本文關(guān)鍵詞：不同HER-2水平的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞內(nèi)miRNAs表達(dá)譜及相關(guān)miRNAs對癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：背景:表皮生長因子受體包含有多個不同類型的受體,含有膜酪氨酸激酶活性的人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)屬于其中。當(dāng)HER-2基因被激活,可導(dǎo)致細(xì)胞增生活躍和阻礙細(xì)胞的凋亡,這為腫瘤在乳腺癌中的發(fā)展提供主要的驅(qū)動力。一類內(nèi)源性的、保守的、非編碼的、蛋白單鏈小RNA(約含有22個核苷酸),稱微小RNAs(Micro RNAs,mi RNAs)。mi RNAs主要通過腫瘤生物學(xué)如細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)移等方面調(diào)節(jié)細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展。目前,mi RNAs既可作為癌基因又可作為抑癌基因參與細(xì)胞的調(diào)控。近些年有關(guān)HER-2和mi RNAs之間的報道日益增多,其中有些研究提示乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與HER-2的過表達(dá)和mi RNAs的失調(diào)相關(guān)聯(lián)。因此關(guān)于探究mi RNAs和HER-2之間的聯(lián)系極為重要。目的:通過對比觀察人乳腺癌MCF-7細(xì)胞和MCF-7穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HER-2(MCF-7/HER-2)細(xì)胞中mi RNAs的表達(dá)差異,初步篩選出與HER-2表達(dá)相關(guān)的mi RNAs表達(dá)譜,為mi RNAs通過參與HER-2信號通路從而參與調(diào)控乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制提供研究基礎(chǔ)。方法:(1)本研究采用mi RNAs芯片技術(shù),培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞和MCF-7/HER-2細(xì)胞,檢測兩株細(xì)胞內(nèi)mi RNAs的表達(dá),以MCF-7細(xì)胞為基準(zhǔn),篩選出與HER-2表達(dá)相關(guān)且差異大于兩倍的mi RNAs。(2)選取MCF-7/HER-2細(xì)胞較MCF-7細(xì)胞上調(diào)的hsa-mi R-181a-5p和下調(diào)的hsa-mi R-877-3p為對象,采取實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)驗(yàn)證其在MCF-7細(xì)胞和MCF-7/HER-2細(xì)胞中的表達(dá)量。(3)選取MCF-7/HER-2細(xì)胞,分別轉(zhuǎn)染hsa-mi R-181a-5p阻遏物(mi R-181a-5p ASO)和hsa-mi R-877-3p模擬物(mi R-877-3p mimic),通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),MTT實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞功能學(xué)的改變。(4)運(yùn)用生物信息學(xué)方法對這兩個mi RNAs可能的靶基因進(jìn)行預(yù)測。結(jié)果:(1)利用mi RNAs微陣列,篩選獲得217個與HER-2相關(guān)的mi RNAs,其中MCF-7/HER-2細(xì)胞較MCF-7細(xì)胞上調(diào)的mi RNAs有123個,下調(diào)的mi RNAs有94個。(2)q RT-PCR結(jié)果顯示,MCF-7/HER-2細(xì)胞與MCF-7細(xì)胞相比,hsa-mi R-181a-5p的表達(dá)顯著上調(diào),hsa-mi R-877-3p的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01)。(3)hsa-mi R-181a-5p對HER-2陽性乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移的活性有促進(jìn)作用,hsa-mi R-877-3p對HER-2陽性乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移的活性有抑制作用。結(jié)論:(1)MCF-7細(xì)胞和MCF-7/HER-2細(xì)胞mi RNAs的表達(dá)有差異。(2)hsa-mi R-181a-5p的表達(dá)在MCF-7/HER-2細(xì)胞中較MCF-7細(xì)胞表達(dá)顯著上調(diào)。在HER-2陽性的乳腺癌細(xì)胞中hsa-mi R-181a-5p可促進(jìn)細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。(3)hsa-mi R-877-3p的表達(dá)在人乳腺癌細(xì)胞MCF-7/HER-2中較MCF-7表達(dá)顯著下調(diào)。在HER-2陽性的乳腺癌細(xì)胞中hsa-mi R-877-3p可抑制細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 王艷;吳強(qiáng);胡向陽;吳正升;黃金;;不同侵襲力乳腺癌細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜檢測[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年03期

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本文編號：1305629