干擾組存活細(xì)胞數(shù)與NC-TMZ組相比具有明顯差異(p值均0.001,刺激第6天差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p值0.05)。結(jié)論我們利用DNA pull down和質(zhì)譜技術(shù),將可能參與dync2hl表達(dá)調(diào)控的啟動(dòng)子結(jié)合蛋白識(shí)別鑒定出來(lái),通過(guò)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,將目標(biāo)蛋白鎖定在HNRNPK、HNRNPA2B1、PKM2這3種蛋白中。進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞功能驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),dync2hl的表達(dá)均能通過(guò)干擾HNRNPK、PKM2獲得表達(dá)的改變。干擾HNRNPK蛋白的表達(dá)后,U87細(xì)胞dync2hl表達(dá)隨之明顯下降,U87細(xì)胞的增殖也明顯下降,同時(shí)U87細(xì)胞對(duì)TMZ的敏感性增強(qiáng),使得細(xì)胞不易對(duì)TMZ產(chǎn)生抵抗。干擾PKM2后,dync2h1表達(dá)明顯上調(diào),但U87細(xì)胞的增殖能力降低,同時(shí)對(duì)TMZ的敏感性也增強(qiáng),不符合dync2h1介導(dǎo)的U87細(xì)胞對(duì)TMZ耐藥的機(jī)制中,PKM2負(fù)向調(diào)控dync2h1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄表達(dá)的過(guò)程,但可能還有別的影響因素或調(diào)控機(jī)制的存在,具體方式和機(jī)制需要進(jìn)一步研究。干擾HNRNPA2B1后,dync2h1表達(dá)未見(jiàn)明顯改變,HNRNPA2B1同樣可能并不參與dync2h1啟動(dòng)子的表達(dá)調(diào)控。結(jié)合生物信息學(xué)分析和以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們認(rèn)為參與介導(dǎo)U87細(xì)胞對(duì)TMZ抵抗的dync2h1蛋白啟動(dòng)子水平表達(dá)調(diào)控過(guò)程的主要轉(zhuǎn)錄因子可能是HNRNPK。在TMZ的持續(xù)刺激下,U87細(xì)胞中HNRNPK通過(guò)上調(diào)其表達(dá),導(dǎo)致其與dync2hl啟動(dòng)子結(jié)合增多,促進(jìn)了DHC2表達(dá),從而誘導(dǎo)U87細(xì)胞典型形態(tài)學(xué)改變、細(xì)胞骨架重排以及對(duì)TMZ抵抗等一系列細(xì)胞學(xué)功能變化。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41

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3 劉向輝;張之營(yíng);李鴻源;申斌;;顱內(nèi)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的術(shù)前診斷[J];山東醫(yī)藥;2008年36期

4 周及彤;王士杰;周建;;原發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤1例分析[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2008年10期

5 劉維生;肖新如;王碩;;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中腦組織特異性血管生成抑制因子1的研究進(jìn)展[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2008年01期

6 楊培業(yè);膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的放射線治療[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料.神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊(cè);1976年05期

7 吳超權(quán);膠質(zhì)母細(xì)胞瘤放射抵抗的可能解釋[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床放射學(xué)分冊(cè));1984年03期

8 周東,馬大程,郭京,黃輝;7例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[J];中國(guó)腫瘤臨床與康復(fù);1998年S1期

9 白茫茫,張劍寧,章翔;炎性肉芽腫轉(zhuǎn)變?yōu)槟z質(zhì)母細(xì)胞瘤1例[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年01期

10 秦德興,墨浩,歐廣飛,宋永文,康恭禮,胡郁華,谷銑之;腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤放化療療效觀察[J];中華腫瘤雜志;2001年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃丙倉(cāng);耿道穎;紀(jì)毅敏;李郁新;朱莉;尹波;鮑奕仿;;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤磁共振成像的一個(gè)重要征象——“絲瓜瓤樣壞死征”[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國(guó)放射學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2009年

2 顧金海;李剛;蘇雨行;申杰;李蓉暉;賀峭偉;鄧林;;STAT3 Decoy ODN抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤增殖實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 秦立森;梁徑山;石瓊;于如同;;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中強(qiáng)化與壞死比例與信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)性的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

4 熊劍;章翔;程光;林洪;費(fèi)舟;;Ardipusilloside Ⅰ誘導(dǎo)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的研究[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第六屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2011年

5 張成龍;李康印;郝曉東;陳虎義;高崎煒;強(qiáng)海霞;;兒童多發(fā)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤一例[A];2005年全國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)會(huì)議西部論壇論文匯編[C];2005年

6 顏偉;張偉;游贛;王永志;劉彥偉;楊沛;江濤;;甲基鳥(niǎo)嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白表達(dá)和促進(jìn)甲基化在中國(guó)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中的臨床關(guān)系[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

7 江濤;陳寶師;袁芳;李桂林;李少武;邱曉光;王忠誠(chéng);;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤臨床治療經(jīng)驗(yàn)[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第二屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2007年

8 鄭秀玨;黃欣;李谷;曹飛;龔江標(biāo);;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤術(shù)后同步放化療的臨床分析[A];2009年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

9 路翠平;;四十例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤術(shù)后護(hù)理體會(huì)[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

10 賀虎;李明武;牛朝詩(shī);;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞能夠分化為內(nèi)皮細(xì)胞以促進(jìn)腫瘤血管生成[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 匡遠(yuǎn)深;治療首次術(shù)后腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 放化療同步優(yōu)于單純放療[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

2 吳劍鵬;南方醫(yī)院牽手多家醫(yī)院聯(lián)合開(kāi)展膠質(zhì)母細(xì)胞瘤研究[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

3 煒聞;Avastin獲準(zhǔn)用于治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

4 谷文;FDA批準(zhǔn)Avastin 用于治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

5 王小龍;一種化合物可引發(fā)癌細(xì)胞“自爆”[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

6 孫行之邋(編譯);抵御腫瘤,疫苗將成為利器[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2008年

7 Tracy Staton 編譯 石軍;羅氏公開(kāi)數(shù)據(jù)證“有效”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 岳琪;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的預(yù)后作用及分化機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 陳鑫;CKS2在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的影響和機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 呂磊;阿西替尼對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及其腫瘤干細(xì)胞治療作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

4 周濟(jì);NTS/NTR1信號(hào)對(duì)人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞自我更新及侵襲能力的影響及機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 李紅偉;KAP調(diào)節(jié)ROCK2和Cdk2在RNA激活的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲途徑[D];鄭州大學(xué);2014年

6 劉永良;沉默STAT5b的表達(dá)對(duì)人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251細(xì)胞增殖抑制及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

7 紀(jì)祥軍;Nrf2在人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生成中的作用研究[D];南京大學(xué);2013年

8 阮健;MicroRNA-181c對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的抑制作用及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

9 姚軼群;RPS15A通過(guò)AKT調(diào)控細(xì)胞周期促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、遷移的體內(nèi)和體外研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

10 呂秀鵬;體細(xì)胞MCL-1基因突變對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病機(jī)理的影響及其機(jī)制的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉婷婷;AQP4在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)展中的作用[D];安徽大學(xué);2016年

2 陳枉枉;MicroRNA-205靶向調(diào)控FRAT1抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

3 鄒佳華;組蛋白乙�；窴AT8在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制研究[D];西南大學(xué);2016年

4 龐毅;Ars2對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的調(diào)控研究[D];西南大學(xué);2016年

5 蔡康;活體成像系統(tǒng)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生長(zhǎng)中的評(píng)估作用[D];暨南大學(xué);2016年

6 劉鈺罡;Fucoxanthin治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及其分子機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

7 陳子陽(yáng);膠質(zhì)母細(xì)胞瘤耐藥相關(guān)基因dync2h1表達(dá)調(diào)控研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 王娜;TRIM44在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

9 王文濤;EPO通過(guò)Akt通路促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體外快速增殖的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

10 杜池剛;擴(kuò)散因子受體對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤復(fù)發(fā)影響的相關(guān)研究[D];山東大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：1312338